蒙古马骨髓间充质干细胞的分离培养及多向分化潜能的研究

旨在探索一个高效分离和扩增蒙古马骨髓间充质干细胞的方法,并通过形态学和多向分化能力进行鉴定。抽取蒙古马骨髓标本,利用密度梯度离心和差异贴壁法分离MSCs,体外扩增后传代,进行相差显微镜形态学观察。在地塞米松、IBMX、胰岛素及罗格列酮的作用下向脂肪细胞诱导分化,以及在地塞米松、VitC、β-磷酸甘油等作用下向成骨细胞诱导分化。结果显示原代和传代细胞呈梭形成纤维细胞样外观,生长增殖能力良好。经定向诱导分化后,细胞分别呈现脂肪细胞、成骨细胞的表型特征。证明所纯化的细胞为尚未分化的基质细胞,而不是组织的成体细胞,它具有多向分化潜能。

内蒙古乌审马染色体核型研究

采用外周血淋巴细胞培养方法和常规染色体制备技术,对内蒙古乌审马染色体核型进行了分析研究。结 果表明:乌审马染色体核型2n=64,雌性核型为64,XX;雄性核型为64,XY。32对染色体中,31对常染色体,1对性 染色体;常染色体中,13对为亚中和中着丝粒染色体,18对为端着丝粒染色体;X染色体为较大的亚中部着丝点染色 体,Y染色体为最小的端着丝点染色体。通过对乌审马的染色体核型分析,为其分子原位杂交及基因定位奠定基础。

蒙古马生长激素基因的克隆与序列分析

参考牛(M57764)、羊(AF002110)、猪(M17704)、人(J03071)和鼠(X12630)等哺乳动物GH基因序列,设计1 对特异引物,用PCR方法首次从蒙古马基因组中扩增出一条长约2 kb的DNA片段。PCR产物经pGEM_Teasy载体转化感受态DH5 α株大肠杆菌,获得重组克隆子。DNA测序表明:蒙古马生长激素基因DNA序列长1 923 bp,含完整的5个外显子和4个内含子,与猪、狗、牛、羊的GH的cDNA序列同源性分别为94．47％、92．63％、90．06％和 90．37％。其cDNA所编码氨基酸与猪、狗、牛、羊同源性分别为97．21％、96．74％、88．84％和88．37％,表明该基因在进化过程中是保守的。

三河马生长激素基因的克隆与序列分析

为进一步探明三河马遗传分化,参考牛(M57764)、羊(AF002110)、猪(M17704)、人(J03071)和鼠(X12630)等哺乳动物GH基因序列,设计一对特异引物,用PCR方法从三河马基因组中扩增出一条长约2kb的DNA片段。PCR产物经pGEM-Teasy载体转化感受态DH5α株大肠杆菌,获得重组克隆子。DNA测序表明:三河马生长激素基因DNA序列长1923bp,含完整的5个外显子和4个内含子,与猪、狗、牛、羊的GH的cDNA序列同源性分别为94.47%,92.63%,90.06%和90.37%。其cDNA所编码氨基酸与猪、狗、牛、羊同源性分别为97.21%,96.74%,88.84%和88.37%,表明该基因在进化过程中是保守的。

马生长激素(GH)基因的PCR-SSCP研究

选取4个蒙古马地方品种、1个国内培育品种和1个国外引入品种共281匹马,采用PCR-SSCP技术,检测了GH基因5′侧翼区、第1内含子、第2外显子和第5外显子4个位点的遗传多态性。结果显示:仅第5外显子出现多态性,表现出AA、BB和AB 3种基因型,其余位点未检测到多态。群体遗传学分析结果表明:除纯血马外,其余品种都是等位基因A为优势基因;Hardy-Weinberg平衡检验显示,乌审马、乌珠穆沁马、巴尔虎马处于平衡状态,锡尼河马、三河马、纯血马处于非平衡状态;各品种马的多态信息含量均为中度多态(0.25<PIC<0.5)。本研究为今后马的分子育种奠定一定基础。

马生长激素基因的PCR-RFLP分析

选取4个蒙古马地方品种、1个国内培育品种和1个国外引入品种共281匹马为研究对象,对马GH基因全序列进行了PCR-RFLP分析。扩增产物经BstxⅠ、H indⅢ、Sm aⅠ和StuⅠ4种内切酶酶切,结果显示:实验所检测群体中,没有发现BstⅪ、H indⅢ酶的酶切多态;Sm aⅠ和StuⅠ酶切后,均表现出多态性,并各自产生3种基因型:AA、BB、AB和CC、DD、CD。本研究为今后马的分子育种奠定必要基础。

燕麦抗盐愈伤组织变异系的选择

以普通燕麦成熟胚为起始材料 ,置于附加一定激素配比的MS培养基上诱导产生愈伤组织 (经继代培养获大量愈伤组织块 ) ,再转至含有不同盐浓度的筛选培养基上继续培养 ,结果产生抗盐愈伤组织 .这些抗盐愈伤组织再经逐级增大的含盐培养基培养后 ,愈伤组织的存活率逐级提高 ,获得具有一定稳定性的抗盐愈伤组织变异系 .

马生长激素基因的克隆与5′侧翼区序列分析

利用PCR技术首次扩增、克隆了6个具有不同生长速度马的生长激素基因。6个品种分别为:1个体格高大健壮的引入品种英纯血马,1个中等体高的中国驰名培育品种三河马,3个中等体高的蒙古马(乌审马、乌珠穆沁马、锡尼河马),1个体格矮小的广西矮马。马GH基因大小1923bp,包括了转录起始位点5′侧翼区序列250bp、1个可能的TATA框,组织特异性转录因子结合位点,全部5个外显子和4个内含子及部分3′侧翼区序列。分析6个品种马GH基因5′侧翼区序列并与乌审马序列相比,均在第210位出现由胞嘧啶C颠换为腺嘌呤A,在249位由胞嘧啶C颠换为鸟嘌呤G。6个品种之间的比较显示,马GH基因5′侧翼区具有极高的保守性,体格和体高具有显著差异的马品种间几乎未有差异。说明不同品种马生长速度和成年体重的差异,并非是其GH基因5′侧翼区变异造成的,马GH基因表达的差异可能受到内含子或3′侧翼区序列的影响。

月季的茎段培养与快繁

为了快速获得健壮、优良的月季品种，以月季茎段为外植体，通过组织培养达到快繁的目的。培养中，设 置了 MS附加不同种类、浓度的植物激素，分析了其对月季腋芽萌发、芽生长、增殖及诱导生根和移栽成活率的影 响。结果表明， BA对萌发芽的生长有促进作用， BA与 NAA混合作用，可提高芽的增殖数。采用 NAA及 1/2MS 无机盐对提高小苗生根率和移栽成活率效果最好。

用重金属离子诱导胡萝卜体细胞胚胎发生

对胡萝卜体细胞胚胎诱导的一种新方法,取7d 龄胡萝卜幼苗的茎尖在不加生长调节物质而含有重金属离子(如Cu2+ 、Co2+ 、Ni2+ 、Zn2+ 、Cd2+ )的MS培养基上培养7～21d,然后移到MS培养基上培养,未见生成愈伤组织就形成体细胞胚。说明这些重金属离子产生的胁迫可刺激胡萝卜的体细胞胚胎发生。

以胚乳为营养的内燕4号愈伤组织诱导新方法

探索以胚乳为营养，利用燕麦成熟胚的中胚轴诱导愈伤组织的新方法。种子在无菌条件下发芽后，切取中胚轴组织，种子腹沟朝下置于２，４－Ｄ溶液中（６～８ｍｇ／Ｌ）。培养第二天就可看到中胚轴切口处有增殖的愈伤组织。待愈伤组织生长到１０ｄ左右，将其从外植体上切下，并转移到ＭＳ培养基（不含激素）上进行根、茎分化培养。镜检观察到，小植株是通过器官发生途径再生的。

蒙古冰草遗传多样性的RAPD分析(英文)

采用 RAPD技术对蒙古冰草 (Agropyron mongolicum Keng) 6个天然居群和 2个栽培品种 (系 )的 45个个体进行了遗传多样性检测。 1 7个引物共检测到 1 0 1个位点 ,其中多态位点 81个 ,占 80 .2 %。相对于其它小麦族植物 ,显示出了较高的遗传多样性。多样性指数(DC)分析的结果表明 ,遗传多样性在居群内和居群间的分布存在不均衡现象 ,但总体来看 ,居群内的遗传变异高于居群间 ,这是由蒙古冰草异花、风媒传粉的外繁育系统所决定的。在天然居群与栽培品种 (系 )间 ,前者的 DC值为 0 .2 5 0 ,后者的 DC值为 0 .1 81 ,而且前者的平均遗传距离 (0 .2 90 )也高于后者 (0 .2 1 3 ) ,表明天然居群间的遗传分化大于栽培品种 (系 ) ,这与天然居群间环境的异质性密切相关 ,同时也反映了栽培品种 (系 )间较近的亲缘关系。 UPG-MA聚类分析的结果表明 ,8个居群基本上可被分为与其生境特点及生长条件相适应的 3个类群 。

马毛色遗传的分子基础与应用

毛色不仅是马品种和个体识别的重要依据,而且还可以作为某些疾病筛查的有力工具和手段。马的毛色主要由黑色素细胞产生的真黑素和褐黑素两种黑色素的分布及比例所决定,许多基因对黑色素的产生和分布的调控起着重要的作用,各基因相互间共同作用最终形成各种单毛色和复毛色,这些基因主要包括MC1R、ASIP、KIT、TYRP和EDNRB。另外STX17、MATP和PMEL17也在马毛色形成过程具有重要的作用,同时还发现个别毛色基因与黑色素瘤疾病有关。文章对近年来马主要毛色候选基因的作用机理、DNA序列多态性与毛色性状及黑色素瘤疾病的关系等研究进行了详细的阐述,为今后马匹育种工作和疾病防治提供重要理论依据。

蒙古马MSTN基因第三外显子的克隆及其SSCP研究

依据马肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以蒙古马基因组DNA为模板,利用PCR技术,扩增出MSTN基因第三外显子序列。将所得片段与PGEM—Teasy载体连接,转化感受态DH5a大肠杆菌。筛选出阳性克隆,酶切、PCR鉴定后,经DNA测序结果表明,所克隆到的MSTN基因第三外显子与文献报道基本一致,有一处单核苷酸有变异。

蒙古羊骨髓间充质干细胞的分离培养及多向诱导分化

本研究旨在建立蒙古羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)体外分离、纯化、增殖方法,诱导其向脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞分化。穿刺法抽取蒙古羊骨髓组织,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化BMSC,增殖,并测定其生长曲线及细胞倍增时间。对第3代蒙古羊BMSC进行成脂、成骨及成软骨诱导,观察诱导后的细胞形态。采用油红O、茜素红、HE等染色法在组织学水平对BMSC进行成脂、成骨和成软骨分化鉴定。结果显示,蒙古羊BMSC呈现均一梭形成纤维细胞样生长,生长曲线呈S型,生长增殖能力良好。在不同分化诱导之后,细胞呈现脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞的表型特征。表明获得的蒙古羊BMSC具有多向分化潜能,所分离细胞确为骨髓间充质干细胞。

蒙古马基因组拷贝数变异的研究

拷贝数变异(copy number variation,CNV)在人类和动物基因组中普遍存在,是重要的遗传变异资源。本试验利用比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)芯片对2匹蒙古马和1匹纯血马进行全基因组CNV检测,共检测到210个CNVs,长度6 109bp至571.87kb,平均值为37.81kb,中值为14.45kb。合并重叠的CNVs,共检测到70个CNV区域(CNV region,CNVR),大小从6 151bp至573.59kb,平均值和中值分别为38.93和14.45kb,总长度为6.19Mb。经CNV基因注释和功能分析发现,大部分基因与嗅觉受体活性、嗅觉感官知觉、化学刺激的感官知觉、识别和嗅觉传导等功能相关。对5个CNVRs进行qPCR检验,83.33%的qPCR结果与CGH芯片结果一致。通过对蒙古马基因组拷贝数变异的研究,证明CNV在马基因组中普遍存在,为揭示马基因组CNV与重要生物性状的关联性及品种改良奠定了基础。

蒙古马脂肪来源间充质干细胞体外成脂和成骨诱导分化

取蒙古马背臀部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养脂肪组织来源的间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs),经过原代培养和传代培养,分别加入成脂诱导剂和成骨诱导剂培养,采用倒置显微镜观察诱导后的细胞形态变化,并通过油红O染色和茜素红染色法对其脂肪细胞和成骨细胞表型进行鉴定.结果显示:ADSCs呈成纤维细胞样贴壁生长,其经成脂、成骨诱导培养2周后形态、体积发生明显改变.经油红O染色,细胞质内出现橙红色脂滴;茜素红染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节.说明马ADSCs经体外诱导培养后可向脂肪细胞和成骨细胞分化,并具有明显的成脂和成骨表型,表明ADSCs具有多向分化潜能.

转录组揭示禁水环境下双峰驼结肠组织适应机制

旨在了解骆驼属在缺水条件下组织环境适应机制。本研究选取6峰6～9岁的成年阿拉善双峰驼,随机分为2组,第一组为对照组(colon1_3),正常采食饲料与水;第二组为禁水组(colon3),不给骆驼饮水,其他处理(饲草量)与对照组相同,禁水24d。采用Illumina HiSeq 2000测序平台通过对禁水(试验组)与正常饮水(对照组)条件下双峰驼结肠组织进行转录组测序,并对转录组数据进行质控、比对、差异表达、GO和KEGG分析。结果显示,禁水组与对照组比较共获得差异表达基因2 122个,其中上调表达基因813个,下调表达基因1 309个。GO分析结果显示,禁水组下调表达基因最为显著富集的条目有30条,上调表达基因中未得到统计学意义的富集条目。KEGG富集分析显示,禁水组下调表达基因显著富集到剪接体、蛋白外排、内质网蛋白合成过程、RNA转运、核糖体合成、mRNA检测、RNA降解代谢途径;上调表达基因富集到的通路包含局部细胞黏连、溶酶体功能等。上述结果表明,禁水环境下,结肠组织下调表达基因多于上调表达基因,下调表达基因多参与RNA加工和蛋白质合成,这些功能有利于骆驼在缺水环境下,减少RNA的合成,降低结肠组织的代谢速率。

牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定

本试验旨在构建用于牛肌肉生长抑制素(MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。基于已发布的MSTN基因序列,选取第3外显子约600bp作为靶位点,在其上、下游设计2条同源臂,分别为4.4和1.4kb。以pPNTⅢ为骨架载体,在其2个多克隆位点处插入同源臂,构建出置换型打靶载体MSTN-KO-pPNTⅢ。结果显示,经DNA测序及酶切鉴定证实1.4kb同源短臂和4.4kb同源长臂均正确插入基础载体中。结果表明,成功构建出牛MSTN-KO-pPNTⅢ打靶载体。

中国马遗传育种研究进展

从中国马的类型及分布特点、中国马遗传特性研究现状、生物技术在马育种中的应用及中国马遗传育种研究前景4个方面综述马的育种进展,为我国马产业化发展提供依据。