五种抗结核新药在小鼠体内的药代动力学/药效学初步研究

目的在BALB/c小鼠结核病模型中,研究普托马尼(pretomanid,PA-824)、德拉马尼(delamanid,Dlm)、氯法齐明(clofazimine,Cfz)、贝达喹啉(bedaquiline,Bdq)、PBTZ-169共5种抗结核药物在不同给药剂量下的药代动力学/药效学(pharmacokinetic/pharmacodynamics,PK/PD)。方法 BALB/c小鼠经气溶胶感染结核分枝杆菌标准株H37Rv,5种药物分为高中低3个剂量组灌胃给药。在给药4周和8周时,解剖小鼠,取脾、肺脏进行菌落单位(colony forming unit,CFU)计数以评价药物疗效,同时在4倍测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的含药培养板上,挑取单菌落并测定MIC值。在各给药组给予最后一个剂量3h后,通过眼眶采血,用液相色谱-质谱法测定血浆药物浓度。结果以各药物引起小鼠肺部CFU计数下降且与对照组差异有统计学意义为标准,得到最低有效剂量分别为PA-824 30mg/kg,Dlm 5mg/kg,Cfz 5mg/kg,Bdq 6.25mg/kg,PBTZ-16920mg/kg。自最低有效剂量起,各药物均使得小鼠肺CFU计数下降,其中Bdq与PA-824高剂量组小鼠肺CFU计数分别下降2.99和2.66log10值。5种药物给药8周时,在最低有效剂量下的血药浓度(C3h)分别为PA-824(7.60±1.28)μg/ml,Dlm(0.20±0.05)μg/ml,Cfz(0.26±0.02)μg/ml,Bdq(0.22±0.07)μg/ml,PBTZ-169(74.56±17.80)ng/ml。各药物高剂量时,Cmax/MIC大于特定数值,即PA-824 100mg/kg时,Cmax/MIC>147;Dlm10mg/kg时,Cmax/MIC>100;Cfz 20mg/kg时,Cmax/MIC>2;Bdq 25mg/kg时,Cmax/MIC>13.6;PBTZ-16920mg/kg时,Cmax/MIC>150,不易产生药物耐受性/表型抗性。结论 5种抗结核药物在有效剂量下,血药浓度随药物剂量增加而上升,CFU计数与给药剂量呈负相关,Cmax/MIC是与疗效呈良好相关性的PK/PD参数,可为这些药物的临床使用提供指导。

不同耐药类型结核分枝杆菌毒力变化的初步研究

目的初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床耐药分离株和实验室诱导耐药株的毒力变化表征。方法选取MTB标准株H37Rv和减毒株H37Ra各1株、4株临床耐药分离株(15833、16030、17080和30744,各1株)和8株实验室诱导耐药株[分别为单耐Pretomanid(PA-824)菌株(P1)、单耐利奈唑胺(Lzd)菌株(L1)、单耐PBTZ-169菌株(169-1、169-2、169-3,各1株),以及同时耐PA-824和Lzd的LPDR菌株(PL1、PL2、PL3,各1株)]。测定临床耐药分离株对一、二线抗结核药物和实验室诱导耐药株对Lzd、PA-824、PBTZ-169的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。绘制各研究菌株的体外生长曲线及测量感染巨噬细胞2d后的胞内菌落形成单位(colony forming units,CFU),并测定感染2d后巨噬细胞释放乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量。动物实验选取BALB/c小鼠168只,6~7周龄,体质量16~18g/只,分为14组,每组12只。将各耐药菌株以尾静脉注射的方式感染BALB/c小鼠,记录小鼠半数生存期,进行生存分析。结果体外实验表明,MTB临床耐药分离株30744生长曲线相比于其他耐药株的生长平台期提前,菌株体外适应性较低,其余各耐药菌株生长曲线趋势基本一致。临床耐药分离株(15833、16030、30744、17080)和对Lzd和PA-824同时耐药的实验室诱导耐药株(PL1、PL2、PL3)感染巨噬细胞2d后的胞内CFU计数[分别为(5.180±0.074)、(5.571±0.029)、(5.550±0.073)、(5.446±0.099)、(5.763±0.197)、(5.907±0.053)、(5.661±0.083)log10CFU/ml]明显低于标准株H37Rv[(6.207±0.028)log10CFU/ml],差异均有统计学意义(t=17.932、12.758、12.034、10.241、4.796、7.042、9.113,P值均<0.05)。另外,菌株15833、16030、30744、1708、P1、L1、PL1、PL2、PL3、169-1、169-2、169-3感染巨噬细胞2d后LDH释放量的吸光度A490值比值(分别为0.252±0.039、0.412±0.078、0.247±0.022、0.358±0.054、0.329±0.015、0.483±0.017、0.328±0.046、0.455±0.075、0.283±0.041、0.258±0.044、0.374±0.080、0.311±0.097)均明显低于标准株H37Rv(0.958±0.025),差异均有统计学意义(t=27.269、16.788、38.244、24.238、44.005、32.698、27.713、15.171、31.798、31.472、16.515、15.570,P值均<0.01)。体内毒力实验显示:(1)所有菌株感染小鼠后,半数生存期(≥15d)均明显长于H37Rv标准株(12d)。(2)小鼠生存曲线显示:准广泛耐药菌株感染小鼠的存活时间长于耐多药菌株,即30744>17080>16030>15833;双重耐药菌株LPDR组小鼠存活时间>PBTZ-169耐药菌株组=单耐Lzd组>单耐PA-824耐药菌株组。结论 MTB耐药株的毒力均较野生型标准株下降,毒力的大小与该菌株耐药的数量可能呈负相关。

探讨“互联网+”与中国经济的未来发展形态

"互联网+"实现了中国经济机构的深度优化,同时也使市场业态发生了巨大变化,在互联网经济推动下,中国经济将走向产业服务化的新格局。"互联网+"理念的提出对于中国经济的影响不言而喻。本文阐述了"互联网+"与中国经济转型升级的关系,分别从制造业、服务业、农业等方面入手,详细论述"互联网+"对产业形态变化的影响,进一步探讨"互联网+"背景下中国未来经济发展的新形态。

共享经济的发展要素与商业模式研究

随着网络技术、公共配套设施和服务理念的不断完善,近年来,我国共享经济获得了长足发展,成为一种崭新的商业运作模式,渗透于交通、餐饮、家政、金融等各个领域,改变了公众的生产生活方式,同时也成为促进社会经济发展的有效增长点。文章将结合共享经济的发展要素及其商业运作模式进行分析,通过相关要素的深入探究和运作模式的阐述,为共享经济的发展提出更为可行的完善对策。

不同耐药类型结核分枝杆菌毒力变化的初步研究

目的初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)临床耐药分离株和实验室诱导耐药株的毒力变化表征。方法选取MTB标准株H37RV和减毒株H37Ra各1株、4株临床耐药分离株(15833、16030、17080和30744,各1株)和8株实验室诱导耐药株[分别为单耐Pretomanid(PA-824)菌株(P1)、单耐利奈唑胺(Lzd)菌株(L1)、单耐PBTZ-169菌株(169-1、169-2、169-3,各1株),以及同时耐PA-824和Lzd的LPDR菌株(PLK PL2、PL3,各1株)]。测定临床耐药分离株对一、二线抗结核药物和实验室诱导耐药株对Lzd、PA-824、PBTZ-169的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。绘制各研究菌株的体外生长曲线及测量感染巨噬细胞2d后的胞内菌落形成单位(colony forming units,CFU),并测定感染2 d后巨嗤细胞释放乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量。动物实验选取BALB/c小鼠168只,6〜7周龄,体质量16〜18 g/只,分为14组,每组12只。将各耐药菌株以尾静脉注射的方式感染BALB/c小鼠,记录小鼠半数生存期,进行生存分析。结果体外实验表明,MTB临床耐药分离株30744生长曲线相比于其他耐药株的生长平台期提前,菌株体外适应性较低,其余各耐药菌株生长曲线趋势基本一致。临床耐药分离株(15833、16030、30744、17080)和对Lzd和PA-824同时耐药的实验室诱导耐药株(PL1、PL2、PL3)感染巨噬细胞2d后的胞内CFU计数[分别为(5.180±0.074)、(5.571±0.029)、(5.550±0.073)、(5.446±0.099)、(5.763土0.197)、(5.907±0.053)、(5.661±0.083)log_(10)CFU/ml]明显低于标准株H37Rv[(6.207±0.028)log_(10)CFU/ml],差异均有统计学意义(t=17.932、12.758、12.034、10.241、4.796、7.042、9.113,P值均<0.05)。另外,菌株15833、16030、30744、1708、PI、L1、PL1、PL2、PL3、169-1、169-2、169-3感染巨噬细胞2 d后LDH释放量的吸光度A_(190)值比值(分别为0.252±0.039、0.412±0.078、0.247±0.022、0.358±0.054、0.329±0.015、0.483±0.017、0.328±0.046、0.455±0.075、0.283±0.041、0.258±0.044、0.374±0.080、0.311±0.097)均明显低于标准株H37Rv(0.958±0.025),差异均有统计学意义(r=27.269、16.788、38.244、24.238、44.005、32.698、27.713、15.171、31.798、31.472、16.515、15.570,Z5值均<0.01)。体内毒力实验显示:(1)所有菌株感染小鼠后,半数生存期(215 d)均明显氏于H37Rv标准株(12 d)。(2)小鼠生存曲线显示:准广泛耐药菌株感染小鼠的存活时间长于耐多药菌株,即30744>17080>1603015833;双重耐药菌株LPDR组小鼠存活时间>?8丁1169耐药菌株组=单耐Lzd组>单耐PA-824耐药菌株组。结论MTB耐药株的毒力均较野生型标准株下降,毒力的大小与该菌株耐药的数量可能呈负相关。

抗特发性肺纤维化药物吡非尼酮和舒非尼酮在小鼠结核病模型肺损伤中的保护作用研究

目的在小鼠结核病模型中评价抗特发性肺纤维化上市药物吡非尼酮(Pirfenidone,PFD)和临床药物舒非尼酮(SC1011)对肺损伤的保护作用。方法建立C57BL/6小鼠结核病模型。1×10^(7)CFU/ml H37Rv菌悬液通过气溶胶感染75只C57BL/6小鼠,随机数字表法分为未处理组(n=9)、异烟肼H+利福平R+吡嗪酰胺Z(HRZ)治疗组(n=22)、PFD+HRZ治疗组(n=22)和SC1011+HRZ治疗组(n=22)。感染6周后开始给药治疗,分别于给药4、8周取各治疗组7只小鼠进行称重、处死、解剖、观察肺脏和脾脏病变;HE染色、Masson染色,评估肺损伤和肺纤维化程度;ELISA法评估治疗4周各治疗组小鼠血清中IFN-γ/TNF-α含量。碱水解法测定肺组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;同时通过CFU计数,评估各治疗组小鼠肺脾内的载菌量及停药12周后脾、肺组织的复发情况。结果8周PFD+HRZ治疗组、SC1011+HRZ治疗组、HRZ治疗组肺组织HYP含量分别为(630±58)、(635±17)、(840±70)μg/mg(P<0.05);8周肺组织Masson染色蓝染区域面积即阳性面积比例分别为16.65%±1.82%、10.01%±2.16%、21.36%±3.21%(F=27.11,P<0.001);8周HE染色肺损伤评分分别为(5.00±0.50)、(5.00±0.47)、(6.89±0.99)分(F=19.81,P<0.001)。4周ELISA实验结果显示SC1011+HRZ治疗组血清中TNF-α、IFN-γ水平均低于HRZ治疗组(均P<0.05)。PFD+HRZ、SC1011+HRZ治疗组肺损伤程度以及肺纤维化程度均低于HRZ治疗组(均P<0.001)。PFD+HRZ、SC1011+HRZ、HRZ三个治疗组治疗4周小鼠肺组织中活菌数量均低于未处理组[(1.82±0.10)、(1.91±0.05)、(1.79±0.17)比(5.27±0.07)lg(CFU+1)/ml,均P<0.05],并且各治疗组均在给药8周达到小鼠脾脏无菌化。停药12周后,SC1011+HRZ治疗组的肺部感染复发情况低于HRZ治疗组(3/7比5/7,P>0.05);SC1011+HRZ治疗组的脾脏感染复发情况低于HRZ治疗组(1/7比5/7,P>0.05)。PFD+HRZ治疗组的肺部感染的复发情况高于HRZ治疗组(6/7比5/7,P>0.05)。结论在C57BL/6小鼠结核病模型中,PFD/SC1011与HRZ联用可以减轻肺损伤和降低肺结核继发性纤维化。SC1011与HRZ联用时对MTB的近期治疗效果不显著,但在远期治疗上可能降低其复发率,尤其在降低小鼠脾脏的复发率上作用明显。

中药治疗结核病临床评价的Meta分析

目的 采用Meta分析综合评价基于随机对照临床试验中药治疗结核病临床疗效,研究中药治疗与结核病治疗结局的相关性。方法 在中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(Wanfang Data)、PubMed、EMBASE、The Cochrane Library数据库中,采用主题词检索的方式检索有关中药治疗结核病的随机对照临床试验(randomized controlled clinical trials, RCTs)检索时间为建库截至2022年1月30日。采用改良Jadad评分对纳入文献的质量进行评价,以比值比(odds ratio, OR)及95%可信区间(confidential interval, CI)比较试验组和对照组治疗效果,采用漏斗图和Begg检验评价发表偏倚。应用Revman5.4和Stata12.0软件统计分析。结果 对10项RCTs文献进行定性分析,其中, 4篇RCT报道芩部丹治疗,样本量共517例,试验组261例,对照组256例。4篇RCT报道芪甲利肺治疗,样本量共473例,试验组239例,对照组234例。2篇RCT报道益肺通络辅助治疗,样本量共有325例,试验组174例,对照组151例。对8项RCTs进行定量分析,Meta分析结果显示芩部丹治疗明显提高痰菌转阴率[OR=2.21, 95%CI(1.47~3.33),P=0.000 1],促进病灶吸收[OR=1.61, 95%CI(1.05~2.46),P=0.03],未改善空洞闭合[OR=2.22,95%CI(0.78~6.29),P=0.13]。芪甲利肺治疗显著提高痰菌转阴率[OR=2.24, 95%CI(1.13~4.40),(P=0.02)],促进病灶吸收[OR=2.15, 95%CI(1.44~3.20), P=0.000 2]和空洞闭合[OR=1.99, 95%CI(1.30~3.07), P=0.002]。漏斗图对称和Begg检验(P=0.216)提示不存在发表偏倚。结论 中药辅助治疗可能提高抗结核治疗的效果,但安全性指标需进一步评价。