波形蛋白在B族链球菌引发新生儿脑膜炎中的作用及其机制

目的 评价波形蛋白(vimentin,Vim)在B族链球菌(group B streptococcus,GBS)引发新生儿脑膜炎中的作用,并探讨其作用机制,以期为新生儿GBS脑膜炎预防和治疗提供实验依据。方法 以人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell,HBMEC)为细胞模型,通过转染Vim小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,构建HBMEC的Vim抑制株,同时设转染NC siRNA组(转染阴性对照序列),Western blot及免疫荧光法检测Vim抑制效果。转染48 h后,按MOI=100感染GBS,分别于感染2和3 h进行黏附及侵袭试验;感染3 h后,采用Western blot及免疫荧光法检测抑制Vim对HBMEC中NF-κB p65核转位的影响;Western blot法检测抑制Vim对HBMEC内ERK通路激活相关蛋白及炎性因子表达水平的影响。结果 与转染NC siRNA组比较,转染Vim siRNA1组HBMEC中Vim蛋白表达水平及荧光强度均显著降低(t分别为3.242和71.51,P分别<0.05和<0.001)。与NC siRNA+GBS组比较,Vim siRNA+GBS组黏附率及侵袭率均显著降低(t分别为9.949和30.050,P均<0.001);磷酸化p65水平显著下降(t=2.824,P <0.05),p65蛋白的核转位现象受到抑制,核内绿色荧光强度大幅下降;TNF-α、IL-6、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)蛋白水平受到显著抑制(t分别4.000、6.367、3.872,P均<0.05)。结论 抑制Vim可减少GBS对HBMEC的黏附及侵袭,抑制NF-κB及ERK信号通路的激活及下游炎性因子的产生,从而减少GBS对HBMEC的损伤。

盐酸美金刚促进中性粒细胞对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌作用及其机制

目的探索盐酸美金刚(memantine hydrochloride,MEM)促进中性粒细胞对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的杀菌作用并探索其分子机制。方法采用不同浓度的MEM与感染MRSA的中性粒细胞共孵育4 h后,取适量菌液涂LB平板培养、计数;收集共孵育后的中性粒细胞检测活性氧生成和中性粒细胞胞外诱捕网的释放情况。建立小鼠MRSA感染模型,给予或不给予MEM处理,收集血液、脾脏、肾脏进行菌落计数及血液中的降钙素原检测。MRSA感染小鼠后,腹腔注射MEM或PBS,记录48 h小鼠存活率,绘制生存曲线。结果与未加MEM组相比,MEM处理后的混合培养液中MRSA数量显著减少,且在一定浓度范围内,MRSA的存活数随着MEM浓度的升高而减少。此外,MEM能显著促进中性粒细胞产生活性氧以及胞外诱捕网的形成。动物实验显示,MEM组小鼠血清降钙素原浓度显著降低,血液及脏器中的载菌量显著降低,48 h小鼠存活率较PBS组显著升高。结论MEM能显著增强中性粒细胞对MRSA的杀菌作用,其机制可能是MEM促进了中性粒细胞活性氧和胞外诱捕网的产生。