DPF2干扰慢病毒感染人胚胎干细胞建立稳定细胞系

目的对DPF2干扰慢病毒感染H9细胞,获得稳定的人胚胎干细胞克隆细胞系的方法学探讨。方法将各型带有GFP荧光标签的DPF2-RNAi慢病毒导入H9细胞中,嘌呤霉素筛选前后,相差和荧光显微镜下观察细胞形态和细胞感染效率;Western blot鉴定感染后的各组H9细胞系内DPF2蛋白表达水平。结果成功获得慢病毒感染后的H9稳定细胞系,成功筛选出#25540 DPF2-RNAi慢病毒,其沉默或敲低H9细胞的效率更高,稳定性更好。结论应用携带DPF2-RNAi的慢病毒感染人胚胎干细胞,使目标基因沉默,探索建立稳定细胞系的方法,为进一步研究提供细胞模型。

三种精液处理法对体外受精-胚胎移植后胚胎结局的影响对比

目的:比较用密度梯度离心法、上游法、先密度梯度离心后上游法处理精液对体外受精-胚胎移植后胚胎结局的影响。方法:回顾性地分析在皖南医学院弋矶山医院生殖中心实施体外受精-胚胎移植的172例不孕症患者的临床资料。在这些患者中,采用密度梯度离心法处理男方精液的患者有33例(A组),采用上游法处理男方精液的患者有74例(B组),采用先密度梯度离心后上游法处理男方精液的患者有65例(C组)。使用经过处理的精液实施体外受精-胚胎移植后,比较三组患者卵子的正常受精率、正常卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率、囊胚形成率、MⅡ卵受精率、卵子补救率和胚胎滞育率。结果:三组患者卵子的正常受精率、正常卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率、囊胚形成率相比,P>0.05。C组患者的MII卵受精率高于A组患者和B组患者,P<0.05;其卵子补救率、胚胎滞育率均低于A组患者和B组患者,P<0.05。结论:在对不孕症患者实施体外受精-胚胎移植期间,与用密度梯度离心法、上游法处理男方精液相比,用先密度梯度离心后上游法处理男方精液,不但可以明显提高不孕症患者MⅡ卵的受精率,还可以增加其优质胚胎的数量,降低其卵子补救率和胚胎滞育率。