LncRNA-Scarna10对白藜芦醇促进巨噬细胞M2极化影响的实验研究

目的:探讨lncRNA-Scarna10(Scarna10)对白藜芦醇(RSV)促进巨噬细胞极化的影响。方法:LPS构建RAW264.7巨噬细胞M1极化模型,RSV干预24 h,设置分组:control组、LPS组、RSV+LPS组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Scarna10表达水平,蛋白质免疫印迹法(western blotting)及免疫荧光检测巨噬细胞极化标志物(iNOS、Arg-1、CD206)表达。在RAW264.7细胞中沉默Scarna10,分为Si-NC组、LPS+Si-NC组、RSV+LPS+Si-NC组、RSV+LPS+Si-Scarna10组,检测转染后各组细胞内Scarna10、巨噬细胞极化标志物的表达。结果:经LPS诱导及白藜芦醇干预后,LPS组M1极化标志物iNOS蛋白表达水平升高,RSV+LPS组M2极化标志物Arg-1、CD206蛋白表达水平均升高,iNOS的蛋白表达水平下降,同时Scarna10在RSV+LPS组的表达较LPS组升高;沉默Scarna10后,与RSV+LPS+Si-NC组比较,RSV+LPS+Si-Scarna10组Scarna10表达及Arg-1、CD206蛋白表达水平均下降,iNOS的蛋白表达水平升高。以上各组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:Scarna10在RSV干预后的M1型巨噬细胞中表达升高,沉默Scarna10可以逆转RSV对M1型巨噬细胞向M2型转化的促进作用。

白藜芦醇通过巨噬细胞源性外泌体调节肝星状细胞活化对肝纤维化的影响

目的:探讨白藜芦醇(RSV)通过调节巨噬细胞影响肝星状细胞活化的机制。方法:以超速离心法提取空白组(NC-E组)和RSV处理(RSV-E)组外泌体并进行鉴定。将NC-E组及RSV-E组外泌体与转化生长因子-β1(TGF-β1)活化的肝星状细胞JS-1共培养,分为对照组、TGF-β1活化组(TGF-β1组)、NC-E+TGF-β1活化组(NC-E+TGF-β1组)和RSV-E+TGF-β1活化组(RSV-E+TGF-β1组)。采用免疫荧光法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、western blotting检测肌动蛋白A(α-SMA)和Ⅰ型胶原a1链(Col1a1)纤维化指标表达。Western blotting检测Beclin1和LC3Ⅰ/Ⅱ自噬相关指标表达。结果:与对照组相比,TGF-β1组α-SMA、Col1a1、Beclin1和LC3Ⅰ/Ⅱ表达水平升高(P<0.05);与TGF-β1组相比,RSV-E+TGF-β1组α-SMA、Col1a1、Beclin1和LC3Ⅰ/Ⅱ表达水平下降(P<0.05),NC-E+TGF-β1组与TGF-β1组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:RSV可能通过调节巨噬细胞源性外泌体抑制肝纤维化,其机制可能与抑制肝星状细胞自噬有关。