二氧化硅通过调节人气道上皮细胞自噬促进MUC5AC表达

目的 探讨二氧化硅(SiO_(2))对人气道上皮细胞株(Beas-2b)黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及其作用机制。方法 用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基在37℃和5%CO_(2)的培养箱培养Beas-2b。使用NC-siRNA、ATG5-siRNA、BECN1-siRNA及mCherry-EGFP-LC3等慢病毒转染Beas-2b。各转染组细胞用相应慢病毒(MOI=20)转染12 h后换新鲜培养基,并用嘌呤霉素(1μg/mL)进行筛选,获得稳定转染细胞株。用SiO_(2)(100μg/mL)刺激前述稳定转染细胞株24 h,并设PBS对照组。免疫荧光和免疫印迹检测MUC5AC、自噬相关蛋白5(ATG5)、BECN1和微管相关蛋白轻链3(LC3)的蛋白水平;共聚焦显微镜观察人气道上皮细胞自噬情况。结果 SiO_(2)组的MUC5AC、ATG5、BECN1和LC3Ⅱ的表达高于对照组(P <0.05);ATG5和BECN1敲减细胞株中,SiO_(2)刺激后MUC5AC和LC3Ⅱ的表达均低于对照组(P <0.05)。结论 SiO_(2)可通过调节人气道上皮细胞自噬促进MUC5AC表达,其作用机制与ATG5和BECN1信号途径相关。

蛇毒丝氨酸蛋白酶多样性──底物专一性免疫化学及序列比较研究

本文报道烙铁头（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｍｕｃｒｏｓｑｕａｍａｔｕｓ）蛇毒纤维蛋白原溶酶（ＴＭＶＦｇ），眼镜王蛇（Ｏｐｈｉｏｐｈａｇｕｓｈａｎｎａｈ）蛇毒纤维蛋白原溶酶（ｏｈＳ１），竹叶青（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｓｔｅｊｎｅｇｅｒｉ）蛇毒专一纤溶酶原激活剂（ｓｖ－ｐＡ）对５种小分子多肽底物的底物专一性，及这些蛇毒丝氨酸蛋白酶对各种凝血因子（第Ｘ因子、凝血酶原、纤溶酶原、蛋白Ｃ）的作用，并和其它蛇毒丝氨酸蛋白酶如矛头蝮（Ｂｏｔｈｒｏｐｓａｔｒｏｘ）蛇毒凝血酶样酶（Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ）、铜头蝮（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｃｏｎｔｏｒｔｒｉｘｃｏｎｔｏｒｔｒｉｘ）蛇毒蛋白Ｃ激活剂ＡＣＣ－Ｃ、蝰蛇（Ｖｉｐｅｒａｒｕｓｓｅｌｌｉ）毒第Ⅴ因子激活剂ＲＶＶ－Ｖ进行比较研究。通过酶标偶联免疫反应研究了抗ｓｖ－ＰＡ抗体与各种丝氨酸蛋白酶的免疫交叉反应，并对蛇毒丝氨酸蛋白酶及相应功能的哺乳动物蛋白酶进行了序列比较分析。从底物专一性多样性及已知序列结构分化上对这一类蛇毒丝氨酸蛋白酶的结构与功能进行了探讨和研究。

哮喘气道黏液高分泌分子机制研究进展

支气管哮喘（以下简称哮喘）是由多种细胞及细胞组分参与的慢性气道炎性疾病，以呼吸道炎性反应、气道高反应性、气道重塑为其主要特征，是当前世界面临的重要健康问题，其发病率和病死率在逐年上升。哮喘黏液高分泌与气道重塑有关，是哮喘气道上皮杯状细胞增生和黏膜下腺体肥大等病理生理变化的结果［1］。黏液高分泌导致气道阻塞、肺功能下降和感染增加是严重哮喘发作面临的首要问题。尽管目前药物治疗对稳定性哮喘的临床管理有一定效果，但对于重症哮喘及哮喘气道黏液高分泌并无特异的有效的药物治疗方法，因此需要研究发现治疗哮喘气道黏液高分泌新的药物治疗靶点。目前哮喘黏液基础研究主要集中在炎性介质与相关的信号途径如何导致黏液高分泌，并研究是否能通过抑制这些炎性介质及其相关信号通路以减轻黏液高分泌的临床表现，本文就这方面的研究进展作一综述。

烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶研究 Ⅰ分离纯化及理化性质(英文)

通过DEAE-SephadexA-50,DEAE-SepharoseCL-6B,MonoQ(FPLC)三步离子交换柱层析,纯化得到一新的纤维蛋白原溶酶,在碱性聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上均呈单一的蛋白带。分子量为26000,等电点pI4.7;它是一个糖蛋白,含糖量6.4％,其中中性糖0.3％,己糖胺4.9％,唾液酸1.2％。烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg由187个氨基酸组成,含有较高的酸性氨基酸,此外甘氨酸含量也较高。TMVFg热稳定性强,而酸不稳定,在280nm处具有典型的蛋白吸收峰,在无离子水中紫外消光系数E0.1％/280nm=1.558。纯化的TMVFS具有较强的精氨酸酯酶活力,对苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)的Km值为1.4×10^(-3)M。TMVFS的活性受苯甲基丹磺酰氟(PMSF)抑制,乙二胺四乙酸(EDTA)对活性无影响。TMVFg不能使纤维蛋白原凝固,但能水解纤维蛋白原α、β链。纤溶实验表明TMVFg具有激活纤溶作用。纯化的烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶对酪蛋白无作用,无出血活性,因而与凝血酶样酶、出血毒素及纤维蛋白原溶酶(OUYANG et al,1977) 明显不同。

烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶研究——Ⅱ.对纤维蛋白原及凝血酶的作用

烙铁头(T.mucrosquamatus)蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg能水解三肽底物Bz-Phe-Val-Arg-PNA,但对凝血酶的良好底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA却活性甚低。TMVFS显著延长血浆凝血酶时间。血浆复钙时间及纤维蛋白原溶液凝血酶时间。同时,TMVFg体外也能延长全血凝固时间,表明具有抗凝作用。纤维蛋白原-纤维蛋白转换实验表明:TMVFg水解纤维蛋白原产生的纤维蛋白原断片(FDP)除具有抗凝血酶,抑制纤维蛋白聚合活性外,还能促进纤维蛋白的聚合。 进一步用FPLC分离TMVFg水解人纤维蛋白原混合液,得两个FDP断片功能峰,FDP组分Ⅰ和FDP组分Ⅱ。其中FDP组分Ⅰ能抑制纤维蛋白凝块形成;FDP组分Ⅱ能促进纤维蛋白凝块形成,抑制TMVA(烙铁头蛇毒血小板活化素,它可不通过ADP、花生四烯酸途径而诱导血小板聚集),但对ADP诱导的家兔血小板聚集无影响。TMVFg对凝血酶水解三肽底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA及凝固纤维蛋白原的活性也有一定抑制作用。 实验证明,TMVFg抗凝的主要作用机理是其水解纤维蛋白原产生的断片对纤维蛋白原凝固的抑制作用、FDP断片抗凝血酶作用及TMVFg本身对凝血酶活性的抑制所引起的,但在二者之间,前者是主要的。 从研究结果发现:TMVFg水解纤维蛋白原所产生的断片有一类能加速凝血酶凝固纤维蛋白原的过程,这就发现了FDP断片的?

论机构具有确定运动的条件

近年来,随着对机构学的教学、科研的不断深入发展,各种机构在实际机械中的广泛应用。人们发现,某些机构,按照现有的机构具有确定运动的条件来衡量,它们的运动是不确定的。但根据机构的定义,其运动必须是确定的,才能称其为机构。那么,这应作如何解释呢?本文就机构具有确定运动的条件进行了探讨。

鼻内滴注烟草提取物和脂多糖建立慢性阻塞性肺疾病小鼠模型的评价

目的:建立鼻内滴注烟草提取物(CSE)和脂多糖(LPS)制备慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠模型,并探讨其可行性。方法:24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组12只,鼻内滴注CSE和LPS建立COPD小鼠模型,测定2组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数,观察2组小鼠肺组织病理学表现并测定PAS阳性细胞数、肺泡平均内衬间隔(MLI)和肺泡破坏指数(DI),Western blotting法检测2组小鼠肺组织中E-cadherin、Vimentin和α-SMA蛋白表达水平。结果:实验4和6周时模型组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数明显高于对照组(P<0.01),模型组小鼠肺组织出现典型粘液高分泌和肺气肿改变;实验4和6周时模型组小鼠PAS阳性细胞数、肺泡MLI(P<0.01)和DI(P<0.01)明显高于对照组;与对照组比较,实验4和6周时模型组小鼠肺组织中E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.01),Vimentin和α-SMA蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:采用鼻内滴注CSE和LPS的方法可在较短时间内建立COPD小鼠模型。

大蒜素抑制TGF-β1/SMAD2通路减轻哮喘小鼠气道炎症并调节气道重塑

目的探究大蒜素对支气管哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的作用机制。方法随机选取健康雌性BALB/c小鼠,分对照组、哮喘模型组和大蒜素处理组,每组8只。采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型,取小鼠支气管肺泡灌洗液进行炎细胞计数,HE染色观察肺组织病理学变化、Masson染色观察肺气道重塑情况,免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,ELISA检测小鼠血清白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的水平,Western blot法检测小鼠肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和SMAD家族成员2(SMAD2)、SMAD7的表达水平。结果与哮喘模型组比,大蒜素能显著抑制哮喘小鼠肺泡灌洗液中炎性细胞数量的增加并减轻炎性细胞的浸润、平滑肌增生及胶原蛋白沉积。同时,大蒜素能降低血清中IL-4的水平,升高IFN-γ的水平,抑制肺组织中TGF-β1、SMAD2、α-SMA蛋白表达,增加SMAD7蛋白表达。结论大蒜素可通过抑制TGF-β1/SMAD2通路减轻哮喘小鼠气道炎症并调节气道重塑。

1,25-二羟维生素D3通过TGF-β1(/Smad2/3)影响的ROS调节气道重塑

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/(Smad2/3)对活性氧(ROS)的影响及调节气道重塑的分子机制.方法选取健康雌性Balb/c小鼠24只,随机分为正常组(A组)、哮喘组(B组)、1,25-(OH)2D3+哮喘组(C组).B组和C组于第0、7、14天腹腔注射0.5 mL致敏液(10μg卵清蛋白与2 mg铝制剂),之后用卵清蛋白雾化吸入,于第21~27天每天雾化1次,第28~77天隔天雾化1次制备小鼠支气管哮喘气道重塑模型.C组在每次雾化激发前30 min予以腹腔注射100 ng 1,25-(OH)2D3,实验过程持续至少77 d.收集小鼠肺组织分别用于HE染色、AB-PAS染色、Masson染色分析小鼠气道病理形态改变、气道黏液高分泌及气道重塑,运用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况.用免疫荧光检测气道ROS的表达,Western blot检测TGF-β1、Smad2/3的表达水平.结果B组较A组气道受损明显,可见大量炎性细胞浸润,黏液分泌增加,上皮下胶原沉积明显增多,与B组相比,C组病理形态损伤表现明显缓解,但仍较A组加重;B组较A组ROS,TGF-β1、Smad2/3蛋白的表达水平明显升高.与B组相比,C组ROS,TGF-β1、Smad2/3蛋白的表达降低,但仍较A组升高(P<0.01).结论1,25-(OH)2D3可能通过抑制TGF-β1/(Smad2/3)的表达从而减少ROS水平,达到调节小鼠气道重塑的作用.

白藜芦醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用及其机制

目的:探讨白芦藜醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:选取18只C57BL/6J雌性小鼠,采用脂多糖(LPS)+卵白蛋白(OVA)联合致敏方法建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型,随机分为模型组(LPS+OVA组)、白藜芦醇组(Res组,于激发前2h灌胃30mg·kg^(-1)白藜芦醇)和N-乙酰半胱氨酸组(NAC组,于激发前2h灌胃3mmol·kg^(-1) N-乙酰半胱氨酸);同时选取6只同周龄小鼠作为正常对照组(PBS组)。于乙酰甲胆碱雾化期间观察各组小鼠的行为学变化,采用肺功能仪分析小鼠气道高反应(AHR),光学显微镜观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和炎症细胞,HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,酶联免疫法(ELISA)检测各组小鼠BALF上清中白细胞介素17(IL^(-1)7)水平,特异性荧光探针DCF-DA染色分析肺组织活性氧(ROS)水平,丙二醛(MDA)试剂盒检测肺组织匀浆中MDA水平。结果:与PBS组比较,LPS+OVA组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分均明显升高(P<0.05或P<0.01),BALF上清中IL^(-1)7水平明显升高(P<0.01),肺组织内ROS荧光强度明显升高,肺匀浆中MDA水平明显升高(P<0.01)。与LPS+OVA组比较,Res组和NAC组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分明显降低(P<0.05或P<0.01),BALF上清中IL^(-1)7水平均明显降低(P<0.05),肺组织内ROS荧光强度降低,肺匀浆中MDA水平明显降低(P<0.01)。结论:白藜芦醇能够有效抑制中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织中的炎症反应,其机制可能与白藜芦醇抑制体内发生的氧化应激反应有关。

OAZ1基因稳定表达SCC15细胞株的构建及其对舌鳞状细胞癌上皮间质化的影响

目的探索鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ1)对舌鳞癌细胞株SCC15上皮间质化的影响及相关机制。方法构建框移位点突变的OAZ1过表达慢病毒表达载体p LVX-Neo-OAZ1-IRES-Zs Green,包装病毒并感染SCC15细胞,采用有限稀释法挑取荧光强度较高的单克隆细胞株;利用RT-PCR和Western blot检测OAZ1以及上皮间质化相关基因(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Zeb1、Snail、Twist1、TGF-β1、Smad1)的m RNA水平和蛋白水平。结果成功构建了OAZ1基因稳定表达的SCC15细胞株,且OAZ1的过表达可以抑制Vimentin、N-cadherin、TGF-β1的m RNA和蛋白水平表达;此外,OAZ1可以促进Smad1的蛋白水平降低。结论 OAZ1可以抑制舌鳞癌细胞的上皮间质化,其机制可能涉及TGF-β1信号通路和Smad1信号通路的抑制。

人MUC5AC启动子荧光报告基因的构建与分析

目的构建人MUC5AC启动子荧光报告基因并进行分析。方法 PCR技术克隆人MUC5AC启动子[(-1 300)^(+48)bp]长度片段的基因,将纯化的PCR产物与T载体连接,然后将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,并利用酶切和测序进行重组质粒鉴定;将该重组质粒克隆至p GL3-ehancer荧光报告基因载体上,用脂质体转染法将荧光报告基因转染至人支气管上皮细胞(16HBE细胞),分别用1 ng/m L的重组细胞因子IL-4和IL-13刺激细胞24 h,并设不做任何处理的对照组;用Promega双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测相对荧光素酶活性(Rlus1/Rlus2)。结果人MUC5AC启动子荧光报告基因构建成功,IL-4和IL-13刺激组的相对荧光素酶活性均高于对照组[IL-4(21.666 7±2.081 67),IL-13(26.567 8±1.527 53),对照组(8.33±1.527 53);F=89.815,P=0.000]。结论 MUC5AC启动子核心区域为(-1 300)^(+48)bp范围,IL-4和IL-13可作用于该区域并促进MUC5AC高表达。

巨变 钱江新城打造国内一流中央商务区

近日，习近平来到浙江视察，在位于钱江新城的杭州城市规划展览馆，看沙盘，观视频，听介绍，了解近年来杭州城市发展特别是新城区建设睛况，对伉州确立并不断实现城市功能更全、生态环境更美、人民生活更好的目标表示肯定。随后，习近平来到钱江新城城市阳台观看钱江两岸的新城风貌。正在这里休闲的市民看到总书记来了，热情围拢过来打招呼。习近平一边同大家握手一边说“杭州这个地方环境多好啊，我离开浙江时这片还没有建起来。”

辐射技术在烟草工业中的新用途

烟草工业是社会经济的一大组成部份,但烟草中的有关物质(常称烟焦油)对人体的健康有一定的影响,特别是对呼吸系统和心血管系统的影响较大。近年来大量的流行病学调查资料表明,吸烟还与肺癌等多种癌症的发病率之间有一定的相关性。1971年Hoffmann和Wynder发表的资料表明,烟焦油中的多环芳烃化合物具有致癌活性,1976年Hirao等人又发现烟焦油中的喹啉及其衍生物具有致癌活性。卷烟中的这些致癌致变物质对人体健康的影响问题,引起了医务工作者和科学家们的关注,为了人体健康,降低卷烟的生物毒性,目前的解决办法集中在改进卷烟生产的工艺研究上,通过改进工艺降低卷烟的焦油量,达到减少卷烟的生物毒性。但这样的改进也影响烟味,而不为吸烟者所欢迎。

IL-33通过TGF-β1/Smad3信号通路调控CES诱导细胞上皮-间质转化的机制研究

目的探讨IL-33在烟草提取物(CSE)诱导细胞上皮-间质转化(EMT)形成过程中的作用机制。方法将人支气管上皮细胞(16HBE)分为对照组、CSE组、CSE+Anti-IL-33组、CSE+IL-33组,按照实验分组分别给予PBS、5%CSE、5%CSE+Anti-IL-33(3μg/mL)、5%CSE+IL-33(40 ng/mL)刺激72 h。免疫荧光检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)荧光强度,Western blot检测细胞E-cadherin、Vimentin、肿瘤发生抑制蛋白2(ST2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、母亲信号蛋白同源物(Smad3)、磷酸化Smad3(p-Smad3)蛋白表达。结果与对照组比较,CSE暴露后干预各组细胞E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin、ST2、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与CSE组比较,CSE+Anti-IL-33组E-cadherin蛋白表达升高,Vimentin、ST2、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达降低,CSE+IL-33组E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin、ST2、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达升高。结论IL-33可能通过IL-33/ST2轴上调TGF-β1/Smad3信号通路,促进CSE诱导细胞EMT的形成。

雷公藤甲素通过CXCL10/CXCR3轴对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响研究

目的探讨雷公藤甲素通过CXCL10/CXCR3轴对支气管哮喘(以下简称为哮喘)小鼠气道炎症的影响,为临床应用雷公藤甲素治疗哮喘提供理论依据。方法2020年7—12月选取36只雌性SPF级BALB/c小鼠,采用简单随机法将其均分为对照组、哮喘模型组和雷公藤甲素组,每组12只。哮喘模型组和雷公藤甲素组采用卵清蛋白腹腔注射致敏及雾化激发构建哮喘小鼠模型,对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液;每次雾化前1 h,雷公藤甲素组腹腔注射0.2 ml雷公藤甲素(40μg/kg),哮喘模型组和对照组则腹腔注射0.2 ml 0.9%氯化钠溶液,连续干预14 d。干预后观察三组小鼠行为学表现;最后一次雾化后24 h内采用颈椎脱臼法处死小鼠,取三组小鼠左肺组织,采用苏木素-伊红(HE)染色和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察支气管肺组织形态学变化;分别收集三组小鼠右肺支气管肺泡灌洗液(BALF),采用瑞氏吉姆萨染色法计数BALF中的炎症细胞数量,采用ELISA检测BALF中白介素(IL)-4、IL-10、IL-17。采用Western blotting法及免疫组化法检测支气管肺组织中CXCL10、CXCR3相对表达量。结果哮喘模型组、雷公藤甲素组气道上皮杯状细胞占比高于对照组(P<0.05),雷公藤甲素组气道上皮杯状细胞占比低于哮喘模型组(P<0.05)。哮喘模型组、雷公藤甲素组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、IL-4、IL-17高于对照组,IL-10低于对照组(P<0.05);雷公藤甲素组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、IL-4、IL-17低于哮喘模型组,IL-10高于哮喘模型组(P<0.05)。Western blotting法及免疫组化法结果显示,哮喘模型组、雷公藤甲素组支气管肺组织中CXCL10、CXCR3相对表达量高于对照组,雷公藤甲素组支气管肺组织中CXCL10、CXCR3相对表达量低于哮喘模型组(P<0.05)。结论雷公藤甲素能够减少哮喘小鼠气道上皮杯状细胞及BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞,下调促炎因子IL-4、IL-17,上调抑炎因子IL-10,同时抑制CXCL10、CXCR3表达;雷公藤甲素减轻哮喘小鼠气道炎症的机制可能与其可调控CXCL10/CXCR3轴有关。