Tim-3和PD-1在慢性丙型肝炎患者不同单核细胞亚群的表达水平分析

目的分析慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单核细胞亚群分布,同时观察负性调节分子T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白3(Tim-3)和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)在各亚群表达的变化及意义。方法利用流式细胞术检测CHC患者外周血单核细胞亚群比例和各亚群Tim-3、PD-1表达,并与临床指标如丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)采用Spearman方法进行相关性分析。结果与健康对照组比较,CHC患者外周血CD14^+CD16^+单核细胞比例增高,以CD14CD16^+单核细胞比例增高显著。Tim-3在CD14CD16-单核细胞和CD14^+CD16单核细胞上表达水平升高;PD-1在CD14CD16-单核细胞和CD14CD16^+单核细胞上表达水平升高。CHC患者单核细胞亚群以及各亚群Tim-3、PD-1和临床指标ALT及AST无明显相关性。结论 Tim-3和PD-1在不同单核细胞亚群表达水平不同。

T细胞衰老与慢性肝炎病毒感染相关研究进展

机体年龄的增长和病毒感染都会引起免疫衰老,主要表现在T淋巴细胞数量、细胞亚群数量、细胞膜表面分子及功能发生变化,导致T细胞免疫功能下降和异常。T淋巴细胞衰老的主要原因是端粒长度缩短或者端粒酶功能受损而导致。而影响端粒长度和端粒酶功能的是活性氧的产生以及细胞应激通路引起的DNA损伤。当乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒感染机体后,机体的CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞功能会受到影响,表达衰老相关蛋白。我们总结了引起T细胞衰老的原因,T细胞衰老后特征和相关的信号通路,以及T细胞衰老在慢性肝炎感染免疫失调中的作用机制。

单核细胞介导的固有免疫在丙型肝炎感染中的作用

全球目前有1．3～1．7亿丙肝患者，每年以300～400万的速度增长［1］，主要是由于输注污染血液制品、毒品注射和不安全的治疗感染和传播病毒。丙型肝炎病毒（hepatitis C virus， HCV）感染人体后，首先经历一个急性感染过程，在急性感染的早期，HCV 强烈复制，激活固有免疫反应，在肝脏诱导干扰素刺激基因（IFN-stimulated genes，ISGs）的形成，诱导和激活 I和 III 型干扰素（interferon，IFN），限制病毒复制，但不能完全清除病毒。在急性感染晚期，HCV 特异性 T 细胞招募至肝脏，通过细胞毒性和γ-IFN 介导的非细胞毒性机制有效地抑制病毒复制，之后30％的患者自发完全清除了病毒，约70％的患者病毒持续感染发展为慢性，此期病毒难以自发清除［2］。病毒感染宿主后产生不同结果的机制目前尚不清楚，这与宿主免疫细胞与 HCV 相互作用有直接关系，通过理解免疫系统不同细胞和病毒之间相互作用可以将丙型肝炎潜在的治疗目标确定为克服免疫失调和控制病毒感染。T 淋巴细胞介导的适应性免疫在丙型肝炎研究多有报道，病毒感染后几周甚至几个月才能启动，且会介导免疫损伤，以至难以清除病毒［3］。当 HCV 感染人体后，固有免疫反应依靠抗原和关键感知通路相互识别激活，诱导产生 IFN、促炎因子和趋化因子以抑制病毒复制和传播，固有免疫不仅为启动适应性免疫赢得时间，而且在后者的激活发挥了重要的作用［4］。相对于适应性免疫而言，之前研究认为固有免疫是机体遇到外来抗原后首先迅速启动的免疫反应［2］，最近越来越多的研究表明固有免疫在宿主和病毒相互作用的整个免疫时相亦发挥了重要的作用。单核细胞是固有免疫的代表性细胞，在抗击外来抗原包括病毒入侵、复制等发挥着极其重要的作用。

无刚毛鳞甲复合体同源物样蛋白2在慢性丙型肝炎患者中的表达及其与血清球蛋白的关系

目的探讨慢性丙型肝炎(CHC)患者和健康志愿者外周血CD4+CXCR5+PD-1+T淋巴细胞与血清球蛋白之间的相关性,明确外周血滤泡辅助性T淋巴细胞(Tfh)转录因子无刚毛鳞甲复合体同源物样蛋白(Ascl)2的表达在慢性HCV感染过程中的作用。方法选取2015年10月-2016年5月第四军医大学唐都医院收治的住院或门诊初治CHC患者46例,另选取实验室健康成年实验人员以及本院健康体检者32例作为健康对照组。应用流式细胞技术分析外周血中Tfh细胞在CD4+T淋巴细胞中所占比例及其亚群(CD4+CXCR5+PD-1+T淋巴细胞)变化,应用全自动生化分析仪检测血清球蛋白水平,并通过real-time PCR检测Tfh细胞中Ascl2 mRNA表达情况;分析各指标变化与HCV感染的相关性。计量资料组间比较采用独立样本t检验,相关性分析采用Pearson相关分析。结果 CHC患者外周血Tfh细胞与B淋巴细胞呈正相关(r=0.582 3,P=0.011 2),外周血B淋巴细胞与球蛋白呈正相关(r=0.450 9,P=0.031 6),Tfh细胞与球蛋白呈正相关(r=0.583 5,P=0.038 3);CHC患者外周血Tfh细胞中Ascl2mRNA表达显著高于健康对照组(1.019±0.666 vs 6.437±5.776,t=4.552,P=0.001 9)。结论 Tfh细胞与CHC患者血清中球蛋白的产生有一定的联系,转录因子Ascl2可能参与HCV感染过程中Tfh细胞的分化发育。

HCV感染者直接抗病毒药物治疗前后CD8^+T淋巴细胞衰老和功能相关指标的变化

目的观察HCV感染者DAA治疗前后CD8^+T淋巴细胞衰老、功能相关指标变化,并探讨其临床意义。方法选取2017年1月-2018年12月于空军军医大学第二附属医院就诊的HCV感染者26例,患者接受索磷布韦联合达卡他韦片治疗。并纳入治愈者22例,健康对照者20例。采用流式细胞仪检测CD8+T淋巴细胞上SIRT1、CD57、PD-1、Tim-3等相关分子表达,并采用RT-PCR方法检测p21、p53表达水平,Luminex液相悬浮芯片检测样本外周血衰老相关分泌表型。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 SIRT1、PD-1、Tim-3在3组间表达差异均有统计学意义(F值分别为6. 712、4. 202、4. 575,P值均<0. 05)。与健康对照组相比,HCV组CD8+T细胞上SIRT1、PD-1、Tim-3表达水平明显上升(P值均<0. 05),HCV治愈组Tim-3表达水平明显上升(P <0. 05),HCV治愈组SIRT1、PD-1表达水平无明显变化(P值均> 0. 05)。p53、p21在3组间表达差异有统计学意义(F值分别为11. 144、6. 594,P值均<0. 05)。与健康对照组相比,HCV治愈组和HCV组p53表达水平明显下降(P值均<0. 001),p21表达水平明显下降(P值均<0. 05),HCV组和HCV治愈组比较差异均无统计学意义(P值均> 0. 05)。IL-6、TNFα在3组间差异均有统计学意义(F值分别为3. 920、6. 337,P值均<0. 05),与健康对照组相比,HCV组外周血的IL-6和TNFα表达水平明显升高(P值均<0. 05),HCV治愈组IL-6和TNFα表达水平无明显变化(P值均> 0. 05),与HCV组相比,HCV治愈组TNFα表达水平明显下降(P=0. 007)。结论 HCV感染者CD8+T淋巴细胞衰老,经DAA治疗后衰老缓解,CD8+T淋巴细胞功能部分恢复。

miRNAs与丙型肝炎病毒感染的相关研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）是一种嗜肝的,有包膜的单股正链RNA病毒,归属于黄病毒科。HCV基因组包含了5’和3’非翻译区,这两个非翻译区对病毒的复制和翻译起到了重要的作用。HCV基因组的5’非编码区（non-coding region,NCR）中包含一个内核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）,可与40S核糖体亚单位有效结合,成为病毒翻译的起始位点,帮助病毒基因组合成一个约为3 010个氨基酸的多蛋白前体,这个氨基酸前体接下来被病毒以及宿主细胞中的酶酶解成3个结构蛋白和7个非结构蛋白.

H7N2禽流感病毒HA的分离纯化及其糖链谱研究

血凝素(HA)是位于流感病毒囊膜表面的一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,是流感病毒结合宿主细胞表面受体,介导病毒入胞的关键分子,也是中和抗体以及疫苗研制的重要靶标.HA表面糖基化与病毒毒力、感染宿主范围等密切相关,且其表面糖链变化会影响其结构与功能.然而目前关于流感病毒HA糖基化的研究主要集中在其糖基化位点上,而对于HA上详细的糖链结构知之甚少.本文应用禽流感病毒特异识别的唾液酸糖链(SAα2-3Gal)受体,制备特异的糖链磁性微粒复合物,进而从H7N2禽流感病毒中分离纯化HA,并采用SDS-PAGE及质谱技术进行鉴定.确定提取物系HA后,进一步利用凝集素芯片联合质谱技术研究禽流感病毒H7N2的HA表面糖型,结果显示H7N2禽流感病毒HA表面主要含有岩藻糖、半乳糖、N-乙酰半乳糖胺、甘露糖、N-乙酰葡糖胺等糖链结构,共获得16个糖链结构较为准确的寡糖,这些糖链可能与HA生物学功能相关.本研究有助于揭示禽流感病毒感染宿主的糖链作用机制,有助于设计制备针对HA相关的糖链疫苗.

SIRT1的调节及其在感染性疾病中的作用

沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,SIRT1)是一种NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶,参与多种生物学进程,如细胞分化、衰老、凋亡和能量代谢等。SIRT1受到多种蛋白及miRNA的调节,对多种免疫性疾病、肿瘤性疾病及感染性疾病具有显著影响。本文主要对SIRT1的调控及其在感染性疾病中的作用机制进行综述。

浅论现代税收法定主义之“法定”

现代税法体系的核心理念是税收法定主义精神。纵观西方国家立法中税收法定主义的发展阶段及相关历程,税收法定原则其实质在于限制政府征税权,保障纳税人私人财产权利。文章认为,税收法定主义的核心在于"法"与"定",明确税收法定的基本内容,对我国税法体系建立将起着重大的作用。

稳定性冠心病患者血清甲状腺激素水平与亚临床甲状腺功能减退症及冠状动脉侧支循环的关系研究

目的本研究探讨血清甲状腺激素水平与冠状动脉侧支循环(CCC)形成的关系。方法回顾性分析了2015年6月至2017年6月期间来我院检查且接受冠状动脉造影手术的429例患者。CCC程度按Cohen-Rentrop方法分类,通过化学发光免疫测定技术评估血清中三碘甲状腺原氨酸(FT3),游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺激素(TSH)水平。结果糖尿病(P=0.019),吸烟(P<0.001),TSH(P<0.001),FT3(P<0.001),FT4(P=0.015)和SCH(P=0.015)在CCC形成良好与不良组中差异有统计学意义。在回归分析中,TSH(OR=2.397;95%CI=1.937-3.625;P<0.001),FT3(OR=0.169;95%CI=0.046-0.429;P<0.001),心力衰竭(OR=0.139;95%CI=0.039-0.754;P=0.027),并且高血脂症(OR=1.807;95%CI=1.010-3.234;P=0.042)是稳定冠状动脉疾病(CAD)患者CCC形成不良的独立预测因子。结论除传统危险因素外,SCH,高血清TSH浓度,低FT3水平与阻塞性CAD患者CCC形成有关。

青少年肥胖患者血清可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体检测的临床意义

目的探讨可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)作为新炎症标志物在青少年肥胖患者中的作用。方法招募120例年龄在12～17岁之间的青少年入组,肥胖青少年60例为试验组,健康青少年60例为对照组。采用酶联免疫吸附测定法检测血清瘦素、脂联素,suPAR,IL-6和纤维蛋白原。结果试验组青少年的suPAR,瘦素、白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hsCRP)及纤维蛋白原水平均明显高于对照组(t=4.319～12.398,均P<0.05);试验组血清脂联素水平明显低于对照组(t=3.664,P<0.05)。ROC分析结果显示血清suPAR区分肥胖青少年与对照组的ROC曲线下面积为0.85,显著大于脂联素及IL-6(Z=2.655,2.030,均P<0.05),小于瘦素(Z=2.012,P<0.05)。血清suPAR区分肥胖青少年与对照组的最佳临界值为4.53μg/ml,对应的敏感度为67%,特异度为90%。结论青少年肥胖患者血清suPAR显著升高,其可能成为肥胖相关的全身亚临床炎症反应及免疫激活的新型生物标志物。

传统美食在“想象世界”发生的故事——地球上“最后的午餐”

“起床了!最后一天了。”一大早,我就被妈妈的大嗓门吵醒。睁开疲惫的双眼,我看到墙上的电子日历显示今天是2053年9月8日——下午我们就要搬离地球去宇宙空间站了。“快来看呀!”妈妈手捧螺蛳向我们展示,兴奋不已。

疏水蛋白HGFI用于载基因组织工程支架的研究

以具有两亲性的疏水蛋白HGFI为基础,通过正负电荷的相互作用将质粒与PEI的复合体固定在了修饰有疏水蛋白HGFI的PCL支架材料上.对不同时间段释放的质粒进行了定量测量并绘制曲线,结果表明载基因支架上的基因有四分之三左右在固定的12 h内释放.用载基因支架进行体外293T的转染实验,载基因支架的转染效率为21.76%.该转染效率与直接用转基因试剂对贴壁细胞转染的效率低很多,但对于组织工程支架来说,已具有一定的基因递送功能.大鼠皮下埋植实验表明,在体内埋植3 d后,载基因支架有着良好的体内转染效果,对体内的转基因阳性细胞进行初步检测发现,支架埋植初期有大部分被转染细胞为巨噬细胞,而对巨噬细胞进行转染是否对组织修复有益还需进一步的研究.大鼠皮下埋植2 w后,对埋植的材料进行血管化的检测,组织切片进行vWF免疫荧光染色和成像,成像结果说明载基因支架显著地促进了支架材料在体内的血管新生,推测支架上固定的质粒在体内转染后表达出了目的蛋白e NOS,从而促进了支架材料周围组织的血管化.本实验中,载基因支架的转染效率还需进一步提高,体内转基因阳性细胞的种类还需进行进一步鉴定,功能蛋白eNOS的表达和检测还需要进一步的研究.

端粒保护蛋白TRF2的研究进展

端粒是染色体末端的核蛋白结构。染色体末端重复的端粒DNA可以规避不适当的DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)的激活,维持染色体的稳定性,端粒的缺失会引起染色体融合并导致细胞的衰老及死亡。端粒特异性蛋白复合物Shelterin在保护端粒完整性方面具有重要作用。在这个复合体中,端粒结合因子2(telomeric-repeat binding factor 2,TRF2)在维持端粒稳定、防止端粒染色体末端融合以及端粒染色体复制过程中发挥关键作用。该文综述了TRF2介导的保护染色体末端的多方面的机制。

LMP-1单链抗体基因修饰人外周血单个核细胞的构建及鉴定

目的:构建携带抗-1型潜伏膜蛋白(anti-LMP-1)的单链抗体序列的过表达载体并包装慢病毒,构建及鉴定LMP-1单链抗体基因修饰的人外周血单个核细胞(PBMCs)。方法:根据Gen Bank中LMP-1单链抗体、CD28及CD3ζ序列设计引物并合成,从已有pVitro-IgG-1载体钓取IgG-1-Fc段,并分别插入慢病毒表达载体,获得p CDH-anti-LMP-1-IgG-Fc-CD28-CD3ζ(CAR)及pCDH-CD28-CD3ζ(对照VEC)并测序鉴定,测序成功后采用三质粒包装系统(核心质粒pCDH、包装质粒pSPAX2和pMD2.G)分别包装慢病毒CAR及VEC;浓缩慢病毒并离心感染PBMCs,经荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,并利用流式细胞术检测GFP+比率以鉴定目的蛋白的表达。结果:构建了过表达LMP-1单链抗体基因的质粒并成功包装慢病毒,浓缩慢病毒感染PBMCs后GFP+细胞数可达42.5%(VEC-PBMCs)及51.0%(CAR-PBMCs)。结论:为进一步研究anti-LMP-1修饰的PBMCs对LMP-1阳性肿瘤细胞的靶向杀伤奠定了实验基础。