pcDNA3.1-Smac真核表达载体的构建及表达

目的:构建人的smac基因真核表达载体pcDNA3.1-Smac,并在肺腺癌A549细胞中表达。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人睾丸组织中扩增到smac基因,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-Smac。酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至肺腺癌A549细胞中。采用RT-PCR、Westernblot法检测外源基因smac的表达,MTT法检测细胞生长抑制率。结果:PCR扩增片段与预期片段大小相符,插入片段测序结果与GenBank公布的一致,表明人smac基因克隆及真核表达载体pcDNA3.1-Smac构建成功。在mRNA水平和蛋白水平,转染后的细胞中外源基因smac表达均明显增加。转染smac质粒72h后,细胞的生长抑制率较转染空质粒组显著增加。结论:成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1-Smac,并在肺癌A549细胞中进行了表达;验证了转染后对肺癌细胞生长有抑制作用。