2006-2007年云南流行H9N2禽流感病毒血凝素全基因序列分析

为调查云南省H9N2亚型禽流感病毒的分子流行病学情况,对2006年6月至2007年4月从云南省16地州随机采集了各种家禽、家猪的5 728份喉气管和口腔棉拭子样品进行RT-PCR检测,276份样品呈H9N2阳性。将具有代表性的17份阳性样品的HA全长基因序列测定和分析。结果表明:株间HA基因同源性为91%～100%,推导氨基酸同源性95%～100%,所测序列与云南1999年分离H9N2毒株ackynkenxie-1-99的同源性仅为93%。根据HA基因同源性,可将17个毒株可分为2个亚群,一个亚群的12株HA基因同源性高达97%以上,与Qa/ST3143/05和C/Bei1/94同源性是97%和93%,其中的11株毒株HA基因全长1 671,编码556aa,存在第6～9位4 aa缺失,只有AC/Yndq/06株HA基因1 683,编码560 aa。另外一个亚群的其余5株,同源性98%以上,HA基因全长1683 bp,编码560 aa。17个毒株中3个存在218～220 aa糖基化位点变异,1个毒株551～553 aa糖基化位点发生变异。所有毒株在HA裂解位点处没有连续性碱性氨基酸插入,受体结合位点处的氨基酸没有变异。

猪链球菌病的综合诊断与治疗

猪链球菌病是由致病性链球菌感染引起的,临床上有败血型、脑炎型、关节型和淋巴结炎型4种表现。其中败血型链球菌病与急性猪瘟、急性猪丹毒表现相似,应从临床症状、发病年龄、病理变化及进行实验室检查等方面才能确诊。免疫接种时宜选用多价疫苗,药物防治可通过药敏试验筛选敏感药物,加强饲养管理有助于减少该病的发生。

犬瘟热病毒Yunnan株H基因的克隆与表达

根据已发表的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株的序列设计两对引物,以犬瘟热病毒云南株感染的Vero细胞收获病毒提取的总RNA为模板,RT-PCR扩增出H基因的939 bp(H基因前段,H1)和920 bp(H基因后段,H2)片段,分别将其定向克隆于PET-28a(+)中,将重组质粒转化宿主菌BL21(DE3)plysS,在35℃1、.0 mmol/L IPTG诱导下获得良好表达,经SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白为34 ku,与预期大小一致。免疫印迹试验显示,该重组蛋白可被CDV Onderstepoort株多克隆抗体识别,表明该重组蛋白具有抗原性。

H5N1和H9N2禽流感病毒HA抗原性对比分析和基因免疫研究

根据H9N2和H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因序列,设计合成全基因扩增引物,将RT-PCR扩增2个毒株的HA基因进行序列测定,对推导的氨基酸序列通过MIF Bioinformatics软件进行抗原表位分析和糖基化位点进行分析。构建2个基因的真核表达质粒,检测2个毒株的HA基因疫苗免疫后外周血中HA特异性抗体的效价,并比较HA2个亚型免疫应答特异性的差异。结果表明,2株毒株禽流感病毒血凝素抗原表位和糖基化位点存在较大差异,重组质粒免疫后成功地诱导了体液免疫反应。两种亚型禽流感的HA基因免疫诱导的对本亚型病毒的抗体应答水平明显高于另一亚型。

抗禽流感病毒药物的活性筛选研究

目的:观察药物对禽流感病毒抑制作用。方法:固定病毒稀释药物的微量中和实验法,采用体外细胞培养技术,将系列稀释的药物与固定量病毒在细胞上感作后,置适宜条件培养5～7d,同时设相应对照,以病毒所致的特异性细胞病变(CPE)作为观察指标,用Reed-Muench法计算中和结果,凡药物能保护细胞不出现特异性病变的定为该药对病毒有抑制作用,测定治疗指数TI值。结果:药物能减少H5N1型的禽流感病毒引起的CPE,药物对照实验也出现同样结果。结论:药物对H5N1型的禽流感病毒有抑制作用。

Prion蛋白致病机理的研究

Prion这一术语是Prusiner提出的，其中Pr源自英文蛋白质（protein），i源自英文传染性的（infectious），on意指粒子（particle）。Prions病也称为传染性海绵状脑病（transmissible spongiform encephalopathies，TSEs），是发生于动物与人类的一种致命性神经退行性疾病（Attwood等，2000）。

利用虎全血制备白细胞干扰素的临床治疗研究

干扰素具有广泛的抗病毒活性以及较强的免疫调节作用。利用成年虎白细胞适量制备干扰素治疗幼虎,取得了较好的治疗效果。为养殖者提供了新的疾病预防和控制的方法。

2006年-2008年河南省PRRSV分子流行病学调查

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株的NSP2,ORF5-7基因的核苷酸序列,设计合成5对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出10株PRRSV河南地方株的NSP2和ORF5-7片段,将扩增片段克隆到pMD-18T载体并进行测序。应用DNAStar序列分析软件对分离株的NSP2和ORF5-7基因和其推导的氨基酸序列与不同来源的PRRS毒株进行了同源性比较,结果表明PRRSV河南分离株的NSP2和ORF5-7基因与不同来源美洲型毒株之间的同源性分别为89.1%-98.1%和81.4%-96.1%,而与欧洲型毒株之间的同源性仅为46.7%-61.7%和44.7%-45.9%;同时将PRRSV河南分离株NSP2和ORF5-7基因的推导氨基酸序列与其他美洲型PRRSV毒株进行变异分析比较,证实了PRRSV河南分离株NSP2和ORF5-7基因发生了变异。

禽流感诊断技术研究进展

近年来,禽流感已严重威胁到人类的健康,快速、准确的诊断技术对于禽流感的预防显得非常重要。作者就禽流感病毒的诊断技术研究进展作一综述,从而为有效预防和控制禽流感的流行和暴发提供简便、高效的检测技术。

猪繁殖与呼吸综合征病毒JL07SW株Nsp9基因的序列分析及原核表达

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株及变异毒株(HB-1、SY0608、HN-HW、HuN4等)的核苷酸序列,利用Primer软件设计合成针对PRRSV Nsp9基因保守区域的特异性引物。用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW株Nsp9基因片段,克隆到pMD18-T载体并测序,基因克隆至表达载体pET-28a(+),得到重组表达载体pET-28a-Nsp9,转化BL21(DE3)细胞。经IPTG诱导,Nsp9蛋白以包涵体形式表达,SDS-PAGE分析表明重组蛋白的分子量约为34.8 kD,表达量占菌体蛋白的40.32%。Western-Blotting结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。表达的重组蛋白为进一步制备抗Nsp9单抗及建立区分野毒和灭活毒感染的ELISA方法提供物质基础。

产后奶牛灌服丙二醇对血浆葡萄糖和酮体含量的影响

[目的]了解丙二醇对产后奶牛血浆中葡萄糖和酮体含量的影响及牛奶中丙二醇残留情况。[方法]选择18头预产期在5~20 d内的经产牛,随机分成3组。对照组不灌服丙二醇,试验1组产后2 h内灌服丙二醇500 g/头,试验2组产后2 h内灌服丙二醇300 g/头,牛只饲养管理按照场内程序进行。灌服后每天三班次挤奶采样,第2天清晨空腹采集尾静脉血液。测定牛奶中丙二醇含量、血浆中葡萄糖和酮体含量。[结果]灌服后8 h内,牛奶中丙二醇含量达到最高,16 h、24 h含量逐渐降低,在32 h时未检出丙二醇。在每个时间点,试验1组牛奶中丙二醇含量均高于试验2组;试验组血浆葡萄糖含量高于对照组,试验1组血浆葡萄糖含量3.49μmol/mL,试验2组血浆葡萄糖含量3.28μmol/mL,对照组血浆葡萄糖含量2.07μmol/mL,灌服丙二醇对血浆葡萄糖含量有显著影响(P<0.05),试验1组血浆葡萄糖高于试验1组,但差异不显著(P>0.05)。试验组血浆中酮体含量低于对照组,试验1组血浆酮体含量1.14μmol/mL,试验2组血浆酮体含量1.47μmol/mL,对照组血浆酮体含量3.20μmol/mL,灌服丙二醇显著降低血浆中酮体水平(P<0.05)。试验1组血浆酮体低于试验2组,差异不显著(P>0.05)。[结论]灌服丙二醇后,牛奶中丙二醇残留量极低,对牛奶质量安全没有影响。灌服丙二醇能显著增加血浆葡萄糖含量,降低酮体水平,改善奶牛能量负平衡状况,灌服量500 g组/头优于300 g组/头。

奶牛乳头瘤病毒感染的PCR诊断

[目的]对云南省昆明市某奶牛场奶牛皮肤乳头状赘生物突起,疑为乳头瘤病毒感染的皮肤病进行PCR诊断。[方法]无菌采集皮肤乳头状赘生物,病料提取DNA,采用乳头瘤病毒通用PCR诊断试剂盒扩增。[结果]对扩增产物电泳,与基因Maker比较,产物符合预期200 bp大小,诊断为乳头瘤病毒感染。[结论]该奶牛场奶牛皮肤乳头状赘生物突起确诊为乳头瘤病毒感染。由于该病无特效治疗药物,一般采取手术治疗。建议该场对病牛采取隔离治疗,对圈舍、牛栏、饲槽等清洗消毒,有效控制该病。

独龙牛和云岭牛初乳的理化特性比较

【目的】通过对独龙牛(Bos frontalis)和云岭牛初乳成分测定,揭示两牛种初乳成分的差异性。【方法】采集独龙牛和云岭牛(年龄、胎次和饲养管理基本一致)分娩第1天初乳样品共45份,测定其乳蛋白、乳脂肪、乳糖、总固形物(TS)、非脂固形物(SNF)和乳尿素氮(MUN)含量及体细胞数(SCC)和冰点(FP),采用独立样本t检验比较独龙牛和云岭牛初乳成分差异。【结果】独龙牛初乳中乳蛋白、乳脂肪、TS、SNF含量分别为16.77%、4.70%、27.82%和22.39%,比云岭牛的分别高28.11%(P<0.01)、5.38%(P>0.05)、22.45%(P<0.01)和26.93%(P<0.01);乳糖、MUN含量和SCC分别为2.98%、354.2 mg/L和35.73×10^(4)/mL,比云岭牛的分别低10.38%(P<0.05)、39.63%(P<0.01)和78.60%(P<0.01);FP为-0.5337℃,比云岭牛的高0.1383℃(P<0.01);乳脂蛋白比(FPR)为0.266,比云岭牛的低0.131(P>0.05)。【结论】独龙牛和云岭牛分娩第1天的初乳成分存在较大差异,独龙牛初乳营养价值较高。

奶牛结核病皮内变态反应和γ-干扰素法检测对比实验

本研究用双变态反应和γ-干扰素体外释放实验对昆明市某奶牛合作社75头奶牛开展结核病检疫对比实验,单皮试反应(SCT)的检出率为19.0%、双皮试反应(CCT)的检出率13.3%、γ-干扰素实验法(IGRA)的检出率为25.3%。75头牛中SCT、IGRA共同阳性为7头,阳性符合率为36.8%(7/19),阴性符合率91.0%(51/56)。CCT、IGRA两种方法的符合率,75头牛中共同阳性为7头,阳性符合率为36.8%(7/19),阴性符合率94.6%(53/56)。鉴于单纯皮内变态反应诊断的局限性,应进行双侧变态反应,结合γ-干扰素实验法进行检疫。由于γ-干扰素实验法的价格贵,操作要求高,在操作中应严格按照操作要求进行,并进行重复检测。

乙酰氨基阿维菌素对奶牛寄生虫治疗效果评价实验

为评价乙酰氨基阿维菌素在治疗奶牛寄生虫的治疗效果,进行了本评价试验。实验用10头经粪便检查为阳性的奶牛,在用药前后进行粪便中寄生虫虫卵计数,分析乙酰氨基阿维菌素的治疗效果。结果:第8d,10头奶牛寄生虫虫卵的下降率平均值为34%,第15d,10头奶牛的寄生虫虫卵的下降率平均值为45%。奶牛产奶量无显著变化。结论:乙酰氨基阿维菌素对奶牛的体内线虫有较好的杀灭作用。乙酰氨基阿维菌素对奶牛的食欲、健康、产奶性能无显著影响。

口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌对提高牛呼吸道先天免疫力的研究

本研究采用O型口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌喷鼻气雾免疫健康牛,并设单独使用枯草芽孢杆菌组、灭活病毒、常规疫苗免疫组和空白对照组,评价O型口蹄疫灭活病毒配合免疫增强剂枯草芽孢杆菌通过喷鼻气雾免疫健康牛对其呼吸道先天免疫力的影响。通过免疫组织化学染色显示,免疫后灭活病毒配合免疫增强剂试验组牛鼻黏膜与肺内支气管黏膜中TLR7的表达和CD3^+淋巴细胞呈极显著增多(p<0.01);而常规口蹄疫灭活苗对其TLR7的表达和CD3^+淋巴细胞数量的影响不显著(p>0.05)。ELISA检测结果显示,与对照组相比,灭活病毒配合免疫增强剂试验组牛呼吸道组织中IL-12水平呈极显著增加(p<0.01),IL-4和IL-10水平无明显差异(p>0.05);而常规口蹄疫灭活苗对牛呼吸道组织中IL-4、IL-10和IL-12的影响不明显(p>0.05)。表明O型口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌能够提高牛呼吸道先天免疫力。本研究为研发口蹄疫灭活病毒的鼻腔疫苗提供重要的试验数据和参考。

2例猪饲料中黄曲霉毒素B_1中毒实例分析

本文总结了2例猪食用被黄曲霉毒素B_1污染的饲料后出现的病理临床症状,并经过实验室检测确诊属于黄曲霉毒素B_1中毒。养殖户停用并更换不合格的饲料,采用以排毒、保肝为目的的药物治疗原则对猪群进行治疗后,养殖场的猪均恢复到健康正常的状态。因此,要尽量选择质量、信誉、口碑较好的大厂家生产的饲料,尽量选择全价饲料,加强管理,防止饲料发霉。

云南省嵩明县杨林镇青贮玉米品种筛选试验

为了研究筛选适合云南省嵩明县杨林镇地区种植的全株玉米青贮品种,选用3个青贮玉米专用品种(专玉1、专玉2、专玉3)和2个普通玉米(普玉1、普玉2),以5500株/亩的密度种植,在玉米籽实乳浆线达到1/2时收割,测定玉米的株高、叶片数、茎粗、穗重和鲜重产量。结果表明,青贮玉米专用品种在株高、叶片数、茎粗、穗重和鲜重产量都显著优于普通玉米(P<0.05)。鲜重产量由高到低顺序为:专玉3(7810 kg/亩)、专玉2(7425 kg/亩)、专玉1(7040 kg/亩)、普玉2(5280 kg/亩)、普玉1(4895 kg/亩)。经SPSS16.0多元回归分析,得出曲线为:Y(产量)=3108-9646×X1(株高)+1334×X2(叶片数)+21×X3(穗重)+3576×X4(茎粗)。研究显示,青贮玉米专用品种产量显著高于普通玉米品种,该地区适宜种植青贮玉米专用品种3号(专玉3)。

云南省不同季节对奶水牛日均产奶量和乳成分的影响

奶水牛具有抗热应激能力强,乳脂率、乳蛋白率高的优点。云南省具有悠久的奶水牛养殖历史,通过对2019年全省奶水牛的DHI测定数据分析,得出季节对奶水牛产奶量、乳脂率、乳蛋白率、乳糖含量、总固体含量、非脂固体含量、体细胞数和尿素氮的影响,为奶水牛饲养管理提供依据。季节对产奶量、乳脂率、乳糖含量、总固体含量、非脂固体含量的影响不显著,产奶量从低到高的顺序为:夏季(5.3 kg/天)、秋季(5.5 kg/天)、冬季(5.6 kg/天)、春季(5.7 kg/天);乳脂率从低到高的顺序为:夏季(5.69%)、冬季(6.11%)、春季(6.16%)、秋季(6.33%);乳糖含量从低到高的顺序为:夏季(4.96%)、秋季(5.00%)、春季(5.06%)、冬季(5.10%);总固体含量从低到高的顺序为:夏季(15.51%)、春季(15.78%)、冬季(16.12%)、秋季(16.28%);非脂固体含量从低到高的顺序为:春季(9.83%)、夏季(10.02%)、秋季(10.15%)、冬季(10.21%)。季节对乳蛋白率有极显著影响(p<0.01),从低到高的顺序为:春季(3.99%)、夏季(4.19%)、冬季(4.31%)、秋季(4.32%);季节对尿素氮的影响显著(p<0.05),从低到高的顺序为:冬季(20.33 mg/100 mL)、夏季(21.60 mg/100 mL)、春季(22.12 mg/100 mL)、秋季(22.62 mg/100 mL);季节对体细胞数有显著影响(p<0.05),从高到低的顺序为:夏季(42万个/mL)、春季(29万个/mL)、秋季(24万个/mL)、冬季(14万个/mL)。奶水牛对热应激的耐受力较强,但在夏季高温时仍表现出一定的热应激反应,奶水牛容易感染乳房炎。在奶水牛养殖中要注意防止热应激,饲料日粮配比要合理,注意环境卫生,防止乳房炎的发生。