Smac过表达对食管鳞癌细胞Warburg效应和细胞凋亡的影响

目的:探究Smac过表达对食管鳞癌细胞Warburg效应和细胞凋亡的影响。方法:以含Smac过表达载体的慢病毒感染食管鳞癌细胞EC1和Eca109(Smac过表达组),以感染含空载体的慢病毒为阴性对照,以未感染细胞为空白对照。采用Western blot法检测3组细胞Smac蛋白的表达情况。用过氧化氢刺激Smac过表达组和阴性对照组细胞,利用线粒体膜电位检测试剂盒和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞线粒体膜电位和细胞凋亡情况,并用Western blot法检测细胞中凋亡信号通路相关蛋白[细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2、Caspase-3前体]以及Warburg效应关键蛋白[己糖激酶Ⅱ(HK2)和乳酸脱氢酶(LDH)]的表达。结果:EC1和Eca109 Smac过表达组Smac蛋白表达水平升高,提示成功构建了Smac过表达细胞株。经过氧化氢刺激后,与阴性对照组相比,Smac过表达组HK2和LDH表达水平下降,细胞线粒体膜电位降低,细胞凋亡率升高,Cyt-C的表达水平升高,Bcl-2和Caspase-3前体蛋白的表达水平下降(P<0.05)。结论:氧化应激刺激下,Smac过表达可抑制食管鳞癌细胞的Warburg效应,促进食管鳞癌细胞凋亡。

miRNA在食管鳞癌发病和治疗中的作用机制

1引言 食管癌是世界上最常见的上消化道恶性肿瘤,在世界癌症病死率排序中位居第6。根据病理分型,食管癌可分为食管鳞癌和食管腺癌,而中国以食管鳞癌多发。河南、河北和山西三省交界的太行山地区是中国乃至世界上食管鳞癌发病率和病死率最高的地区。在中国北方其发病率超过100/100 000。

p97抑制剂NMS-873对Eca109细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响

目的:探讨p97抑制剂NMS-873对食管鳞状细胞癌Eca109细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法:用不同浓度的NMS-873分别处理Eca109细胞24、48、72h,采用CCK-8法检测细胞增殖;在此基础上选用1、2、3μmol/LNMS-873分别作用于Eca109细胞48h,采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的变化,EdU荧光法检测细胞增殖。结果:NMS-873可呈时间和剂量依赖性抑制Eca109细胞增殖;1、2、3μmol/L的NMS-873分别作用于Eca109细胞48h后,与阴性对照组相比,随着NMS-873浓度的增加,NMS-873组Eca109细胞凋亡率提高,迁移细胞数减少,增殖率降低(P<0.05)。结论:NMS-873能有效抑制Eca109细胞增殖,促进细胞凋亡,并降低细胞迁移能力。

β-胡萝卜素对食管鳞癌EC1细胞内活性氧和细胞凋亡的影响

目的:探讨β-胡萝卜素对食管鳞癌EC1细胞内活性氧和细胞凋亡的影响。方法:分别用不同质量浓度的β-胡萝卜素(30、50、80μmo L/L)处理食管鳞癌EC1细胞48 h后,采用化学荧光法检测EC1细胞内活性氧(ROS)含量变化,通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变检测线粒体膜电位(MMP)变化,ELISA法检测胞内细胞色素C(Cyt-C)含量的变化,Western blot检测Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达,流式细胞术检测不同质量浓度的β-胡萝卜素对EC1细胞凋亡的影响。结果:β-胡萝卜素处理能够提高EC1细胞内ROS含量,引起MMP下降,促进Cyt-C的释放,上调Bax和Caspase-3蛋白表达,并下调Bcl-2蛋白表达;同时,β-胡萝卜素作用能提高EC1细胞凋亡率。结论:β-胡萝卜素能够通过上调细胞内ROS的水平,降低MMP,进一步促进食管鳞癌细胞凋亡。

MS-275对食管鳞癌KYSE-70细胞存活、细胞周期、凋亡及迁移的影响

目的:观察MS-275对食管鳞癌KYSE-70细胞存活、细胞周期、凋亡以及迁移的影响,并分析其对PI3K/Akt/m TOR信号通路相关蛋白p-Akt1和p-m TOR的影响。方法:采用qRT-PCR和Western blot检测KYSE-70细胞和正常食管上皮Het-1A细胞中HDAC1 mRNA及蛋白的表达;CCK-8法检测不同浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、4. 00、8. 00μmol/L) MS-275对KYSE-70细胞存活的影响;以0. 00、0. 25、0. 50、1. 00和2. 00μmol/L MS-275处理KYSE-70细胞,48 h后流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移情况,Western blot检测细胞中Cyclin D1、Cleaved caspase-3、E-cadherin、p-Akt1和p-mTOR蛋白的表达情况。结果:与Het-1A细胞相比,KYSE-70细胞中HDAC1 mRNA和蛋白表达显著增加(P <0. 05);MS-275对KYSE-70细胞存活的影响具有时间和剂量依赖性(P <0. 05);随着MS-275处理浓度的增加,KYSE-70 G0/G1期细胞增加、S期细胞降低,细胞凋亡率提高,划痕愈合率降低(P <0. 05)。MS-275可提高Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白的表达,降低Cyclin D1、p-Akt1和p-mTOR蛋白的表达(P <0. 05)。结论:MS-275可降低KYSE-70细胞存活率,有效抑制细胞迁移,阻滞细胞于G0/G1期,促进细胞凋亡,其作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制有关。

MS-275联合顺铂对食管鳞状细胞癌EC9706细胞氧化损伤和凋亡的影响

目的:探讨MS-275联合顺铂(DDP)对食管鳞状细胞癌(鳞癌) EC9706细胞氧化损伤和细胞凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测0. 5、1. 0、2. 0、4. 0和8. 0μmol/L MS-275和0. 25、0. 50、1. 00、2. 00和4. 00μmol/L DDP作用24、48、72 h对EC9706细胞存活率的影响。EC9706细胞分为空白对照组(不作处理)、MS-275组、DDP组和联合(MS-275+DDP)组,MS-275和DDP分别采用2. 0和1. 00μmol/L的浓度作用48 h,CCK-8法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)水平,相应试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,JC-1染色检测线粒体膜电位,Western blot检测Bax、Bcl-2和Trx蛋白的表达。结果:2. 0μmol/L MS-275和1. 00μmol/L DDP均能降低EC9706细胞存活率,升高凋亡率(P均<0. 001),增加细胞内ROS水平和MDA含量(P均<0. 001),降低线粒体膜电位以及SOD、GSH-PX活力(P均<0. 001),同时降低Bcl-2和Trx蛋白表达,增加Bax蛋白表达(P均<0. 001);两药联合具有一定的协同效应(P均<0. 001)。结论:MS-275联合DDP可诱导EC9706细胞的氧化损伤和凋亡。

基于气相色谱-质谱联用技术的食管鳞癌细胞代谢组学分析

目的:对人食管鳞癌细胞及正常人食管上皮细胞进行代谢组学分析,筛选特征代谢标志物。方法:采用基于气相色谱-质谱联用的代谢组学方法,对3株食管鳞癌细胞EC1、Eca109、TE1及正常食管上皮细胞Het-1A中小分子代谢产物进行检测,利用无监督的主成分分析及单因素方差分析,根据组间代谢群组的代谢途径及代谢物的差异探讨食管鳞癌细胞的代谢特征。结果:EC1、Eca109、TE1和Het-1A相比,代谢模式存在明显差异,差异代谢物有赖氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、葡萄糖、塔格糖及胆固醇等,分别涉及氨基酸代谢、糖代谢和能量代谢等多个代谢途径。结论:通过代谢组学研究筛选出了食管鳞癌细胞中的差异代谢物。

食管鳞癌多药耐药机制及逆转策略的研究进展

食管鳞癌(ESCC)是我国高发的恶性肿瘤之一,化学治疗是ESCC临床治疗的常用手段。ESCC细胞对化疗药物的多药耐药机制与细胞膜转运蛋白表达、细胞内酶系统、凋亡相关基因表达、微环境、自噬作用、信号转导通路、miRNA表达等多种异常有关,抗肿瘤药物联合使用、免疫治疗、研发有效中药逆转耐药是提高ESCC化疗疗效的主要途径。