miR‑15a‑5p对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响

目的探讨miR‑15a‑5p对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响。方法收集2020年12月至2022年12月的正常妊娠胎盘组织和子痫前期胎盘组织各20例。采用荧光定量PCR检测胎盘组织和滋养细胞中miR‑15a‑5p的表达,并对其表达水平与患者血压做相关性分析;将HTR8‑S/Vneo细胞分正常组(control)和缺氧组(hypoxia),观察缺氧对miR‑15a‑5p表达的影响。另设mimic‑NC组、mimic‑NC+hypoxia组、miR‑15a‑5p mimic组、miR‑15a‑5p mimic+hypoxia、inhibitor‑NC组、inhibitor‑NC+hypoxia、miR‑15a‑5p inhibitor组、miR‑15a‑5p inhibitor+hypoxia组,观察miR‑15a‑5p对缺氧诱导的滋养细胞自噬相关蛋白LC3B和p62蛋白的影响。用Western blot检测各组中自噬相关蛋白LC3B和p62蛋白的表达水平;TargetScan网站预测miR‑15a‑5p的靶基因,检测其在胎盘组织和滋养细胞中的表达水平。结果与对照组相比,miR‑15a‑5p在子痫前期胎盘组织和缺氧滋养细胞中的表达均增高,且与患者血压呈正相关;缺氧条件下过表达miR‑15a‑5p,LC3BⅡ/Ⅰ表达增高,P62蛋白相对表达量降低;干扰miR‑15a‑5p后,LC3BⅡ/Ⅰ表达量降低,p62蛋白表达量升高;荧光定量PCR及Western blot检测结果发现YAP1在子痫前期胎盘组织和缺氧滋养细胞中的表达水平明显降低。结论miR‑15a‑5p在子痫前期胎盘滋养细胞中的高表达,其可能通过与YAP1结合从而促进PE自噬的发生。

4063例叶酸代谢关键酶基因多态性特点及其与同型半胱氨酸的相关性

目的探讨备孕夫妇叶酸代谢酶基因多态性分布特征及其与同型半胱氨酸(Hcy)的关系,为指导个体化叶酸增补方案提供理论依据。方法随机抽取2020年7月至2022年6月符合生育政策并计划怀孕的夫妇基本资料及外周血,最终4063例纳入研究,采集其外周血测定5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)rs1801133、rs1801131位点和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)rs1801394位点的基因型及血清Hcy水平,进一步展开分析。结果本研究受检人群叶酸代谢酶基因多态性分布符合HW遗传平衡,其中MTHFR rs1801133和rs1801131位点存在连锁不平衡(D’=0.98,r2=0.14)。MTHFR基因rs1801133位点的CC、CT及TT基因型频率分别为42.31%、44.47%和13.22%;MTHFR基因rs1801131位点的AA、AC及CC基因型频率分别为62.15%、33.20%和4.65%;MTRR基因rs1801394的AA、AG及GG基因型频率分别为55.06%、38.59%和6.35%。不同叶酸代谢酶基因型/叶酸代谢障碍风险人群之间Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05);男性在相同叶酸代谢酶基因型/叶酸代谢障碍风险下Hcy水平更高(P<0.001);35岁以下MTHFR rs1801133位点CC基因型、rs1801131位点AC和CC基因型的人群Hcy水平更高(P<0.05)。结论桃源县叶酸代谢酶基因多态性分布具有自身特点,未来需要结合遗传因素和环境因素格外关注备孕期男性及非高龄人群(<35岁)并进行叶酸补充指导和监测,这可能成为进一步降低新生儿出生缺陷的重要途径。

环状RNA BRAF_2在子痫前期胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制

目的 探讨环状RNABRAF_2(circRNABRAF_2)在子痫前期(PE)胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 收集2018年1月-2019年2月宁夏医科大学总医院正常妊娠与PE孕妇的胎盘组织(n=21),采用qRTPCR检测两组胎盘组织中circRNABRAF_2的表达水平,并分析circRNABRAF_2表达水平与血压的相关性。体外培养人源胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo):(1)将细胞分为对照组与缺氧组,采用qRT-PCR检测circRNA BRAF_2的表达;(2)在HTR8-S/Vneo中转染circRNABRAF_2慢病毒空载体和过表达慢病毒,分为对照组、circRNABRAF_2阴性对照组及circRNA BRAF_2过表达组,使用qRT-PCR对circRNA BRAF_2进行过表达验证;(3)在circRNA BRAF_2过表达慢病毒转染成功的基础上,将细胞分为对照组、circRNA BRAF_2阴性对照组、circRNA BRAF_2过表达组、缺氧组、缺氧+circRNABRAF_2阴性对照组与缺氧+circRNABRAF_2过表达组,采用EdU和CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2及Bax的表达。采用qRT-PCR检测circRNABRAF_2在HTR8-S/Vneo细胞质和细胞核中的表达水平,通过生物信息学分析筛选与circRNABRAF_2可能结合的miRNA并检测其在组织和细胞中的表达水平。结果 与正常妊娠组比较,PE组孕妇胎盘组织中circRNA BRAF_2表达水平明显降低(P<0.001),且circRNA BRAF_2表达水平与收缩压、舒张压呈负相关(r=±0.4531,P<0.01;r=±0.4381,P<0.01)。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,缺氧组circRNABR AF_2表达水平明显降低(P<0.01)。circRNA BRAF_2阴性对照组circRNA BRAF_2表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);与circRNA BRAF_2阴性对照组比较,circRNA BRAF_2过表达组circRNA BRAF_2表达水平明显升高(P<0.001)。EdU及CCK-8法检测结果显示,与对照组比较,缺氧组EdU阳性细胞百分比明显下降(P<0.001),滋养细胞增殖能力降低(P<0.001);与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNA BRAF_2过表达组滋养细胞EdU阳性细胞百分比明显升高(P<0.001),滋养细胞增殖能力明显增强(P<0.001)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,缺氧组细胞凋亡率明显增高(P<0.001);与缺氧+circRNABRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNABRAF_2过表达组细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。Westernblotting检测结果显示,与对照组比较,缺氧组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平升高(P<0.01或P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01);与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNA BRAF_2过表达组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平降低(P<0.001或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,circRNA BRAF_2主要在细胞质中表达,生物信息学分析结果显示,circRNA BRAF_2与miR-7855-5p存在结合位点。qRT-PCR检测结果显示,与正常妊娠组比较,miR-7855-5p在PE胎盘组织中高表达(P<0.05);与对照组细胞比较,缺氧组miR-7855-5p明显高表达(P<0.001)。结论 circRNA BRAF_2可促进PE胎盘滋养细胞增殖并抑制其凋亡,作用机制可能与miR-7855-5p有关。

固体氧化物燃料电池阳极的相转化流延制备和电化学性能研究

采用相转化流延一步制备了NiO-Zr0.84Y0.16O2-d（YSZ）阳极支撑层和功能层,前者厚度为～700mm,含有沿厚度方向定向排列的开放直孔,后者厚度为～60mm。采用浆料涂膜法和高温共烧在阳极上制备厚度为15mm的YSZ电解质薄膜,丝网印刷制备YSZ-La0.84Sr0.16MnO3-δ（LSM）（质量比50：50）阴极。所制备的单电池显示出较高的电输出性能。以H2-3%H2O为燃料和环境空气为氧化剂,800℃时电池的峰功率密度达到891mW/cm^2,电池即使在高电流密度测试条件下也未出现明显的浓差极化,这是由于其阳极具有开放直孔结构,气相输运阻力小。

circRNA CPSF6核内转移促进同型半胱氨酸诱导的滋养细胞凋亡

目的探讨环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6)在同型半胱氨酸(Hcy)致滋养细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy处理)与1 mmol/L Hcy处理组。采用免疫荧光细胞化学染色检测滋养细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达,Western blot法检测caspase-3蛋白水平;实时定量PCR检测circRNA CPSF6的mRNA表达水平;同时,运用小干涉RNA(siRNA)技术敲低滋养细胞circRNA CPSF6表达,Western blot法检测细胞caspase-3、caspase-9、B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)表达;实时定量PCR检测circRNA CPSF6在Hcy处理前后滋养细胞胞质/胞核中的表达水平。结果与对照组相比,Hcy处理组caspase-3表达明显增加,circRNA CPSF6 mRNA表达上调;敲低circRNA CPSF6后,caspase-3表达降低,线粒体凋亡途径被抑制;正常培养的滋养细胞中circRNA CPSF6在胞质大量表达,而给予Hcy处理后,circRNA CPSF6主要在胞核表达。结论通过circRNA CPSF6核内转移激活线粒体凋亡途径促进Hcy诱导的滋养细胞凋亡。

miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用研究

目的探讨miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用。方法qRT-PCR检测胎盘组织中miR-488-3p的表达;并与子痫前期患者的临床特征进行相关性分析;同时,体外培养人绒毛膜滋养层细胞,并转染miR-488-3p mimic和inhibitor;Transwell观察miR-488-3p对滋养层细胞侵袭和迁移的影响;生物信息学软件预测miR-488-3p下游作用靶点,并在胎盘组织中验证其表达;最后,qRT-PCR检测滋养层细胞中miR-488-3p对MMP2表达的影响。结果与正常孕妇比较,子痫前期患者胎盘组织中miR-488-3p表达水平明显升高,并与收缩压、舒张压呈正相关,而MMP2表达水平降低;过表达miR-488-3p后抑制滋养层细胞侵袭和迁移能力,MMP2表达水平降低;而抑制miR-488-3p表达则相反。结论miR-488-3p在子痫前期胎盘组织中升高,可能通过沉默MMP2,抑制滋养层细胞的侵袭和迁移参与子痫前期的发病。

蝮蛇抗栓酶与山莨菪碱治疗糖尿病足的疗效观察

目的:观察蝮蛇抗栓酶与山莨菪碱治疗糖尿病足的疗效对比。方法:对69例糖尿病足患者分别用蝮蛇抗栓酶与山莨菪碱治疗,并进行疗效观察。结果:两组药物总有效率比较2=5.75,0.01<P<0.05,两种药物治疗糖尿病足的差别有显著性意义。

小组合作在历史学习中的评价研究

随着中国与世界各国日益频繁的交往和合作,历史学科已成为走向世界,通往未来不可缺少的通行证。而作为历史学科的学习必须要从最直接的人与人之间的交流开始。前一阶段,我们一直在对小班化教学中小组合作学习的模式进行实践研究,已经有了一定的认识。

环状RNA hsaBABAM11在子痫前期胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用

目的探讨环状RNA(circRNA)hsa_BABAM1_1在子痫前期胎盘组织中的表达及对人胎盘滋养细胞株(HTR-8/SVneo)增殖、凋亡的作用。方法收集宁夏医科大学总医院妇产科2020年1―12月收治的正常产妇22例和子痫前期产妇22例的胎盘组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组胎盘中circRNA hsa_BABAM1_1的表达。在缺氧条件下培养HTR-8/SVneo细胞,建立子痫前期细胞模型。采用qRT-PCR法检测常氧和缺氧条件下细胞中circRNA hsa_BABAM1_1的表达。采用RNase R酶消化实验和放线菌素D处理实验验证circRNA hsa_BABAM1_1的稳定性。采用荧光原位杂交(FISH)及核质分离法观察circRNA hsa_BABAM1_1在HTR-8/SVneo细胞中的定位。构建高表达circRNA hsa_BABAM1_1慢病毒和对照空载体慢病毒稳转株,给予细胞以下不同处理:对照、空载体、过表达circRNA hsa_BABAM1_1、缺氧、空载体+缺氧及过表达circRNA hsa_BABAM1_1+缺氧。采用细胞计数试剂(CCK-8)及5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)实验评估细胞增殖能力的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western-blot法测定细胞凋亡相关蛋白的变化,qRT-PCR法检测miR-130b-5p在HTR-8/SVneo细胞和胎盘中的表达。采用Pearson相关分析circRNA hsa_BABAM1_1与miR-130b-5p的相关性。结果子痫前期胎盘和缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞中circRNA hsa_BABAM1_1表达水平低于对照(均P<0.05)。在HTR-8/SVneo细胞中,circRNA hsa_BABAM1_1主要定位和表达于细胞质中。与对照相比,缺氧细胞存活率[(61.17±1.50)%比(100.00±3.10)%,q=12.95,P<0.01]、EdU阳性细胞比例[(25.33±0.88)%比(37.33±0.89)%,q=9.62,P<0.01]下降,凋亡率[(11.01±0.29)%比(4.33±0.31)%,q=23.89,P<0.01]增加,凋亡相关蛋白激活态半胱天冬酶9(cleaved caspase-9)、cleaved caspase-3、cleaved caspase-7和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)表达水平升高,Bcl-2表达水平下降,miR-130b-5p的表达水平升高(均P<0.05)。与缺氧+空载体组相比,缺氧+过表达circRNA hsa_BABAM1_1组缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞存活率[(89.21±2.79)%比(61.23±2.13)%,q=9.71,P<0.01]、EdU阳性细胞比例[(36.67±0.88)%比(24.33±1.86)%,q=9.89,P<0.01]增加,凋亡率[(6.86±0.26)%比(11.74±0.12)%,q=17.67,P<0.01]下降,凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved caspase-7和Bax表达水平下降,Bcl-2表达水平升高,miR-130b-5p的表达水平下降(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,circRNA hsa_BABAM1_1和miR-130b-5p在胎盘组织中的表达呈负相关(r=-0.44,P<0.01)。结论circRNA hsa_BABAM1_1在子痫前期胎盘及缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞中低表达,主要定位和表达于胞质中,并具有高度稳定性。上调circRNA hsa_BABAM1_1的表达可促进缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞增殖、抑制其凋亡,其作用机制可能与调控miR-130b-5p的表达有关。

环状RNA circRBM39在缺氧致胎盘滋养细胞凋亡中的作用及其分子机制

目的探讨环状RNA-RBM39(circRBM39)在缺氧致胎盘滋养细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法以缺口末端标记法检测子痫前期(PE)患者胎盘滋养细胞凋亡情况。体外培养人源胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo),将其分为3组:第1转染组(空白对照)、第2转染组(转染5μL小干扰RNA阴性对照)和第3转染组(转染5μL circRBM39小干扰RNA),浓度均为20μmol·L^(-1),于1%O_(2)缺氧培养箱中培养48 h。通过蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果PE患者与健康妊娠孕妇比较,胎盘组织凋亡明显增加。第1转染组、第2转染组和第3转染组的Caspase-3蛋白表达量分别为0.49±0.10,0.53±0.07,0.19±0.04;Caspase-9蛋白表达量分别为0.58±0.09,0.61±0.07和0.36±0.05;Bcl-2蛋白表达量分别为1.67±0.18,1.79±0.17和2.78±0.25;Bax蛋白表达量分别为3.07±0.20,3.11±0.18和2.30±0.21。第3转染组与第1转染组和第2转染组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论下调circRBM39可抑制缺氧诱导的胎盘滋养细胞凋亡。

环状RNA circ_BRAF_2在子痫前期胎盘滋养细胞自噬中的作用

目的研究子痫前期(PE)患者胎盘组织中环状RNA circ_BRAF_2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响。方法选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例;将HTR-8/SVneo细胞分为对照组(常规培养)、pLV-NC组(转染空载体)、pLV-circ_BRAF_2组(转染circ_BRAF_2)、缺氧组(缺氧处理)、pLV-NC+缺氧组(转染空载并进行缺氧处理)、pLV-circ_BRAF_2+缺氧组(转染circ_BRAF_2并进行缺氧处理)。用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胎盘组织及HTR-8/SVneo细胞中circ_BRAF_2的表达,用PCR及Sanger测序对HTR-8/SVneo细胞中circ_BRAF_2进行鉴定,用核质分离法检测circ_BRAF_2在HTR-8/SVneo细胞胞质和细胞核中的表达,用透射电镜观察细胞自噬体的形成,用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的表达。用qRT-PCR检测miR-15a-5p的表达水平。结果妊娠对照组、PE组、对照组及缺氧组circ_BRAF_2的相对表达水平分别为0.89±0.05,0.32±0.03,0.04±0.05×10^(-1)和0.02±0.03×10^(-1),PE组与妊娠对照组相比,缺氧组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);通过外扩型引物只能在cDNA中扩增出circ_BRAF_2,而采用内扩型引物能同时在cDNA和gDNA中扩增出其线性转录本BRAF;circ_BRAF_2在HTR-8/SVneo细胞胞质中的表达(0.02±0.02×10^(-1))显著高于在胞核中的表达(0.02×10^(-2)±0.03×10^(-3),P<0.01);对照组、pLV-NC组、pLV-circ_BRAF_2组、缺氧组、pLV-NC+缺氧组、pLV-circ_BRAF_2+缺氧组LC3-Ⅱ蛋白相对表达水平分别为0.75±0.25,0.73±0.23,0.75±0.23,1.17±0.30,1.19±0.32和0.42±0.06,P62蛋白相对表达水平分别为0.72±0.07,0.75±0.09,0.72±0.08,0.45±0.11,0.44±0.10和0.62±0.07,缺氧组的上述指标与对照组相比,pLV-circ_BRAF_2+缺氧组的上述指标与pLV-NC+缺氧组相比,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);这6组的单个细胞内自噬体数量变化及miR-15a-5p的相对表达水平变化与LC3-Ⅱ蛋白表达变化水平相同。结论过表达circ_BRAF_2可抑制缺氧诱导的HTR-8/Svneo细胞自噬,其作用可能与竞争性结合miR-15a-5p有关。