微阵列芯片分析miR-125b-5p在胃癌中的表达及临床意义

目的:运用生物信息学技术分析胃癌中microRNA表达特征。方法:使用R语言软件包分析GEO芯片数据集的两个子集中的miRNA表达量的差异;采用qRT-PCR技术检测本院60例胃癌患者癌组织及20例胃癌手术患者癌旁组织中miR-125b-5p的表达量,统计分析其表达特征与分化程度、TNM分期、性别、年龄、家族史及肿瘤直径之间的关系。结果:miR-125b-5p在GSE93415和GSE99415中的表达均上调,且其在胃癌组织与癌旁胃组织表达量差异具有统计学意义(P<0.05)。使用qRT-PCR验证了miR-125b-5p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织的趋势,miR-125b-5p表达量与TNM分期和浸润程度有关(P<0.05),与年龄、性别、家族史、肿瘤直径和分化程度均无关(P>0.05);高表达miR-125b-5p的胃癌患者生存期明显缩短。结论:胃癌组织miR-125b-5p高表达,且与胃癌TNM分期、浸润程度及总生存率有关。

rL-RVG通过α7烟碱型乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制

目的探讨表达狂犬病毒疫苗糖蛋白的重组新城疫病毒(rL-RVG)通过乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞凋亡的可能机制。方法将对数增殖期的胃癌细胞系SGC随机分成rL-RVG、新城疫病毒(NDV)组、PBS组,并同时分别设α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)抑制剂(MLA)及激动剂(ACB)预处理组。病毒感染24 h后,CCK8法测定病毒对SGC增殖影响;蛋白印迹检测α7-nAChR、RVG、NDV;凋亡蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2;P-ERK、ERK的表达。免疫荧光法测定P-ERK表达。结果随着rL-RVG、NDV病毒液浓度增加,胃癌细胞活力下降,rL-RVG在10^(-2)稀释倍数时抗增殖作用显著(P<0.05);病毒组凋亡相关蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2相对表达量较PBS组明显升高,且rL-RVG组较NDV组及PBS组升高明显,乙酰胆碱受体抑制剂预处理后rL-RVG组、NDV组及PBS组凋亡蛋白水平明显增高,胆碱受体激动剂预处理组凋亡蛋白表达水平明显下降(P<0.05);P-ERK在病毒组表达下降,且rL-RVG组较NDV组更低,乙酰胆碱受体抑制剂、激动剂预处理后分别下降、上升(P<0.05)。结论rL-RVG通过α7-nAChR诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制之一是抑制ERK通路。

rL-RVG通过拮抗α7烟碱型乙酰胆碱受体影响胃癌细胞凋亡及增殖

目的:探讨表达狂犬病毒糖蛋白(RVG)的重组La Sota株新城疫病毒(recombinant La Sota strain NDV expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)是否通过α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7-nAChR)影响胃癌细胞HGC的增殖与凋亡。方法:将rL-RVG、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)和PBS分别感染胃癌HGC细胞24 h后,采用蛋白质印迹法检测RVG、NDV、pro-caspase 3蛋白和α7-nAChR在HGC细胞中的表达,免疫荧光检测α7-nAChR在HGC细胞中的表达,MTT检测HGC细胞的增殖情况。将HGC细胞随机分为rL-RVG组、rL-RVG+α7-nAChR抑制剂组、rL-RVG+α7-nAChR激动剂组,NDV组、NDV+α7-nAChR抑制剂组、NDV+α7-nAChR激动剂组,PBS组、PBS+α7-nAChR抑制剂组、PBS+α7-nAChR激动剂组;倒置显微镜下观察各组细胞形态,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白pro-caspase 3、bax、bcl-2表达水平。结果:蛋白质印迹结果显示,病毒感染HGC细胞24 h后,NDV、pro-caspase 3蛋白和α7-nAChR在rL-RVG组、NDV组的表达均显著高于PBS组(P均<0.01),RVG蛋白在rL-RVG组表达显著高于NDV组和PBS组(P均<0.01);免疫荧光显示α7-nAChR在rLRVG组中明显高于NDV组和PBS组。MTT结果显示两种病毒浓度大于10-5mmol/L对细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05)。倒置显微镜下可见NDV+α7-nAChR抑制剂组、PBS+α7-nAChR抑制剂组HGC细胞分别较NDV组、PBS组皱缩、凋亡更明显,但rL-RVG组与其α7-nAChR抑制剂组相比细胞皱缩、凋亡差异不明显;rL-RVG+α7-nAChR激动剂组、NDV+α7-nAChR激动剂组、PBS+α7-nAChR激动剂组HGC细胞皱缩、凋亡分别较rL-RVG组、NDV组、PBS组明显减弱。蛋白质印迹显示bcl-2、bax和pro-caspase 3蛋白在rL-RVG+α7-nAChR抑制剂组的相对表达量与rL-RVG组无显著性差异(P均>0.05),但在NDV+α7-nAChR抑制剂组、PBS+α7-nAChR抑制剂组的相对表达量分别较NDV组、PBS组显著上调(P均<0.01);rL-RVG+α7-nAChR激动剂组、NDV+α7-nAChR激动剂组、PBS+α7-nAChR激动剂组的bax、pro-caspase 3蛋白相对表达量分别较rL-RVG组、NDV组和PBS组明显下调(P均<0.01),bcl-2蛋白相对表达量则明显上调(P均<0.01)。结论:rL-RVG感染HGC后稳定表达,可能通过拮抗α7-nAChR途径促进胃癌细胞的凋亡和抑制其增殖。

环状RNA hsa_circ_0008234对肺腺癌细胞增殖和迁移的作用

目的环状RNA(circRNA)对肺腺癌的作用机制有待进一步研究。文中旨在探讨hsa_circ_0008234对肺腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法选取2018年11月至2019年12月江苏大学附属人民医院胸外科就诊的75例肺腺癌患者的肺腺癌组织及癌旁组织标本。其中5例组织标本用于高通量测序,另外70例组织标本用于进一步明确hsa_circ_0008234在肺腺癌组织中的表达情况。通过高通量测序技术筛选出在肺腺癌组织中表达最具差异性的低表达环状RNA hsa_circ_0008234。利用qRT-PCR检测circ_0008234在肺腺癌组织、血浆及细胞中的表达情况。PC9板设置过表达组(转染过表达circ_0008234的质粒)及对照组(转染阴性对照的质粒),A549板设置小干扰组(转染敲减circ_0008234的小干扰RNA)及阴性对照组(转染阴性对照的小干扰RNA)。采用CCK-8及平板克隆形成实验检测circ_0008234对肺腺癌细胞增殖的作用;采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测circ_0008234对肺腺癌细胞迁移的影响;采用蛋白质印迹法检测circ_0008234对BTG3蛋白的影响。结果hsa_circ_0008234在肺腺癌组织中的表达量明显低于癌旁组织(P<0.05)。hsa_circ_0008234在4株肺腺癌细胞PC9、A549、H1299、H1975的表达水平明显低于正常支气管黏膜上皮细胞BEAS-2B(P<0.01)。过表达组circ_0008234的表达水平(119.67±2.03)明显高于对照组(1.00±0.03),A549细胞的小干扰组circ_0008234的表达水平(0.38±0.18)明显低于阴性对照组(1.00±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。过表达组的迁移率[(20.90±3.42)%]明显低于对照组[(41.98±2.21)%];小干扰组的迁移率[(41.92±3.27)%]明显高于阴性对照组[(31.98±4.06)%],差异具有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验表明,肺腺癌细胞PC9中过表达组的迁移细胞数(31.33±2.61)明显低于阴性对照组(90.67±2.06);A549中小干扰组的迁移细胞数(121.50±2.97)明显高于阴性对照组(78.00±3.08),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论circ RNA hsa_circ_0008234在肺腺癌组织、血浆及细胞中呈低表达;过表达circ_0008234后可抑制肺腺癌的增殖和迁移。

三维重建技术联合3D腹腔镜在肝脏手术中的应用

目的探讨三维重建技术联合3D腹腔镜在肝脏手术中的应用价值。方法选取2020年6月~2021年12月我院肝胆胰中心符合条件的病人37例,所有病人均于术前完善三维重建以明确肝脏的血管走行情况及与病变的毗邻关系,术中使用3D腹腔镜技术进行操作,观察手术方式、手术时间、术中出血量、术后住院时间、术后并发症情况等。结果37例病人均于腔镜下完成手术,无中转开腹,手术时间60~420分钟,平均(226±101)分钟;术中出血量50~1000 ml,平均(228±195)ml;术后肛门排气时间1~3天,平均(2.2±0.6)天;引流管拔除时间3~20天,平均(7.5±3.1)天;37例病人中,8例转氨酶及胆红素在术后第3天恢复正常值,术后第7天时所有未出院的病人转氨酶均位于100 U/L以内,胆红素均位于34μmol/L内;术后住院时间4~23天,平均(9.78±4.1)天;术后1例胆漏,8例胸腔积液,经保守治疗后治愈出院。结论三维重建技术联合3D腹腔镜在肝脏手术中安全可行,对控制术中出血、缩短手术时间、降低并发症有一定的价值。

Hsa＿circ＿0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC-823、SGC-7901各分为两组,设si-circ_0001947组(转染si-RNA)和si-NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK-8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果:高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si-RNA能够明显抑制BGC-823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC-823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si-circ_0001947组BGC-823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si-NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC-823,SGC-7901细胞中Cleaved-caspase-3及Bax表达明显上调,Bcl-2表达明显下调(P均<0.05)。结论:circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。

rL-hIFN-λ1对THP-1源巨噬细胞极化作用的影响

目的:探讨表达IFN-λ1的重组新城疫病毒rL-hIFN-λ1对巨噬细胞极化的影响。方法:分别用佛波酯、IFN-γ、脂多糖、IL-4和rL-hIFN-λ1刺激人外周血THP-1单核细胞系,构建THP-1-M0、THP-1-M1、THP-1-M2、THP-1-rL-hIFN-λ1型巨噬细胞模型。显微镜下观察M0、M1、M2型巨噬细胞形态特点;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组巨噬细胞M1/M2相关基因表达;免疫荧光检测细胞表面分子CD86、CD163; ELISA检测分泌因子IL-2、IL-13、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;并采用免疫组织化学法检测不同临床分期肺癌组织中巨噬细胞浸润表型。结果:诱导得到的M0、M1、M2型巨噬细胞形态差异显著。rL-hIFN-λ1诱导的巨噬细胞中,M1型巨噬细胞标志物表达明显升高,M2型巨噬细胞标志物表达显著降低,同时其可促进M1型巨噬细胞因子释放,抑制M2型巨噬细胞因子释放。随着肺癌临床分期进展,M1型巨噬细胞浸润逐渐减少。结论:rL-hIFN-λ1可诱导巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化。