腹腔热灌注化疗治疗妇科恶性肿瘤近期疗效与安全性的临床观察

目的 探讨腹腔热灌注化疗治疗妇科恶性肿瘤的疗效与安全性。方法 收集2020年3月至2021年3月97例术后接受腹腔热灌注化疗(HIPEC)的晚期及复发性妇科恶性肿瘤(卵巢癌、输卵管癌、腹膜癌、子宫内膜癌、肉瘤、宫颈癌)患者的一般资料。近期疗效根据实体肿瘤疗效评价标准(RECIST 1.1)进行评价,比较初治、新辅助化疗后及复发性卵巢癌的近期疗效,并对子宫内膜癌、肉瘤、宫颈癌患者的治疗疗效进行评估。比较HIPEC前后患者生活质量、不良反应、血清热休克蛋白90α、胸苷激酶1(TK1)、D-二聚体及体液免疫指标(IgG、IgM、IgA)水平的变化。结果 在80例上皮性卵巢癌患者中,客观有效率(ORR)为68.8%(55/80),疾病控制率(DCR)为80.0%(64/80)。初治组的ORR与DCR均略高于新辅助化疗组与复发组,但差异无统计学意义(P>0.05);铂耐药复发患者的ORR与DCR均略高于铂敏感复发者,但差异无统计学意义(P>0.05)。HIPEC后生活质量评分高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);血清IgG、IgM、IgA及TK1在HIPEC后的水平均低于HIPEC前,差异有统计学意义(P<0.05);血清热休克蛋白90α与D-二聚体水平在接受HIPEC后有所升高,差异有统计学意义(P<0.05)。97例患者发生的主要不良反应包括:疼痛、呼吸困难、腹胀、肠梗阻、恶心、呕吐、发热、血液毒性、乏力、血栓、感染、术口愈合不良、心血管意外及术后出血等,严重不良反应发生率为31.9%(31/97)。结论 HIPEC治疗晚期、复发性妇科恶性肿瘤的疗效及安全性较好,但仍需进一步临床研究。

人乳头瘤病毒E6/E7混合CTL表位的筛选与免疫效应研究

验证有效的人乳头瘤病毒(HPV)E6、E7蛋白的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,比较混合表位和单个表位的体外免疫效应差异,为宫颈癌复合多肽疫苗研究提供基础。方法 对宫颈癌相关抗原 HPV E6、E7蛋白CTL表位进行筛选,采用HLA-A2分子结合力实验检测T2细胞的表面平均荧光强度(MIF),采用酶联免疫斑点法(ELISOPT)检测IFN-γ斑点数,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测吸光度(OD)。结果 对已报道的 11条表位多肽进行验证,经过T2细胞肽结合力绑定实验、ELISPOT实验,结果表明,多肽P2 TIHDIILECV、P3 FAFRDLCIV、P5 YMLDLQPET、P9 ELTEVFEFA、P11 TLQDIVLHL均具有高免疫反应性,与健康志愿者相比,5条多肽能够刺激宫颈癌患者外周血CTL产生特异性反应,由混合表位诱导的效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用明显优于单个表位的作用。结论 验证了5条多肽序列具有免疫反应性,明确了混合表位体外免疫效应优于单个表位,为进一步开展宫颈癌复合多肽疫苗的研究奠定了基础。

METTL14在卵巢上皮性癌组织中的表达及对A2780、SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的研究甲基转移酶样蛋白14(METTL14)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其临床意义,探讨上调和下调METTL14表达对卵巢癌细胞系A2780、SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法(1)组织标本检测:选取2019年12月—2020年11月在广西医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的20例卵巢癌患者的新鲜癌组织标本,收集同期因子宫肌瘤行子宫及双侧附件切除术的15例患者的新鲜正常卵巢组织标本作为对照,免疫组化法检测卵巢癌与正常卵巢组织中METTL14蛋白表达的差异。另收集2014年1月—2019年10月在广西医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的121例卵巢癌患者的癌组织蜡块,免疫组化法检测卵巢癌组织中METTL14蛋白的表达,并分析METTL14蛋白表达与卵巢癌患者临床病理特征及预后的关系。(2)细胞实验:分别使用慢病毒载体、小分子干扰RNA(siRNA)技术,构建上调、下调METTL14表达的卵巢癌A2780、SKOV3细胞系,并采用逆转录(RT)-实时荧光定量PCR(qPCR)技术和蛋白印迹(western blot)法分别验证其METTL14 mRNA和蛋白的表达。后续的细胞实验分为5组,LV-METTL14组(转染慢病毒载体上调METTL14表达)及其对照LV-NC组(转染阴性对照慢病毒空载体),si-METTL14组(转染si-METTL14-2下调METTL14表达)及其对照si-NC组(转染阴性对照siRNA),以及空白组(未转染)。采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法检测各组卵巢癌细胞中N-6甲基腺嘌呤(m6A)修饰水平的变化,分别采用活细胞计数(CCK-8)法、划痕实验以及穿膜(transwell)小室侵袭和迁移实验检测各组卵巢癌细胞增殖、愈合以及侵袭和迁移能力的变化。结果(1)20份卵巢癌组织中METTL14蛋白的免疫组化总评分为(6.2±3.7)分,显著高于15份正常卵巢组织[(3.3±2.5)分;t=-2.64,P=0.012]。121例卵巢癌患者中,METTL14蛋白高表达(免疫组化总评分≥6分)69例(57.0%,69/121),METTL14蛋白低表达(免疫组化总评分<6分)52例(43.0%,52/121);METTL14蛋白高表达与METTL14蛋白低表达患者比较,手术病理分期更晚,淋巴结转移率、腹腔转移率、腹水发生率更高,分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.05);METTL14蛋白高表达患者的总生存率显著低于METTL14蛋白低表达者(P=0.009)。(2)LC-MS/MS法分析显示,LV-METTL14组A2780和SKOV3细胞中m6A的表达水平分别为0.213±0.024、0.181±0.018,均显著高于LV-NC组(分别为0.109±0.022、0.128±0.020;P均<0.05);而si-METTL14组A2780和SKOV3细胞中m6A的表达水平分别为0.063±0.012、0.069±0.015,均显著低于si-NC组(分别为0.108±0.014、0.121±0.014;P均<0.05)。CCK-8法检测显示,si-METTL14组SKOV3细胞在培养在36、48、60 h时的吸光度(A)值均显著低于si-NC组(P均<0.05);LV-METTL14组A2780和SKOV3细胞在培养48、60 h时的A值均显著高于LV-NC组(P均<0.01)。划痕实验显示,培养24 h,si-METTL14组A2780和SKOV3细胞的迁移率低于si-NC组,LV-METTL14组A2780和SKOV3细胞的迁移率高于LV-NC组,分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.01)。在transwell小室侵袭、迁移实验中,培养24 h,si-METTL14组A2780和SKOV3细胞的穿膜细胞数均少于si-NC组,LV-METTL14组A2780和SKOV3细胞的穿膜细胞数均多于LV-NC组,分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论METTL14蛋白高表达的卵巢癌患者的预后更差。上调METTL14表达可提高卵巢癌细胞m6A修饰水平,促进卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移;反之,下调METTL14表达则降低卵巢癌细胞m6A修饰水平,抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。