脐带源间充质干细胞对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的抑制作用

目的:观察人脐带源间充质干细胞(hUC-MSC)对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的影响,探讨其在免疫调控中的作用。方法:建立分离、扩增hUC-MSC的方法,检测其MHC表型;实验分3组:(1)单纯脐带血组(阴性组);(2)脐带血+丝裂原刺激组(对照组);(3)脐带血+丝裂原刺激+MSC共培养组(实验组);流式细胞术检测各组脐带血T细胞及其CD4+和CD8+亚型细胞共培养8h后早期激活标志CD69的表达,MTT法检测各组脐带血T细胞共培养5d后增殖情况。结果:成功建立分离、扩增hUC-MSC的方法,免疫表型分析显示hUC-MSC不表达HLA-Ⅱ抗原,低表达HLA-I抗原;流式细胞术检测示在hUC-MSC共培养情况下,经丝裂原刺激后,脐带血T淋巴细胞CD69表达与对照组[(22.6±5.2)%]的阳性率相比较,下降至(7.8±3.5)%(P<0.01),而且这种抑制对不同亚型T细胞(CD4+/CD8+)均起作用;MTT检测显示在hUC-MSC共培养条件下,丝裂原刺激T细胞增殖受到抑制,抑制的程度与hUC-MSC的剂量呈依赖性。结论:hUC-MSC对异源性脐带血T淋巴细胞激活和增殖具有抑制作用,而且这种作用为非选择性的,呈剂量依赖性。

脐带源间充质干细胞促进造血细胞在NOD/SCID小鼠归巢

目的探讨脐带源间充质干细胞(hUC-MSC)在促进造血细胞归巢,提高造血干细胞植入中的作用。方法RT-PCR检测经体外培养扩增所得hUC-MSC归巢相关分子的表达;将hUC-MSC和CFDA-SE荧光标记的人脐带血单个核细胞(MNC)植入NOD/SCID小鼠建立共移植模型,分离共移植24h后小鼠骨髓有核细胞,用流式细胞仪和荧光倒置显微镜观察脐带血造血细胞在NOD/SCID小鼠骨髓中含量的变化。结果hUC-MSC表达SDF-1及其受体CXCR-4以及相关黏附分子CD11a/ICAM-1、CD49d/VCAM-1;在hUC-MSC共移植情况下,流式细胞仪检测和荧光显微镜下细胞计数均发现人脐带血MNC在小鼠骨髓中的含量与单独脐带血移植相比较有显著提高〔(145±59)/1×105vs(298±72)/1×105;(755±158)/5×105vs(1598±227)/5×105个骨髓有核细胞;n=9,P<0.05)〕。结论hUC-MSC具有表达化学趋化因子及相关黏附分子的特性,有利于实现自身的归巢定位并引导造血干祖细胞的有效归巢与植入;动物模型的建立进一步证实其引导脐带血MNC在NOD/SCID小鼠体内向造血龛———骨髓富集(归巢)的作用。

Bmi-1及p14在结外NK/T细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的:本研究旨在探讨Bmi-1及p14蛋白在结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)中的表达情况及其临床意义。方法::采用免疫组织化学Maxvision法检测21例ENKTCL组织标本及11例正常淋巴结组织标本中Bmi-1及P14的表达水平并进行分析比较。结果:ENKTCL组织中Bmi-1表达显著高于对照组,且与患者的临床分期有相关性(P<0.05),而与患者的年龄、性别、外周血LDH、B症状及国际预后指数评分(IPI)均无相关性(P>0.05);相反在ENKTCL组织中P14的表达则低于对照组,且与患者的年龄、性别、临床分期、外周血LDH、B症状及国际预后指数评分(IPI)均无相关性(P>0.05)。在ENKTCL组织中Bmi-1及P14二者之间有负相关关系(r=-0.472,P=0.031)。结论:Bmi-1在ENKTCL组织中过表达,其对P14的负向调控可能在ENKTCL的发生及发展中发挥作用。

rhTNF-α联合bcl-2反义寡核苷酸对急性髓细胞白血病细胞株HL-60增殖与凋亡的作用

目的 探讨基因重组人类肿瘤坏死因子 α(rh TNF- α)和 bcl- 2反义寡核苷酸 (ASPO)对 HL- 6 0细胞增殖与凋亡的作用 ,进一步认识肿瘤坏死因子 α(TNF- α)和 bcl- 2两者调控肿瘤细胞凋亡的作用及相互联系。 方法 单独和联合应用 rh TNF- α和 bcl- 2 ASPO处理 HL- 6 0细胞 ,通过 MTT法检测 HL- 6 0细胞生长和存活特性变化 ;原位细胞凋亡检测和流式细胞技术检测细胞凋亡 ;应用 RT- PCR、免疫组织化学检测癌基因 bcl- 2表达的改变。 结果 rh TNF- α和 bcl- 2 ASPO的联合应用明显增强对 HL- 6 0细胞的增殖抑制 ;细胞凋亡率明显升高 ;癌基因bcl- 2在 m RNA和蛋白表达明显下降。 结论 TNF和 bcl- 2 ASPO在诱导 HL- 6 0细胞凋亡中可能存在协同作用 。

脐带间充质干细胞对T细胞的免疫调控研究

目的:研究脐带源间充质干细胞(UC-MSCs)异源T淋巴细胞的免疫调节作用。方法:从脐带中分离和培养间充质干细胞,流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;用Brdu法测定细胞增殖率,观察UC-MSCs对异体T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测共培养体系中CD4+、CD8+水平检测及UC-MSCs对T淋巴细胞转化的影响;且用ELISA法检测共培养上清细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平。结果:从脐带获得的MSC免疫表型分析显示,其不表达HLA-II抗原。对PHA刺激的脐带血T淋巴细胞,UC-MSCs对其的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性;UC-MSC与脐带血单个核细胞共培养体系中,CD8+细胞比例降低,与对照组有显著性差异(P<0.01),CD4+细胞比例无明显变化(P>0.05);UC-MSC抑制了共培细胞养体系中IFN-γ分泌,然而促进了IL-4的分泌,与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论:UC-MSCs抑制PHA刺激的T淋巴的增殖,能够改变T细胞亚群及T细胞分泌的细胞因子,这种抑制特性表明,UC-MSCs对免疫反应具负调节作用,可能为GVHD的防治以及自身免疫性疾病治疗提供一条新途径,有助于UC-MSC的临床应用。

脐带源间充质干细胞的分离和生物学性状

目的建立从脐带分离间充质干细胞的方法,并研究其生物学性状。方法脐带经酶消化后于DMEMLG/F12培养基中培养,倒置显微镜及电镜观察细胞形态学,细胞计数绘制细胞生长曲线,计数成纤维细胞集落形成单位(CFUF),流式细胞仪测定细胞周期及细胞免疫表型,免疫组织化学染色及RTPCR检测其体外诱导成脂肪和成骨分化的能力,RTPCR检测其细胞因子的分泌,与脐血来源CD34+细胞共同培养检测其支持造血的能力。结果经酶消化后,每cm脐带可得到中位数为1.01×106的有核细胞,CFUF产率为1/1609有核细胞,经贴壁传代可分离出成纤维样细胞,细胞倍增时间为(28.02±10.53)h。流式细胞仪分析细胞周期显示,>80%的细胞处于G0/G1期,S+G2+M期的细胞仅占(13.04±4.31)%。免疫表型分析显示,CD13、CD29、CD44、CD105(SH2)、CD73(SH3)、CD166和MHCI阳性,CD45、CD34、CD38、CD31和MHCⅡ阴性。体外诱导实验证实,该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。RTPCR显示,该细胞表达干细胞因子、血小板生成素,酪氨酸激酶受体配基、白细胞介素6、巨噬细胞集落刺激因子、白血病抑制因子、基质细胞衍生因子和血管内皮细胞生长因子,不表达白细胞介素3。与脐血来源CD34+细胞共同培养2周可见鹅卵石形成区,共培养8周证实其支持长期造血能力。结论建立从脐带中分离间充质干细胞的方法,脐带是间充质干细胞的新的来源。

人脐带间充质干细胞对NOD／SCID小鼠造血重建的影响

目的探讨脐带间充质干细胞(MSC)对NOD/SCID小鼠造血重建的影响。方法以足月胎儿脐带分离的MSC和脐血单个核细胞作为供体,化疗预处理后NOD/SCID小鼠作为受体。将小鼠随机分为以下3组(每组10只):单纯化疗组,仅做化疗预处理,不输注任何细胞;单移植组,化疗后输注单纯脐血单个核细胞(1×107/只);共移植组,化疗后输注脐血单个核细胞(1×107/只)和脐带MSC(1×106/只)。移植后第3、7、14、21、28天分别计数小鼠外周血白细胞,观察其变化;移植后第6周计算小鼠的生存率,并用流式细胞仪检测小鼠骨髓内人CD45+细胞的表达(即植入率)。结果共移植组小鼠移植后第14、21天外周血白细胞[分别为(5.73±0.38)×109/L、(5.90±0.42)×109/L]明显高于单移植组[分别为(3.30±0.58)×109/L、(4.83±0.41)×109/L],差异有显著性(P<0.05)。移植后第6周,共移植组小鼠骨髓人CD45+细胞表达明显高于单移植组(P<0.05),而两组小鼠生存率无显著性差异(P>0.05)。结论成功地建立了异种异基因小鼠脐血移植模型,脐带MSC作为一种新来源的MSC,能够促进造血重建,提高植入率,有望应用于临床共移植治疗中。

人脐带间充质干细胞体外分离、培养、扩增方法及生物学特性研究

目的建立从足月脐带分离间充质干细胞和体外传代培养技术，并对其生物学特性进行研究。方法采用双酶法分离脐带间充质干细胞，并通过传代进行纯化和扩增培养，绘制生长曲线；用流式细胞仪检测脐带表面抗原及细胞周期；采用软琼脂克隆实验以观察脐带致瘤性。结果成功建立了脐带间充质干细胞分离及培养扩增的方法；流式细胞仪检测结果显示，贴壁细胞均表达CD105、CD44、CD13和CD29，不表达造血细胞表型CD34、CD45和内皮细胞表型CD31，不表达CD106、CD166和HLA-DR；细胞倍增时间为30 h，细胞周期分析表明，G0-G1期和S＋G2＋M期所占比例分别为78.84%和11.16%，脐带间充质干细胞在软琼脂中无克隆形成。结论双酶法是一种较好的分离和培养方法间充质干细胞的方法，培养的细胞具有间充质干细胞的基本特性，无致瘤性，为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据。

帕纳替尼治疗慢性粒细胞白血病急淋变且T315I突变1例

帕纳替尼（Ponatinib）是阿瑞雅德制药公司研制的一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）,属于第3代TKI,是治疗成人慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）和Ph染色体阳性（Ph＋）急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）的口服药物,

存活蛋白重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

本研究旨在构建含有人存活蛋白(survivin)基因的重组腺病毒载体,并探讨其在转染树突状细胞中的表达。以质粒pcDNA3.0-survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全长序列。PCR产物回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pShuttle-CMV-survivin。通过双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pShuttle-CMV-survivin转化E.coliBJ5183菌(含腺病毒骨架质粒)并进行同源重组,然后筛选阳性克隆,提取质粒,将此重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染293细胞。制备病毒上清并测定其滴度,将病毒上清转染树突状细胞,应用Westernblot方法分析survivin的表达。结果表明成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.65×109pfu/ml。Westernblot鉴定显示,经重组腺病毒转染的DC可有效表达survivin。结论含survivin基因的重组腺病毒载体的构建成功,为下一步开展抗白血病免疫研究奠定实验基础。

244例造血干细胞移植的心血管并发症

目的:探讨造血干细胞移植(HSCT)治疗恶性血液病过程中心血管并发症的发生。方法:对1990年8月至2007年8月我院244例造血干细胞移植患者并发心血管疾病的情况进行回顾性分析。结果:244例无心血管病史和心电图正常的患者中有40例(16.39%)出现心血管系统井发症,除1例移植后早期心源性猝死外,其它移植患者的心血管症状均得到控制。心律失常19例(47.5%),是其中最多的心血管并发症,以窦性心动过速、频发性房性早搏、室性早搏、房室交界性早博为多;其次为心脏缺血性改变和高血压。结论:移植相关心血管并发症是影响造血干细胞移植效果的重要因素,应在移植全过程中予以监护和处理。

淋巴瘤虚拟仿真诊疗教学体系建设方案的探索

淋巴瘤是目前发病增长率最快的肿瘤。其临床表现复杂,在诊断方面有较高的难度和专业性。然而,由于患者资源和专业师资分布的不平衡,在很大程度上使得淋巴瘤规范诊疗的临床技能教学和培训受到限制。因此,探索建立可行性更高、更便捷有效的淋巴瘤临床诊疗教学体系显得尤为重要。虚拟仿真技术,是以计算机仿真技术、多媒体技术和网络技术为依托,集合专业理论知识多等方面技术和知识技能的结晶。虚拟仿真技术可以提供可靠、安全和经济的教学、实验、实训项目,达到教学互动、资源共享、不受时空限制、全天候的信息化实验、教学的目的。文章以福建医科大学淋巴瘤虚拟仿真临床诊疗技能教学体系建设为例,探讨虚拟仿真教学平台建设在淋巴瘤教学体系中的应用。

烷化溶血磷脂选择性杀伤慢性粒细胞白血病骨髓细胞的净化效能

目的 研究烷化溶血磷脂 (AL P)对慢性粒细胞白血病 (CML )骨髓细胞的杀伤效能及肿瘤坏死因子α(TNF-α)在其中所起的作用。 方法 以甲基纤维素半固体培养液观察 AL P对 CML和健康骨髓祖细胞的作用 ,并用骨髓细胞长期培养 (L TBMC)动态观察 CFU- C的变化。在上述 L TBMC上清液中测定 TNF-α浓度 ,并比较加或不加 TNF-α抗体 CFU- C的变化。 结果 AL P使 CML祖细胞减少但对正常骨髓祖细胞无影响 ,添加 TNF-α抗体能抑制 AL P对 CML骨髓细胞的杀伤作用 ,L TBMC培养 4周后 AL P处理的 CML骨髓祖细胞恢复正常。 结论 AL P选择性杀伤 CML白血病祖细胞 ,此种作用与 TNF-α部分相关 ,AL P处理不影响正常骨髓早期祖细胞自我复制功能 。

MDT联合TBL+CBL模式在血液内科亚专科建设及临床教学应用中的探索与思考

目的通过研究与分析MDT联合TBL+CBL模式在血液内科临床教学应用的可行性与实际成效,为指导血液内科亚专科建设奠定基础,以期为国内三甲医院临床教学实践与临床科室亚专科建设提供参考与借鉴。方法回顾性研究2018年1月-2019年10月福建医科大学附属协和医院血液内科MDT联合TBL+CBL模式下开展的临床教研案例,讨论分析MDT联合TBL+CBL新模式在临床诊疗与教学中的优势,同时辅以检索和查阅国内外大量文献资料,探讨与论证MDT联合TBL+CBL模式在血液内科临床教学实践与亚专科建设的应用现状与前景。结果MDT联合TBL+CBL模式有助于提升研究生、进修生、住院医师以及实习生等在内的不同层次医学人才的临床知识储备,并能产生良好的信度与教学效果,切实达到多学科诊疗互动下的团队协作新模式,提升了多学科联动下的全院临床诊疗水平,有利于亚专科建设的推进。结论MDT联合TBL+CBL模式在血液内科临床教学应用中具有广阔的前景,有利于提升教学医院各临床科室协作诊疗水平,同时了促进血液内科亚专科建设与诊疗规范,进而产生良好的临床品牌效应。

新时代背景下应用型医学人才培养之刍议

自党的十九大报告提出“新时代”这一新的历史发展方位,我国各领域与国际接轨,并取得了丰硕的成果,正一步步迈入新台阶,向世界发出中国的声音。医学本是建立在临床实践基础上的科学,培养具有过硬的临床技术、良好职业精神的应用型医学人才,是新时代医学教育发展改革中的重要一环,亦是我国高等医学教育模式转变的新契机。本文将从应用型医学人才培养模式与定位、医教研改革与实践平台、人文教育体系与考评制度等多角度展开论述,同时以新时代背景下高等医学教育现状与社会发展需求为着眼点,对于应用型人才培养的相关议题予以阐述和讨论,以期为新时代我国高等医学教育改革与建设、人才培养等方面提供新的视角。

新时代背景下淋巴瘤患者的全程管理实践

上世纪八十年代,美国提出“对患者从患病至康复全过程的关注与管理”为核心的全程管理模式,让恶性肿瘤患者生存生活质量得到一定程度的保证,但因恶性肿瘤是难以治愈的致命性疾病,尽管近年来随着生命科学技术与医学领域的不断进步,其长期生存、远期预后仍不容乐观。其中,淋巴瘤作为血液系统最常见、近年来发病率增加最快的恶性肿瘤之一,可发生在任何年龄段,且发病呈年轻化趋势。为此,本文将从新时代背景下立足国情,对于我国淋巴瘤患者全程管理的探索与实践展开多个维度的分析与探讨,以期为淋巴瘤患者的临床诊疗与健康管理难题提供切实可行的建议,并为医疗机构针对恶性肿瘤患者的全程管理提供借鉴与参考。

血液科学术型硕士研究生临床思维培养的探索与思考

现阶段,我国的硕士研究生培养类别已划分为学术型研究生和专业型研究生两类。血液病学作为医学专业中一门专科性强、急危重症多的学科,对临床实践要求很高,而血液科学术型硕士研究生的培养普遍存在轻临床实践、重实验技术等问题,不能很好地适应血液病学专业的临床需求,临床思维能力薄弱是较为突出的问题。因此,针对学术型硕士研究生临床思维培养这一重要内容,文章将从完善学科建设与目标规划、夯实理论基础与文献研读、强化临床技能与操作训练、重视MDT模式与临床带教等方面进行探讨,总结提升临床思维能力的策略,促进科研能力与临床思维协同发展,为学术型研究生临床思维培养提供理论基础。

长期口服甲氨蝶呤导致口腔黏膜弥漫大B细胞淋巴瘤一例

回顾性总结福建医科大学附属协和医院血液科收治的1例因类风湿关节炎(RA)长期服用甲氨蝶呤(MTX)导致原发口腔黏膜的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的临床病史资料,分析和探讨RA患者服用MTX后诱发特殊部位恶性淋巴瘤的临床特点、诊治及预后情况,旨在提高临床医师与病理科医师对少见其他医源性免疫缺陷相关淋巴增殖性疾病(MTX治疗相关DLBCL)的认识,为MTX治疗相关DLBCL的临床诊疗提供新的借鉴和参考。

中西医结合治疗变应性鼻炎58例临床疗效观察

目的探讨中西医结合疗法在变应性鼻炎患者中的应用效果。方法 58例患者随机分成治疗组、对照组,每组29例,对照组采用常规的西药治疗,治疗组则在对照组的基础上,加用中药进行辅助治疗,观察治疗前后总体疗效及IL-13的含量变化。结果①治疗组和对照组总有效率分别为93.1%和86.2%。②在IL-13的水平方面,治疗后治疗组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论中西医结合治疗过敏性鼻炎对于提高临床治疗效果具有重要意义。

让微信成为中职班主任管理班级的助手

信息化时代的到来,使得"90后"、"00后"的学生成为信息化时代的"原住民",微信等新兴媒体已经成为他们获得信息,相互沟通交流的重要媒介。中职学校班主任由于其特殊的学情以及学校的任务要求,他们的工作内容更加繁杂,压力更大。借助微信等新兴媒体的作用,趋利避害,班主任也可以使其成为班级管理的良好助手。