Annexin A1在胃癌中的表达及其与胃癌预后的关系

【目的】通过检测Annexin A1蛋白在胃癌原发灶和转移灶中表达,探讨Annexin A1表达的病理临床意义及对预后的影响。【方法】构建组织芯片包含胃癌原发灶及相应的转移灶70对、癌旁组织30例,应用免疫组化方法检测Annexin A1在胃癌组织芯片中的表达,结合病理临床资料及生存资料,分析Annexin A1表达与病理临床参数的相关性。【结果】Annexin A1在癌旁组织中不表达,在胃癌原发灶中的阳性表达率为4/70(5.7%),淋巴结转移灶中的表达率为17/70(24.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移灶ANXA1的表达与TNM高分期相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示淋巴结转移灶ANXA1表达阳性组患者生存时间较阴性组短,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归多因素分析ANXA1表达阳性是胃癌早期死亡的危险因素。【结论】Annexin A1的表达与肿瘤的远处转移、胃癌患者的早期死亡密切相关。

骨髓间充质干细胞移植治疗炎症性肠病小鼠结肠炎的有效性及肿瘤学安全性

背景:骨髓间充质干细胞输注有望成为临床治疗炎症性肠病的新的有效生物治疗手段,但其肿瘤学安全性问题令人担忧,是决定间充质干细胞能否广泛用于炎症性肠病治疗的关键,亟待研究。目的:利用小鼠模型观察骨髓间充质干细胞输注对炎症性肠病结肠炎的疗效,并明确间充质干细胞对炎症性肠病炎症癌变的影响。方法:应用葡聚糖硫酸钠构建Balb/c(H-2d)小鼠的实验性结肠炎模型,经尾静脉输注分离培养的同系基因型骨髓间充质干细胞,对比观察间充质干细胞的疗效并评价结肠炎的组织病理学改善情况;应用葡聚糖硫酸钠联合偶氮氧甲烷构建Balb/c(H-2d)小鼠的结肠炎癌变模型,对比观察间充质干细胞输注后小鼠肠道肿瘤的形成情况。结果与结论:在葡聚糖硫酸钠结肠炎模型,骨髓间充质干细胞组在实验结束时体质量丧失、大便潜血较PBS组均有减轻;间充质干细胞组中结肠组织炎症损伤严重度评分更低,镜下小鼠远端结肠黏膜结构基本完整,有小范围上皮缺损或隐窝缺损,黏膜层和黏膜下层较多炎症细胞浸润,可见毛细血管和小血管增生;体内示踪可见输注的间充质干细胞向结肠炎症病灶处黏膜下层归巢定殖。在葡聚糖硫酸钠/偶氮氧甲烷结肠炎癌变模型,间充质干细胞组小鼠肠道肿瘤数量及肿瘤负荷均明显小于对照组。结果提示输注骨髓间充质干细胞能明显改善炎症性肠病小鼠的结肠炎症病变,并抑制结肠炎向肿瘤的恶性转化,为间充质干细胞治疗炎症性肠病的生物安全性提供了客观的理论依据。

雷帕霉素对血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的观察雷帕霉素(rapamycin)对体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的作用。方法组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,取对数生长期细胞(第6￣10代)用作实验,MTT法检测不同浓度雷帕霉素对平滑肌细胞增殖的效果,并用RT-PCR法检测其对平滑肌细胞增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)mRNA表达情况的影响。结果①MTT法检测显示雷帕霉素呈剂量依赖性抑制体外培养的大鼠平滑肌细胞增殖,各组吸光值(A)分别为:对照组0.902±0.106;0.1ng/mL组0.873±0.079;1ng/mL组0.797±0.046;10ng/mL组0.692±0.061;100ng/mL组0.624±0.075。方差分析差异有显著性,F=28.85,P<0.001;两两比较1ng/mL以上浓度组与对照组间差异均有显著性,不同浓度间差异显著。0.1ng/mL组与对照组相比差异无显著性。②RT-PCR显示雷帕霉素以浓度依赖模式抑制大鼠平滑肌细胞PCNA-mRNA合成。各组校正后光密度值分别为:对照组219.35±7.20;0.1ng/mL组212.39±6.56;1ng/mL组113.15±10.09;10ng/mL组97.17±12.25;100ng/mL组84.38±8.66。方差分析F=195.49,P<0.001。两两比较与MTT检测相同。结论雷帕霉素呈剂量依赖性显著抑制大鼠平滑肌细胞的增殖,1ng/mL时即可明显起效。雷帕霉素有望成为治疗内支架术后再狭窄的理想药物之一。

地塞米松对血管内支架介入术后再狭窄作用的实验研究

目的观察地塞米松对体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的作用,探讨其对血管内支架介入术后远期再狭窄的防治价值。方法组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉SMC,取第6～10代作实验用,MTF法检测地塞米松不同浓度和不同作用时间对SMC增殖的效果,并用RT-PCR法检测不同浓度地塞米松作用下大鼠胸主动脉SMC增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达情况。结果①地塞米松呈剂量依赖性抑制体外培养的大鼠SMC增殖,不同时间和不同浓度对其抑制程度不同。各浓度组之间总A值变化经方差分析差异有显著性,F=36．02,P＜0．001;两两比较较高浓度组10^(-6)及10^(-5) mol/L抑制率相似,A值无显著性差异,P=0．065;低浓度组10^(-11) mol/L与对照组相比差异无显著性,P=0．567;余各两两比较差异均有显著性,P＜0．001;②地塞米松以浓度依赖模式抑制大鼠SMC的PCNA mRNA表达。方差分析F= 15．407,P＜0．001。较低浓度组(10^(-9) mol/L及10^(-11)mol/L)与对照组相比,无显著性差异,P值分别为0．48及0．56。其余各组同对照组相比,差异有显著性,P＜0．05。结论地塞米松呈剂量依赖性抑制大鼠SMC增殖, 10^(-7) mol/L浓度以上可起效,并能持续抑制96 h以上,较低浓度地塞米松在作用时间延长时也有可能抑制SMC的增殖。

ITP患者脾切除前后外周血Th亚群细胞因子的变化及意义

目的:探讨辅助性T淋巴细胞(T helper lymphocyte,Th)亚群细胞因子在原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者脾切除术前后的表达及意义。方法:采用QuantiGene Plex(QGP)方法检测22例ITP患者腹腔镜脾切除术前后外周血Th1(IL-2和IFN-γ)、Th2(IL-4、IL-5、IL-6和IL-10)、Th3(TGF-β1)和Th17(IL-17)细胞因子mRNA表达水平的变化。30例健康体检者作为对照组。结果:(1)术前组IL-2表达水平较对照组明显降低(P<0.05),IL-17表达水平较对照组明显升高(P<0.05),其它细胞因子表达水平在术前组和对照组之间无显著差异(P>0.05)。术后组TGF-β1表达较术前组和正常对照组均明显升高(P<0.05);术后组IL-2表达较术前有所升高(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.05)。其它细胞因子表达水平在术前组和术后组之间无显著性差异(P>0.05)。(2)术前IL-2与IFN-γ之间成正相关(r=0.647,P<0.01),术前其它细胞因子之间均无明显相关性(P>0.05)。术后3对细胞因子之间成正相关,分别是IL-2与IFN-γ(r=0.787,P<0.01),IL-17与IL-2(r=0.554,P<0.01),IL-17与IFN-γ(r=0.461,P<0.05);术后其它细胞因子之间均无明显相关性(P>0.05)。结论:ITP患者存在Th亚群细胞因子失衡,脾切除术可改善ITP患者部分Th亚群细胞因子的失衡。

重组35型腺病毒介导人骨形成蛋白基因对脂肪源性干细胞的诱导分化

目的在体外运用人骨形成蛋白7(human bone morphogenetic protein7,hBMP-7)基因重组35型腺病毒(recombinant adenovirus's containing fibers derived from B-group serotype35,rAd5/F35)诱导大鼠脂肪源性干细胞(adipose-derived adult stem cell,ADASC)向成骨细胞定向分化,为骨组织工程探索新的细胞来源。方法以pcDNA1.1/氨苄青霉素-hBMP-7质粒为模板扩增hBMP-7基因,将回收的PCR产物片段克隆入pDC316载体,获得重组质粒pDC316-hBMP-7。骨架质粒pBHG-fiber5/35和穿梭质粒pDC316-hBMP-7共转染293细胞,同源重组产生rAd5/F35-hBMP-7。同样的方法构建rAd5/F35-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)。在体外分别转染大鼠ADASC并留置空白对照。观察细胞形态和生长情况,ELISA检测转染基因的转录和表达,检测钙结节和骨钙素等成骨细胞表型。结果PCR、酶切鉴定表明rAd5/F35-hBMP-7质粒构建正确。rAd5/F35-EGFP对大鼠ADASC中转染效率可达90%以上,hBMP-7基因存在于转染后的ADASC中并表达相应的蛋白,诱导组钙结节形成,电镜见胞质中有钙质成分,碱性磷酸酶阳性,骨钙素表达增强。结论rAd5/F35介导hBMP-7基因可促进ADASC向成骨细胞定向分化。

肝细胞性肝癌中Caspase-3和PCNA的表达

目的探讨Caspase-3和PCNA在肝细胞肝癌的表达及其在肝细胞肝癌发生、发展中的作用。方法应用组织芯片技术和免疫组化方法(SP法)检测95例肝细胞肝癌组织、68例癌旁组织和19例正常肝组织中Caspase-3和PCNA的表达。结果Caspase-3在肝细胞肝癌中表达阳性率(34.7%)显著低于癌旁组织(79.4%,P<0.01)和正常肝组织(84.2%,P<0.01);Caspase-3的表达与肝细胞肝癌的组织分级和HBsAg有关(P<0.01,P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小和转移无关(P>0.05)。PCNA在肝细胞肝癌中的表达阳性率(68.4%)显著高于癌旁组织(26.5%,P<0.01)和正常肝组织(15.8%,P<0.01);PCNA的表达与患者组织分级、转移有关(P<0.01,P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小、和HBsAg无关(P>0.05)。在肝癌组织中Caspase-3与PCNA的表达呈显著负相关(r=-0.598,P<0.001)。结论肝细胞肝癌中Caspase-3的低表达与PCNA的高表达在肿瘤的发生、发展过程中可能起重要作用。

抗原致敏IL-12基因修饰的树突状细胞诱导抗肾癌免疫的体外研究

【目的】探讨肾癌细胞抗原致敏白介素-12(IL-12)基因修饰的树突状细胞(DC)体外诱导、激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫杀伤肾癌细胞的效能及相关免疫机制。【方法】采用重组逆转录病毒介导IL-12基因修饰人外周血单个核细胞(PBMC)来源的DC;超声细胞破碎法提取肾癌细胞粗提抗原(Ag)致敏经IL-12转染的DC;ELISA法检测各组DCs和各组CTLs上清中IL-12、IFN-γ因子的分泌水平;流式细胞仪(FACS)分析各组DCs表面CD83、CD86、HLA-DR的表达;MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力及CTL免疫杀伤肾癌细胞的效能;统计学分析比较各组间的差异。【结果】经IL-12基因修饰和抗原致敏后的DC高表达CD83和CD86分子分别为(65.9%±3.1%,92.8%±3.4%),分泌高水平IL-12(279.6±1.7)pg/mL及IFN-γ(892±31)pg/mL,刺激同源T淋巴细胞增殖明显,诱导激活的CTL上清中IFN-γ水平(1146±31)pg/mL显著高于对照组;CTL对肾癌细胞有强大的杀伤作用,显著高于各对照组。【结论】经IL-12基因修饰和抗原致敏后的DC能有效地诱导CTL特异性抗肿瘤免疫应答。其机制可能与IL-12基因修饰和抗原致敏活化了DC抗原提呈第二信号,促进了DC高分泌IL-12因子,激活了T淋巴细胞致使CTL分泌IFN-γ的能力增强密切相关。

人骨形态发生蛋白质7基因转染兔骨髓基质干细胞向成骨细胞的分化(英文)

背景:骨形态发生蛋白质是目前发现惟一的一类具有成骨能力的细胞因子,它能刺激基质干细胞向成软骨细胞和成骨细胞方向分化。目的:应用基因工程方法,观察人骨形态发生蛋白质7基因转染兔骨髓基质干细胞向成骨细胞的定向分化。设计:单一样本观察。单位:中山大学附属第一医院骨科。材料:pcDNA1.1/AMP-hBMP7质粒。方法:实验于2004-05/2005-03在中山大学附属第一医院外科实验室完成。全骨髓培养法培养兔骨髓基质干细胞,在体外分别转染pcD-NA1.1/AMP-hBMP7和pcDNA1.1/AMP并留置空白对照。检测转染基因的转录和表达,观察细胞形态和生长情况,通过对感染细胞的碱性磷酸酶染色、钙盐染色、电镜观察胞质中钙质成分以及检测骨钙素鉴定其成骨分化表型。主要观察指标:①兔骨髓基质干细胞的形态及生长。②表达产物的鉴定。③碱性磷酸酶染色(钙钴法)结果。④茜素红染色结果。⑤透射电镜观察结果。⑥扫描电镜观察结果。⑦骨钙素的测定结果。结果:人骨形态发生蛋白质7基因存在于转染后的骨髓基质干细胞中并表达相应的mRNA。目的基因表达后的细胞形态略有变化,但生长曲线与未转染组无明显变化。骨钙素表达较未转染组明显增强。转染组细胞的碱性磷酸酶染色和钙盐染色均为阳性。结论:人骨形态发生蛋白质7基因转染可促进兔骨髓基质干细胞向成骨细胞表型分化。

人骨形成蛋白7基因重组35型腺病毒载体的构建与鉴定

目的探讨构建携带人骨形成蛋白7(human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)基因的重组35型腺病毒(serotype35adenovirus,Ad5F35)载体,为基因治疗研究提供一种新的方法,并观察其在兔骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法以pcDNA1.1/Amp-hBMP7质粒为模板扩增骨形成蛋白(BMP-7)基因(1.3kb),将回收的PCR产物片段克隆入pDC316载体,获得重组质粒pDC316-hBMP7。骨架质粒pBHG-fiber5/35和穿梭质粒pDC316-hBMP7共转染293细胞,同源重组产生重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7。同样的方法构建rAd5/F35-EGFP。在体外用不同感染复数(M.O.I)值的rAd5/F35-hBMP7和rAd5/F35-GFP分别转染兔MSCs,并留置空白对照。采用流式细胞仪、RT-PCR方法检测目的基因的转染效率和表达。结果PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明,重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7质粒构建正确。转染兔MSCs的最高效率可达99%,hBMP-7基因存在于转染后的MSCs中并表达相应的mRNA。结论本实验成功构建了含hBMP-7基因的重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7载体,在体外能高效转染兔MSCs。

重组人血管内皮抑素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和相关蛋白表达的影响

目的:研究重组人血管内皮抑素(恩度)在体外对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、细胞周期及细胞相关蛋白表达的影响。方法:用CCK-8检测恩度对RPMI 8226细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡和细胞周期的改变;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达变化;以实时定量PCR和Westernblotting检测RPMI 8226细胞血管细胞粘附因子1(VCAM-1)、白细胞介素6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA以及蛋白表达变化;ELISA检测细胞上清液中细胞因子IL-6和VEGF水平。结果:恩度对RPMI 8226细胞有增殖抑制作用,250 mg/L恩度对RPMI 8226细胞72 h增殖抑制率为(59.5±5.6)%(P<0.05),细胞G1期比例增加(P<0.05),但对细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达无显著影响;经恩度作用后RPMI 8226细胞VCAM-1表达下降(P<0.05),IL-6和VEGF表达及分泌降低(均P<0.05)。结论:恩度能通过改变细胞周期变化抑制RPMI 8226细胞增殖,并能减少VCAM-1表达及IL-6、VEGF分泌,对细胞凋亡无明显改变。

RNA干扰下调SPHK1基因表达抑制胃癌细胞增殖

【目的】应用RNA干扰方法下调鞘氨醇激酶1(SPHK1)基因表达,研究SPHK1对胃癌细胞SGC-7901、MGC-803细胞增殖的影响及其可能的作用机制。【方法】免疫组织化学法检测5对胃癌及癌旁组织的SPHK1蛋白表达量;构建质粒、制备逆转录病毒并感染胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803,筛选并鉴定SPHK1-RNAi和对照载体(RNAi-Vector)稳定表达细胞株;MTT法检测胃癌细胞的增殖变化;Western blot法检测SPHK1、p21、p27、Akt、p-Akt、Rb、p-Rb蛋白的表达水平。【结果】SPHK1蛋白在胃癌组织中过表达;与对照组比较,两株SPHK1-RNAi稳定表达的胃癌细胞SGC-7901、MGC-803中SPHK1表达显著下调,抑制率分别为81.2%、65.1%;SPHK1-RNAi胃癌细胞增殖能力较对照组显著减弱;SPHK1-RNAi胃癌细胞的磷酸化Akt及磷酸化Rb蛋白表达明显降低,而p21、p27的蛋白表达水平明显上调。【结论】下调SPHK1基因表达能抑制胃癌细胞的增殖,其机制可能与细胞内Akt信号被减弱,细胞周期抑制蛋白p21、p27的表达上调有关。

直肠癌术后严重并发症的危险因素分析

目的探究直肠癌保肛术后30d严重并发症的危险因素。方法回顾性分析中山大学附属第六医院2010年1月至2014年10月间接受直肠癌保肛手术的956例病人的临床病理及并发症资料,采用单因素和多因素Logistic回归模型分析直肠癌保肛手术术后30d内严重并发症(Clavien-Dindo分级≥Ⅲ级)的危险因素。结果 956例病人中严重并发症发生率为6.3%(60/956)。按Clavien-Dindo并发症分级:Ⅲa级36例,Ⅲb级12例,Ⅳa级5例,Ⅳb级5例,Ⅴ级2例。单因素Logistic回归分析显示,术前合并症(OR=1.781、95%CI为1.04~3.048、P=0.035),术前白蛋白(OR=6.979、95%CI为3.057~15.930、P<0.001),术中估计出血量(OR=2.386、95%CI为1.375~4.138、P=0.002),术中输血(OR=2.698、95%CI为1.088~6.695、P=0.032)与直肠癌术后严重并发症的发生有关。Logistic多因素回归分析显示,术前存在合并症(OR=2.051、95%CI为1.160~3.627、P=0.014),术前白蛋白(≤35g/L)(OR=4.652、95%CI为1.776~12.182、P=0.002),术中估计出血量(>150ml)(OR=2.131、95%CI为1.190~3.816、P=0.011)是直肠癌术后严重并发症发生的独立危险因素。结论术前存在合并症、低白蛋白血症及术中出血量大是直肠癌术后30d内发生严重并发症的危险因素。

巨噬细胞移动抑制因子和细胞周期蛋白D1的表达与肝细胞癌生长和转移的关系

目的研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）、磷酸化视网膜母细胞瘤易感基因产物蛋白（phospho—Rb）在HeC组织中的表达及其与癌细胞生长和转移的关系。方法应用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测93份HCC组织中MIF、Cyclin D1、CDK4和phospho—Rb的表达，分析它们的表达与HCC临床病理特征的关系。结果93份HCC组织中MIF、Cyclin D1、CDK4和phospho—Rb的表达率分别为71％、41％、82％和14％，MIF和Cyclin D1阳性表达率与正常肝脏组织表达率之间的差异有统计学意义（P〈0．01），CDK4和phospho—Rb阳性表达率与正常肝脏组织表达率之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。在≥3．5cm的肿瘤中MIF表达率为79％，明显高于在〈3．5cm肿瘤中的表达率48％（P〈0．01）；有转移的肝癌组织中Cyclin D1阳性率为62％，明显高于无转移组织中的阳性率35％，差异有统计学意义（P〈0．05）。MIF表达强弱与Cyclin D1的表达呈正相关关系（P〈0，01）。CDK4和phospho—Rb的表达与肿瘤大小及是否转移的关系无统计学意义。结论MIF和Cyclin D1在HCC发展进程中可能促进肿瘤的生长和转移。

人骨形成蛋白7基因重组2型腺相关病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建人骨形成蛋白7基因(hBMP7)重组腺相关病毒载体,并观察其在兔骨髓间充质干细胞中的表达。方法将骨形成蛋白7基因片段克隆入穿梭质粒 pUC18获得重组质粒pUC18-hBMP7。Kpn Ⅰ和 Sa Ⅱ双酶切质粒 pUC18-hBMP7与 pSNAV,用 T4DNA 连接酶连接分别回收的两片段后转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞,获得重组质粒 PSNAV-hBMP7,转染 BHK-21细胞,筛选培养,用能表达 Rap 和 Cap 的重组Ⅰ型单纯疱疹病毒 HSV1_(-rc)/ΔUL2感染此细胞,裂解细胞收获病毒液。采用氯仿处理-PEG/NaCl 沉淀-氯仿抽提法分离浓缩、纯化与测定病毒滴度。用 rAAV2-hBMP7和 rAAV2-EGFP 在体外分别转染兔骨髓间充质干细胞。流式细胞仪、RT-PCR 和 Western-blot 方法检测兔骨髓间充质干细胞中 hBMP-7基因的转录和表达。结果成功构建具有感染活性的重组腺相关病毒载体 rAAV2-hBMP7,病毒载体对兔骨髓间充质干细胞早期转染效率可达99.8%,hBMP7在兔骨髓间充质干细胞中可得到转录和表达。结论成功构建了人骨形成蛋白7基因重组腺相关病毒载体,rAAV2-hBMP7载体在体外可转染兔骨髓间充质干细胞,并获得较高的转染效率。

miR-338-3p在肝癌组织中的表达及意义

目的检测miRNA在肝癌中的表达谱,探讨miR-338-3p在肝癌组织中的表达及与肝癌临床病理参数的关系和意义。方法采用液相芯片技术分析20对肝癌组织与其癌旁组织中114种miRNA表达谱的差异。Real-timeRT-PCR验证另36对肝癌组织中miR-338-3p下调表达及其与肝癌临床参数的相关性。结果 31种miRNA在肝癌组织与非肝癌组织间呈现差异表达,其中12种miRNA在癌组织的表达较癌旁组织上调,19种miRNA在癌组织中表达下调。miR-338-3p下调表达程度与肝癌恶性程度、肿瘤分化程度、肝内和肝外转移及门静脉癌栓有关,与患者性别、AFP、HBsAg、是否合并肝硬变等不相关(P<0.01)。miR-338-3p的表达量肝癌组织低于非肿瘤组织,转移性肝癌低于非转移性癌组织,miR-338-3p的表达量随着肿瘤级别的增加而逐近降低(P<0.01)。结论肝癌组织与癌旁组织之间存在miRNA差异表达,其中miR-338-3p下调表达程度与肝恶性行为相关。

腺相关病毒介导人骨形态发生蛋白7基因体外转染脂肪源性干细胞的研究

目的构建人骨形态发生蛋白7(hBMP7)基因重组腺相关病毒载体并观察其在脂肪源性干细胞(ADAS cells)中的表达,为骨组织工程探索新的基因治疗方法和细胞来源。方法以pcDNA1．1／Amp-hBMP7质粒为模板扩增,将回收的PCR产物片段克隆入pUC18载体,获得重组质粒pUC18-hBMP7。双酶切质粒pUC18-hBMP7、pSNAV,回收的两片段转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得重组质粒PSNAV-hBMP7。用重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc／△UL2感染BHK-21细胞,裂解细胞收获病毒液。采用“氯仿处理-PEG／NaCl沉淀-氯仿抽提”三个步骤分离浓缩和纯化,测定病毒滴度。培养大鼠ADAS cells,并检测细胞表面标记物。在体外分别转染rAAV2-hBMP7和rAAV2-GFP,流式细胞仪、Western-blot方法检测转染基因的表达。结果PCR、酶切鉴定以及测序分析表明,BMP7基因成功克隆入质粒pSNAV-hBMP7载体中,并在BHK21细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺相关病毒载体rAAV2-hBMP7。早期对ADAS cells的转染效率可达90％, Western-Blot方法检测到第1周与第8周的转染组细胞均有蛋白水平的表达。结论成功构建了hBMP7基因重组腺相关病毒载体和培养出大鼠ADAS cells,rAAV2-hBMP7载体在体外可高效转染大鼠ADAS cells。

免疫性血小板减少症脾切除疗效与外周血Th亚群细胞因子表达的关系

目的探讨原发性免疫性血小板减少症(ITP)脾切除血液学疗效与外周血辅助性T细胞(Th)亚群细胞因子的mRNA表达水平的关系。方法采用QuantiGene Plex(QGP)方法,分别检测14例手术有效(R组)和8例手术无效(NR组)的ITP患者腹腔镜脾切除术前后外周血Th1(IL-2、IFN-γ)、Th2(IL-4、IL-5、IL-6、IL-10)、Th3(TGF-β1)、Th17(IL-17)细胞因子的mRNA表达水平的变化。对照组为30例健康体检者。结果术前及术后R组TGF-β1mRNA的表达水平均明显高于NR组(P值分别为0.001和0.006)及对照组(P值分别为0.001和<0.001)。术前及术后R组和NR组之间IL-2、IFN-γ与IL-17 mRNA的表达水平差异均无统计学意义。结论脾切除疗效不同的ITP患者TGF-β1的mRNA表达水平存在差异,检测术前TGF-β1的表达水平有助于预测手术疗效。

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶5在猪颈动脉易损粥样硬化斑块中的表达

目的观察小型猪颈动脉粥样硬化模型中斑块组织尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化酶（NOX）5的表达。方法通过高脂高胆同醇饮食联合部分结扎颈动脉的方法，在小型猪建立双侧颈动脉粥样硬化模型。3个月后观察颈动脉粥样硬化斑块中NOX5蛋白的表达。结果10根小猪颈动脉的139个片段中可形成不同程度的粥样硬化改变。早期斑块中，NOX5主要表达在新生内膜的内皮细胞；进展期斑块中，NOX5主要分布在斑块的内皮细胞、斑块基底部和脂质核心周围。有纤维帽破裂的动脉斑块中NOX5蛋白表达升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论小猪动脉粥样硬化斑块中NOX5蛋白的高表达和斑块破裂有一定关系。

甲泼尼龙对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨甲泼尼龙（MP）对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型20只，随机分为对照组、MP小剂量组、MP大剂量组。用药4周后观察裸鼠重量、肿瘤体积和重量、肿瘤组织切片透射电镜检查、放射免疫法测定血AFP浓度、荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测肿瘤组织血管内皮生长因子（YEGF），、基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达。结果MP大剂量组肿瘤重量（1．62±0．12）Vs（1．33±0．19）g、体积（0．63±0．05）Vs（0．56±0．05）cm^3大于对照组，该组裸鼠血AFP浓度高于对照组（7．5±1．14Vs（5．98±0．78）μg/L，VEGF mRNA、MMP-2mRNA表达显著增加。结论MP大剂量可以上调VEGF mRNA、MMP-2mRNA的表达，促进肝癌细胞生长、转移，小剂量无影响。