不同饲料对花绒寄甲生长发育、繁殖和成虫肠道细菌群落的影响

【目的】花绒寄甲Dastarcus helophoroides目前已实现室内人工饲养扩繁,然而,不同配方饲料对花绒寄甲成虫及后代生长发育影响显著。根据花绒寄甲成虫在野外条件下食物来源配制的人工饲料,是否适用于现阶段长期室内饲养种群生长发育有待进一步研究。本研究旨在探讨不同饲料对花绒寄甲生长发育、繁殖以及成虫肠道细菌群落的影响,为优化饲料配方提供理论基础。【方法】配制6种不同配方饲料[干酵母10 g+蔗糖3 g+琼脂3 g+冻干蛋黄粉9 g+纯净水40 mL(Ⅰ)、木粉5 g+干酵母10 g+蔗糖3 g+琼脂3 g+冻干蛋黄粉9 g+纯净水35 mL(Ⅱ)、蚕蛹粉10 g+干酵母10 g+蔗糖3 g+琼脂3 g+冻干蛋黄粉9 g+纯净水30 mL(Ⅲ)、大麦虫Zophobas atratus干粉10 g+干酵母10 g+蔗糖3 g+琼脂3 g+冻干蛋黄粉9 g+纯净水30 mL(Ⅳ)、木粉5 g+蚕蛹粉10 g+干酵母10 g+蔗糖3 g+琼脂3 g+冻干蛋黄粉9 g+纯净水25 mL(Ⅴ)和木粉5 g+大麦虫干粉10 g+干酵母10 g+蔗糖3 g+琼脂3 g+冻干蛋黄粉9 g+纯净水25 mL(Ⅵ)]饲喂花绒寄甲新羽化成虫,以未取食饲料的新羽化成虫作为对照组,统计花绒寄甲亲代成虫体重、体长、体宽、64 d内累计死亡率、产卵前期、单雌日均产卵量和64 d内单雌总产卵量,并统计花绒寄甲子一代孵化率、幼虫寄生率、结茧率、幼虫历期、茧期和羽化率;同时,利用Illumina NovaSeq对取食不同饲料花绒寄甲新羽化成虫肠道细菌16S rDNA的V4-V5变异区进行测序,分析肠道细菌多样性、物种组成和群落结构差异,进行细菌基因功能预测;对核心肠道细菌丰度与各项生理指标进行关联分析,解析与花绒寄甲生长发育和繁殖具有关联性较高的肠道细菌。【结果】取食饲料Ⅵ的花绒寄甲成虫体重最大,为0.0287 g;64 d内单雌总产卵量最高,可达1199.03粒,取食饲料Ⅳ的次之,为1068.19粒,取食饲料Ⅰ和Ⅲ的最低,分别为756.11和732.61粒。取食饲料Ⅲ的成虫体长最长,为8.1319 cm;取食饲料Ⅱ的成虫64 d内累计死亡率最高,为18.05%。同时,取食饲料Ⅳ-Ⅵ的花绒寄甲成虫产卵前期最短,平均为(21.44±0.20)d。取食饲料Ⅵ的花绒寄甲成虫的子一代孵化率和羽化率最高,显著高于取食饲料Ⅰ和Ⅱ的。取食饲料Ⅱ的成虫子一代幼虫寄生率最高,为85.36%;取食饲料Ⅲ的结茧率最高,为97.34%。测序获得花绒寄甲新羽化成虫肠道细菌16S rDNA优化序列4781552条,聚类得到758个可操作分类单元(operational taxonomic units,OTUs),注释到11个门22个纲40个目63个科90个属。在门水平,肠道细菌优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Protebacteria);在属水平,取食饲料的成虫肠道优势菌属乳球菌Lactococcus较对照组的丰度显著增加,取食饲料Ⅳ-Ⅵ成虫肠道内乳球菌属相对丰度随着饲喂时间增加逐渐增高。Alpha多样性分析结果表明,对照组的肠道细菌多样性最高,取食不同饲料导致肠道细菌多样性降低;Beta多样性分析结果表明,对照组与取食不同饲料后成虫肠道细菌群落结构差异较大,但取食不同饲料成虫间肠道细菌群落结构相似。KEGG分析结果表明取食不同饲料不同时间点成虫肠道细菌基因参与代谢通路与对照组的相似,差异不显著。核心肠道细菌丰度与成虫生长繁殖和子代幼虫适应性具有一定相关性,相对丰度较高的片球菌属Pediococcus可能会降低子一代孵化率,肠球菌属Enterococcus可能缩短亲代成虫产卵前期、降低子一代幼虫寄生率和增加羽化率;肠球菌属分别与乳杆菌属Lactobacillus在产卵前期以及与芽孢杆菌属Bacillus在羽化率方面影响相反。【结论】取食不同饲料对花绒寄甲成虫生长发育、繁殖、肠道微生物及子代适合度均有显著影响,取食添加了大麦虫干粉和木粉的人工饲料Ⅵ的花绒寄甲成虫繁殖力最强、子代适合度最高,更适合于长期室内饲养的花绒寄甲种群。同时,取食饲料导致花绒寄甲肠道细菌群落结构发生变化,肠道细菌丰富度和多样性降低,但乳球菌属的相对丰度增加;乳球菌属可能在花绒寄甲成虫繁殖和幼虫生长发育中发挥重要作用,为改善花绒寄甲室内繁育提供重要参考。

花绒寄甲ERR和bHLH基因筛选与序列分析

采用Blast X比对、ORFfinder查询开放阅读框、MEGA建立Neighbour-Joining系统发育树、EXPASY分析序列组成及ProtScale和HNN预测氨基酸序列的基本性质及二级结构等生物信息学手段,对花绒寄甲的ERR和bHLH基因研究,共得到具有完整开放阅读框的ERR序列1条和bHLH序列5条,其氨基酸序列二级结构均由α-螺旋、延伸链、无规则卷曲组成,并确定花绒寄甲bHLH转录因子基序长度为52-55aa。花绒寄甲ERR和bHLH基因在转录组中得到确定,它们在进化关系中与鞘翅目模式昆虫赤拟谷盗更为接近,花绒寄甲的bHLH转录因子基序长度与家蚕和果蝇一致。

花绒寄甲卵和成虫释放技术

花绒寄甲Dastarcus helophoroides是蛀干害虫天牛的重要天敌,释放花绒寄甲卵和成虫能有效控制林木被害率和天牛的虫口数量。释放花绒寄甲卵,北方选择在3月下旬至6月中旬,南方的释放期可延长至8月;将卵卡固定在天牛虫粪孔下方的背阴处（虫孔高度〈3m）或距离地面2.5~3.0m的树干背阴处（虫孔高度〉3m）。花绒寄甲成虫释放在北方选择5-7月初期,南方选择3月下旬或9月中旬;直接将释放盒钉在距离地面约2.5m树干背阴处。若立木被害率较小,则一次性每公顷投放成虫释放盒或卵卡200~250个;若被害林株天牛密度较大,则应连续释放2年且每年释放1次,每被害木释放花绒寄甲卵40~80粒（卵卡1~2个）和成虫5~10头。

花绒寄甲5个线粒体合成相关基因序列与时空表达分析

【目的】对花绒寄甲线粒体合成调控基因进行表达分析,为深入揭示花绒寄甲生殖生理活动奠定一定的理论基础。【方法】从花绒寄甲转录组文库和线粒体基因组中筛选出PGC1-α、NRF1、mtTFA、COXⅠ和ATP6基因,对其开放阅读框不完整序列进行5′RACE克隆扩增,对拥有完整开放阅读框的序列直接进行PCR扩增。用实时荧光定量qPCR分析5个线粒体合成基因在花绒寄甲成虫不同组织、不同虫态和不同虫龄中的表达差异。【结果】获得核基因编码序列3条(PGC1-α、NRF1和mtTFA)和线粒体基因编码序列2条(ATP6和COXⅠ)。花绒寄甲各基因的氨基酸序列与其他物种相应氨基酸序列同源性较高,其中mtTFA和NRF1与鞘翅目昆虫赤拟谷盗(Tribolium castaneum)相应序列的同源性高达80%以上。花绒寄甲5个线粒体合成相关基因的表达存在显著的组织特异性和虫态特异性,其在花绒寄甲精巢和脂肪体中的表达量明显高于其他组织;同时,各基因在1龄幼虫中的表达量高于其他幼虫期,在蛹中的表达量最小。花绒寄甲成虫羽化20个月后,各线粒体合成调控基因的表达量随着虫龄的增加呈上升趋势,在30个月达到最大值。【结论】线粒体合成相关基因普遍存在于花绒寄甲不同组织、虫态及虫龄中,但表达量有较大差异。核基因编码的PGC1-α、NRF1和mtTFA表达量高的组织、虫态和虫龄中,相应的线粒体编码基因COXⅠ和ATP6的表达量也相对较高。

花绒寄甲HSP70基因的特征与表达

为阐明热休克蛋白70（HSP70）在花绒寄甲（Dastarcus helophoroides）发育及雌雄成虫抵抗环境胁迫中的作用,利用实时荧光定量PCR技术分析了其在发育阶段和环境胁迫时的表达情况。从花绒寄甲转录组中获得3条HSP70基因,分别命名为D.h HSP69.09、D.h HSP70.11和D.h HSP71.88。发育阶段定量结果显示,3条HSP70在所有发育阶段均有表达,D.h HSP69.09在1龄幼虫期表达量最高;D.h HSP70.11和D.h HSP71.88在雄虫中表达量最高。在检测的成虫组织中,D.h HSP69.09和D.h HSP70.11在卵巢表达量最高;D.h HSP71.88在脂肪体中表达量最高。HSP70基因随温度升高（23℃升至44℃）、41℃下处理时间（0~270 min）延长、氧化剂浓度（0~70 mmol·L-1）的升高表达量先增加后减少,雌雄表达量差异较大。饥饿试验显示,雌雄虫表达模式不同;随饥饿时间延长,雄虫HSP70基因表达量有所降低,雌虫一定时间内有所上升。因此,花绒寄甲HSP70可能与不同发育期的转换、幼虫的蜕皮行为相关;HSP70对温度、氧化和饥饿胁迫的应激敏感程度和表达水平不同,能够有效应对高温、氧化、饥饿等环境胁迫。

花绒寄甲methuselah-like基因的鉴定和表达

采用c DNA末端快速扩增技术获取了花绒寄甲(Dastarcus helophoroides)methuselah-like基因的c DNA全长序列,命名为mth-like2,采用多种生物信息学软件分析了Mth-like2受体蛋白的结构特征,并采用Real-time q PCR技术分析了该基因的表达情况。结果表明:mth-like2基因c DNA全长为2 117 bp,开放阅读框的大小为1 458bp,编码485个氨基酸,相对分子质量为56 750,理论等电点为8.83,存在7个跨膜结构域。系统发育分析结果显示,该基因对应的受体蛋白序列与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)Mth2-like亲缘关系最近。mth-like2基因在不同组织和不同虫态均有表达,其中雄性生殖系统的表达量显著高于其他组织,6龄幼虫显著高于其他虫态;mth-like2基因的表达量随存活时间的延长显著下调;在氧化、高温和饥饿条件下,mth-like2基因的表达量也均有显著变化,且在氧化和高温下雌雄有显著差异。

苹果小吉丁虫的生物学及其生活史讨论

为了澄清苹果小吉丁虫的生物学,对我国1954年以来的文献和资料进行了归纳和总结。结果表明,该害虫在我国的寄主包括苹果、海棠、沙果(花红)、楸子、香果树、槟子(红果)、山定子、花楸、樱桃和榅桲,其分布区与野生寄主海棠、槟子、沙果等完全重合。该害虫幼虫有5个龄期,除在黑龙江可能2a发生1代外,在其余省区1a发生1代;依据越冬幼虫出蛰、蛹、成虫和当年幼虫越冬等发生期的差异,苹果小吉丁虫在我国具有4个年生活史类型区,即黑龙江、新疆、宁夏和青海,内蒙古、吉林和辽宁,河北、河南、甘肃和山东,山西、陕西、湖北和江苏。

苹果小吉丁成虫生物学特性补遗和幼虫饲养

为明确苹果小吉丁成虫生物学特性、便于采用适宜的方式防治成虫,饲养成虫和幼虫为其他研究提供虫源,采取室内饲养和观察方法研究了苹果小吉丁成虫性比、寿命、雌雄取食量和耐饥性,及幼虫饲料配方的定性筛选。研究表明,苹果小吉丁成虫性比1∶3.4,饥饿状态下雄虫平均寿命4.7d、雌虫6.5d;取食苹果叶时成虫最长寿命24d、平均寿命14.35d,雄虫可存活9~14d、总取食量212.91mm2,雌成虫15~22d、总取食量雌虫279.45mm2,成虫总取食量约达1片苹果叶面积的16%~21%;采用48%的毒死蜱和5%的高效氯氰菊酯叶面喷雾,成虫可在2h内全部死亡。在25℃、70%相对湿度条件下,用饲料A1、A2、B1、B2、C和D饲养苹果小吉丁幼虫,幼虫取食饲料A2和D并能够化蛹和羽化出成虫,由饲料D饲养的幼虫最长可存活55d。苹果小吉丁成虫期具有较长的寿命和活跃的取食习性,采用叶面喷药方式能够防治成虫;饲料A2和D的成分能够满足幼虫发育至成虫的需要。

粘虫肠道细菌群落多样性的PCR-DGGE指纹图谱分析

研究东方粘虫[Mythimna separata(Walker)]肠道细菌的多样性。采用常规分离培养与分子鉴定相结合的方法,并以16SrDNA作为分子标记的变性梯度凝胶电泳(DGGE)对肠道细菌进一步分离,DGGE分离样品是研磨提取粘虫中肠组织DNA、提取培养混合菌DNA及直接以培养混合菌为模板进行PCR扩增的产物。结果表明,共得到DGGE条带19条,其中肠组织研磨提取DNA的DGGE条带最多,为17条;直接以培养混合菌液为模板进行PCR扩增次之,为13条;培养混合菌液提取DNA的条带最少,为12条。传统方法和分子生物学方法相结合研究肠道微生物多样性时能获得更全面的微生物信息,可采用培养混合菌提取DNA再结合其他方法进行后续研究。

秦岭牛背梁自然保护区地面昆虫的多样性

为明确牛背梁自然保护区地面昆虫的多样性,按海拔高度设置调查点,以巴氏罐诱法进行多样性调查。对所采集的11目、55科、209个种的分布分析表明,保护区地面优势昆虫类群为膜翅目、双翅目和鞘翅目,多样性指数为3.217 8,物种优势度指数为0.905 0、均匀度指数为0.602 3、丰富度指数为22.210 1,但多样性指数在南、北坡间有差异,1 200～1 990m低海拔地区的优势科为蚁科、步甲科,1 990～2 770m高海拔地区的优势科为寄蝇科、步甲科、隐翅甲科。

一类带参数的半线性椭圆型方程边值问题的可解性

本文利用上、下解方法和不动点定理研究了一类带参数的半线性椭圆型方程边值问题,根据参数的不同情况,分别得出了解的存在性、唯一性和不存在性。

花绒寄甲荧光定量PCR分析中内参基因的选择

合适的内参基因是利用实时荧光定量PCR准确分析基因相对表达量的先决条件。以存活时间为6个月、12个月、18个月、24个月、30个月和36个月的花绒寄甲成虫为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,检测了核糖体蛋白11(RPS),丁二酸脱氢酶复合物(SDHA)、组蛋白(Histone)、泛素结合蛋白(UBC)、cGMP依赖性蛋白激酶Ⅰ(PGK)、延伸因子(EF-1α)、β-肌动蛋白(β-Actin)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白RPL13(L13)、α-微管蛋白(α-Tubulin)共10个看家基因mRNA的表达情况。经过geNorm、NormFinder和BestKeeper 3个统计学程序,综合分析确定RPS基因或α-Tubulin基因在不同存活时间的花绒寄甲中为较佳用于校正目标基因的内参选择,而RPS、GAPDH和α-Tubulin的组合为最佳校正目标基因内参基因组合。

花绒寄甲Prx6基因的确定和表达分析

【目的】获得花绒寄甲过氧化物还原酶6基因(Prx6),分析其在花绒寄甲发育和衰老过程中相对表达量的变化,以进一步揭示花绒寄甲衰老的分子机制。【方法】基于花绒寄甲成虫转录组数据库获得Prx6基因,并对其进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,分析Prx6在花绒寄甲发育和衰老阶段的表达量。【结果】从花绒寄甲成虫转录组数据库中获取了2个Prx6基因,分别命名为Prx6-1和Prx6-2,其开放阅读框长度依次为654和672bp,分别编码218和224个氨基酸。多序列比对和系统发育分析表明,这2个基因均属于1-Cys家族,并且与鞘翅目的赤拟谷盗Prx6-1和Prx6-2的同源性最高,分别为71%和82%。发育阶段的定量结果表明,Prx6-1在2龄幼虫、蛹和初孵成虫体内的表达量较高,在6龄幼虫体内的表达量最低;Prx6-2在2龄和4龄幼虫体内表达量较高,在6龄幼虫体内表达量最低。在成虫衰老过程中,2个Prx6基因表达量整体上呈现出随羽化后时间的延长而增加的趋势。【结论】花绒寄甲Prx6基因影响其发育,特别是在2龄和6龄幼虫期。在花绒寄甲衰老过程中,2个Prx6基因的表达量随其羽化后时间的延长而升高。

土壤与花椒各器官中主要矿质元素的研究

矿质元素,在陕西花椒主要产地选取17个样地,分别测定林地土壤中N、P、K、Mg、Ca、Cu、Zn、B、Mo的有效含量及其在花椒器官中的含量,分析花椒枝皮、叶、果皮、种子主要矿质元素的分布情况。结果表明:花椒林地土壤中K、Cu、Zn很丰富,Mo丰富,B中等,P、Mg、Ca缺乏,N很缺乏;花椒各器官中元素含量由大到小分别是K、Ca、Mg、P、N、Zn、B、Cu、Mo,花椒从土壤中的吸收量表现为P>K>N,对P的含吸收量约是K和N的5.5~6倍。各元素积累量由小到大排序,N为枝皮、种子、果皮、叶,P为叶、枝皮、种子、果皮,K为枝皮、叶、果皮、种子,Mg为枝皮、果皮、种子、叶,Ca为种子、果皮、叶、枝皮,B和Mo为枝皮、种子、果皮、叶。土壤中N、P、K、B、Mo含量与花椒及其果实发育相关,Mg、Ca对花椒产量形成具有重要作用。

花椒各器官对土壤中9种元素的吸收利用研究

目的:揭示花椒各器官对土壤中营养元素的吸收和利用水平,掌握花椒果实发育对营养元素的需求,为合理施肥提供基础。方法:测定土壤和花椒样中N、P、K、Ca、Mg、B、Zn、Cu和Mo含量并进行统计分析。结果:土壤中花椒树所需求的K、Cu、Zn元素含量很丰富,缺少N元素,P、Ca、Mg、B、Mo各元素的含量极为贫乏;花椒树体中各元素含量由多到少,依次为Ca 】K 】N、P、Mg 】B 】Cu、Zn 】Mo;花椒营养器官对N、K、Mg和B,果实对K、B和Mg的聚集能力较强。结论:花椒树和果实对N、P、K、Ca、Mg、B需求水平较高。

花绒寄甲成虫3条Mthl基因及Mth-like 2-5干扰效果研究

筛选花绒寄甲成虫高表达的mthl基因,注射目标基因dsRNA,以确定干扰效果并解析其功能。合成花绒寄甲成虫目标基因mthl保守序列的dsRNA,分别注射0.3、1.2μg/μL和4.8μg/μL的dsRNA,利用实时荧光定量PCR技术检测目标基因的表达量,记录处理组虫体的体重、存活率和雌虫产卵情况。从花绒寄甲转录组数据库中分别鉴定出Mthlike11、Mth-like 2-4、Mth-like2-5基因。注射目标基因Mth-like 2-5的长度约400bp的dsRNA,对目标基因表达干扰效果显著,但干扰过程中雌雄虫均具有应激表达反应。其中0.3μg/μL低浓度dsRNA对目标基因干扰效果差,应激高表达反应明显;1.2μg/μL中等浓度dsRNA对目标基因有显著的干扰效果,应激高表达反应弱、引起的体重下降和死亡率较小,雌虫产卵期推迟;4.8μg/μL高浓度dsRNA干扰效果显著,引起的体重下降和死亡率较高,雌虫难以产卵。注射Mth-like 2-5dsRNA可影响Mth-like2-5基因的正常表达和转录,随dsRNA浓度增大和处理后时间的延长,目标基因表达量、雌雄成虫体重明显降低,死亡率增高,雌成虫产卵期推迟或难以产卵。

有界洞型区域上一类半线性椭圆型方程的可解性

利用上、下解方法,嵌入定理及Leray—Schauder不动点理论证明了一类半线性椭圆型方程在洞型区域内边值问题弱解的存在。利用Schauder不动点理论及上、下解方法证明了经典解的存在。

建设工程项目变更签证的控制与管理

近年来,伴随着城市的建设,使社会中出现了更多的大型建筑工程,规模较大的工程项目,施工工期较长,投入经费较多,整个施工的过程中,会出现很多不可控的因素,影响工程的建设和施工,致使工程项目出现变更。若想提升项目资金分配的合理性,工程变更情况的真实性,明晰每一笔资金的收支情况,就需要相关负责人加强对工程项目变更签证管理的关注程度。建设工程项目变更签证的高效管控,对于建筑工程的顺利开展有着至关重要的意义和作用,不仅可以让变更签证更加的规范和科学,而且能够在最大限度上帮助企业获得更多的经济收益,让变更签证管控的优势在项目的实施阶段充分的突显出来。基于此,本文首先对建设工程项目变更签证进行了概述,然后对引发工程变更的因素进行了分析,最后围绕着当前变更与签证的管控出现的问题,详细阐述了主要解决办法,以期参考和交流。

内部审计在公司治理中的重要作用

内部控制的发展离不开公司治理的推动，公司治理的优化也离不开有效的内部控制作为保障。随着外部环境的不断变化，强化内部控制、改进风险管理、完善公司治理的要求越发强烈，而作为内部控制重要组成部分的内部审计的作用更加明显。应该重视内部审计在公司治理中的重要作用，改进和完善内部审计，以促进内部审计与公司治理的良性互动。

建设陆浑水库的艰苦岁月

朋友,当你畅游在祖国的中原大地——河南的时候,当你畅游在古都洛阳、畅游在豫西明珠——陆浑水库风景区的时候,当你在陆浑水库景区泛舟、垂钓、疗养的时候,你可曾知道陆浑水库是洛阳军民在20世纪最困难时期挨饿受冻、肩挑背扛修建而成的。那么,就让我们跟随当年一位普通建设者的笔触走进那段艰苦的岁月,感悟那段鲜为人知的史实……