阿帕替尼致高血压的文献病例分析

目的:探讨阿帕替尼致高血压的临床特点,为临床防治提供参考。方法:从知网、PubMed等国内外数据库检索阿帕替尼致高血压的病例报告文献,分析患者基本情况、抗肿瘤治疗方案、高血压发生、干预和转归等情况。结果:收集到26篇文献,患者共30例;男性12例,女性18例;年龄16~93岁,平均58岁。阿帕替尼日剂量500 mg和250 mg最普遍。19例高血压发生的中位时间为14(7,30)d,其中13例(68%)出现在服药15 d内。3级及以上高血压16例(53%),手足综合征和蛋白尿是常见的并发不良反应。绝大多数患者经阿帕替尼剂量调整和/或降压治疗后血压控制平稳,仅4例患者停用阿帕替尼。结论:阿帕替尼致高血压多在用药2周内出现,3级及以上高血压常见,但多数患者的血压经阿帕替尼停药或减量治疗和应用降压药后可控。

YTHDF1和YTHDF2在hSOD1^(G93A)突变型ALS转基因小鼠脊髓中的表达

目的检测m^(6)A识别蛋白YTHDF1和YTHDF2在ALS转基因小鼠脊髓中的表达变化,阐明其异常表达与ALS疾病进展的动态关系。方法选取hSOD1^(G93A)突变型ALS转基因小鼠与同窝野生型(WT)小鼠,分别在发病前期(出生后70 d)、发病早期(出生后95 d)、发病中期(出生后108 d)和发病晚期(出生后122 d)分离脊髓,Western blot和免疫荧光染色双标技术检测YTHDF1和YTHDF2在小鼠脊髓中的蛋白表达与定位,qRT-PCR检测小鼠脊髓中YTHDF1和YTHDF2 mRNA表达。结果与WT小鼠相比,在70 d、95d、108 d和122 d ALS转基因小鼠脊髓中YTHDF1的mRNA水平和蛋白水平表达均降低,YTHDF2的mRNA水平和蛋白水平表达均升高。免疫荧光双标染色结果显示,在ALS转基因小鼠和WT小鼠脊髓前角均可检测到YTHDF1/神经元核抗原(NeuN)和YTHDF2/NeuN双阳性细胞,在疾病后期可检测到YTHDF1和YTHDF2与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)双阳性细胞,提示YTHDF1和YTHDF2主要在脊髓神经元中表达。结论YTHDF1和YTHDF2在ALS转基因小鼠脊髓中表达异常与ALS脊髓运动神经元退变密切相关。

hSOD1-G93A突变的肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中5-mC水平以及DNMT1、DNMT3A和DNMT3B表达的变化

目的探讨5-甲基胞嘧啶(5-mC)水平以及DNA甲基转移酶1、3A和3B(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)蛋白表达变化与肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)之间的关系。方法选用发病前期(70 d)、发病早期(95 d)、发病中期(108 d)和发病晚期(122 d)的hSOD1-G93A突变的ALS转基因小鼠,以同窝野生型(wild type,WT)小鼠作为对照,应用ELISA和Dot blot技术检测ALS小鼠脊髓中5-mC水平的变化规律,采用Western blot和免疫荧光双标染色技术检测ALS小鼠不同时期的脊髓中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的蛋白水平变化以及定位。结果ELISA和Dot blot结果显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平升高;Western blot分析显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中DNMT1蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高;DNMT3A蛋白水平在70 d、95 d和108 d升高,在122 d无显著性变化;DNMT3B蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高。结论ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平及关键DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的蛋白水平异常升高与ALS发病密切相关。

肌萎缩侧索硬化症中神经炎症与小胶质细胞活化的研究进展

肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种以脑、脊髓运动神经元(MNs)进行性退变为特征的、致死性神经退行性疾病。神经炎症是ALS进程中的重要影响因素,其特征包括炎症因子异常升高,神经胶质细胞持续增生、活化、功能动态改变,以及外周免疫细胞浸润。目前神经炎症在ALS发生发展过程中的作用正被逐步揭示,本文就ALS病程中神经炎症、小胶质细胞极化与MNs退变的关系进行综述,为ALS临床诊断、靶向治疗提供新思路。

非医学专业基础医学概论课程教学改革探讨

《基础医学概论》课程是为医学院校中非医学专业的学生开设,目的是普及非医学专业学生的医学基础知识,为他们以后从事与医疗有关的工作奠定基础。本文分析了我校目前《基础医学概论》教学存在的问题,提出了以"器官、系统"为中心的《基础医学概论》教学模式,强调形态与功能的联系;打破了学科之间的界线,强化了各学科间的有机联系,将各单一的课程式教学转变为综合性、形式多样的教学,有利于提高教学效果,对于医学院校的非医学专业学生来讲,是一种行之有效的教学改革。

大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化

目的:研究正常大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化规律。方法:应用免疫荧光染色技术,检测Nestin、NeuN、MAP2、GFAP、CNPase阳性细胞在大鼠胚胎期及生后脊髓内的分布及变化情况。结果:胚胎发育早期,脊髓中央管、灰质、白质均可检测到Nestin阳性细胞,生后Nestin阳性细胞数量逐渐减少。大鼠脊髓神经元的发生呈现明显的背腹模式,孕14d(E14)脊髓内可检测到NeuN阳性细胞,E16 NeuN阳性细胞逐渐增多,腹侧NeuN阳性细胞核体积较大,分布较稀疏,背侧神经元细胞核体积较小,分布较密集。MAP2染色结果与NeuN一致。胶质细胞的分化、成熟在生后初期进行,P4可检测到GFAP及CNPase阳性细胞,主要分布于脊髓白质内,P30在脊髓灰质内可检测到GFAP阳性细胞,细胞分支较多且短。结论:正常大鼠脊髓发育中神经干细胞的分化呈现一定规律性,向神经元方向化较早且呈明显的背腹模式,胶质细胞的分化较晚。

冻存卵巢移植后功能及其影响因素

卵巢组织缺失、发育不全或其功能衰退将影响女性患者的生理功能 ,随器官移植及冷冻保存技术发展 ,冻存卵巢组织移植为年轻女性患者恢复内分泌及生育能力提供了可能。多种动物实验表明 ,冻存卵巢移植后其功能可恢复 ,并能保持较长期功能。移植后卵巢组织的功能恢复与多种因素有关 ,同时此项技术应用于临床仍有较多问题须待解决。

稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株构建及鉴定

目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株。方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFPN1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17-5p的表达。结果:荧光显微镜观察到空载组和miR-17-5p组细胞都有绿色荧光蛋白高表达,Real-time PCR检测稳定转染miR 17-5p后PC12细胞内miR-17-5p的表达较空载组明显升高(P<0.01)。结论:miR-17-5p在PC12细胞稳定表达,为进一步研究miR-17-5p对神经细胞的调制作用提供有用的细胞模型。

炎性因子IL-1β对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响

目的:本研究应用原代培养星形胶质细胞,探讨炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响。方法:在原代星形胶质细胞培养中分别加入1 ng/ml IL-1β,流式细胞仪检测不同作用时间(0、24、48、72 h)细胞线粒体膜电位改变,激光共聚焦显微镜观察活性氧(ROS)生成,分光光度法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,RT-PCR、Western Blot检测星形胶质细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达变化。结果:1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24~72 h,细胞线粒体膜电位无明显改变,细胞未出现明显损伤。IL-1β孵育24 h,细胞内ROS生成减少,GSH生成增加;48 h细胞内ROS生成增加,GSH较24 h组减低(P<0.05);72 h,原代培养星形胶质细胞内ROS生成明显增加,GSH较0 h组降低(P<0.05)。1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24 h,细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平较0 h组升高(P<0.05);但仅是一过性反应,IL-1β孵育72 h后,原代培养星形胶质细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平均较0 h组降低(P<0.05)。结论:持续炎性因子刺激下,星形胶质细胞抗氧化应激能力呈现动态改变,并且细胞内抗氧化物参与此变化过程。

大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分布

本研究应用BrdU注射技术及免疫荧光染色技术检测正常大鼠发育中脊髓内BrdU、PCNA、nestin阳性细胞分布情况。结果显示,胚胎12.5d(E12.5)时,BrdU阳性细胞分布于神经管全层,阳性标记率最高。随胚龄增加,大鼠脊髓内BrdU阳性细胞标记率降低。PCNA阳性细胞分布和变化规律与BrdU阳性细胞一致。正常成体动物脊髓内较难检测到增殖细胞。胚胎发育早期脊髓脑室带、套层、缘层均可检测到nestin阳性细胞。随大鼠脊髓发育成熟,nestin阳性细胞数量逐渐减少。本研究结果提示,脊髓源性神经干细胞的分布有时空规律性。随大鼠脊髓发育的逐渐成熟,增殖细胞减少,干细胞标记逐渐消失,因此在E12左右分离脊髓源性神经干细胞较适宜。

滚动轴承轻量级深度故障诊断模型

针对现有基于振动信号的诊断模型泛化能力差,而深度学习网络对计算量和存储量要求高的问题,提出轻量级融合密集连接网络与残差神经网络的故障诊断模型.首先,利用格拉姆角场将原始时序信号映射为灰度图像,充分利用二维卷积神经网络的性能;然后,融合密集连接网络和残差神经网络的优点构建融合网络模型,并通过鬼影模块降低其性能消耗,形成轻量级和高识别率的深度网络.实验结果表明,该改进的融合深度学习模型在比传统模型具有更强的鲁棒性和适用性的同时,还拥有极低的浮点运算量与参数量资源占用,证明了该方法在滚动轴承故障诊断领域是有效的、可行的.

孕早期急性感染弓形虫致先天性弓形虫病胎鼠模型的建立

目的建立孕鼠早期急性感染弓形虫RH强毒株致先天性弓形虫病胎鼠模型,观察孕早期母体弓形虫感染对胎鼠脑发育的影响。方法 SD孕鼠42只于胚胎第3天(E3)随机分为对照组、实验组、地塞米松组各14只。对照组注射灭菌PBS,实验组与地塞米松组以腹腔注射弓形虫RH株,后者同时给予地塞米松饮水。分别于胚胎第14、16天(E14、E16)处死孕鼠剖腹取胎鼠,进行胚胎形态学观察;胎盘压片镜下观察弓形虫体;PCR检测各组羊水、胎肝中的弓形虫B1基因;免疫荧光染色检测对照组、实验组及地塞米松组胎鼠不同发育时期脑组织中的Caspase-3、神经元迁移蛋白(DCX)。结果 3组孕鼠均无死亡。实验组、地塞米松组E14、E16胚胎均有出血、坏死和吸收发生,胎鼠无明显肉眼可见畸形,对照组无死胎、吸收胎出现,3组平均活胎率分别为100%、61%、18%,3组平均活胎率相比,P均<0.05。仅地塞米松组在E14一窝别观察到2个胎盘压片有弓形虫体,羊水中检测到B1基因表达。实验组及地塞米松组胎肝中均检测到B1基因表达。E14、E16实验组胎鼠脑组织中Caspase-3表达较对照组明显增强,但较地塞米松组减低(P均<0.05);实验组DCX表达较对照组减弱,较地塞米松组增强(P均<0.05)。结论建立了稳定垂直传播的先天性弓形虫病胎鼠模型,弓形虫对胚胎脑发育具有毒性作用。

Notch 2在肌萎缩侧索硬化症SOD1^(G93A)转基因小鼠脊髓内的表达变化

目的明确肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)SOD1G93A转基因小鼠脊髓内Notch 2表达水平与ALS病程的关系。方法应用Notch基因阵列表达谱检测Notch信号通路相关分子在表达人突变SOD1基因的SOD1G93A转基因ALS小鼠及野生型鼠脊髓内的表达差异。应用real-time PCR、免疫组织化学染色、Western blot方法检测Notch 2在不同阶段各组小鼠脊髓内的表达变化。结果 Notch基因阵列表达谱聚类分析结果显示Notch 1、Notch 2在95d、122d SOD1G93A鼠脊髓内均显著增高,而Notch 4仅在122d SOD1G93A鼠升高明显。Notch下游靶基因HES1在108d SOD1G93A鼠脊髓内显著降低。RT-PCR结果证实Notch 2在SOD1G93A鼠脊髓内的表达变化。免疫组织化学标记显示Notch 2在SOD1G93A鼠、野生型鼠脊髓各部均有表达,Western blot结果显示Notch 2蛋白表达在95d SOD1G93A鼠增高显著。结论 Notch 2信号分子的表达随ALS疾病进展,在脊髓退变过程中变化显著,可能参与ALS疾病进程。

刚地弓形虫感染对鼠胚胎神经干细胞的影响

目的探讨大鼠孕早期感染刚地弓形虫对鼠胚胎神经干细胞增殖、分化和迁移的影响。方法12只SD孕鼠随机分为对照组和感染组,每组6只。感染组孕鼠于妊娠第1天(E1天)腹腔注射弓形虫RH株速殖子1×105/只,对照组注射等体积生理盐水。于E5天尾静脉取血,吉氏染色查找虫体。分别于E9、E10和E11天处死孕鼠,每组每次2只,逆转录PCR(RT-PCR)检测羊水中弓形虫B1基因,确认胚胎鼠是否感染弓形虫。体外原代培养鼠胚胎神经干细胞,噻唑蓝(MTT)法检测2组细胞增殖水平。分化培养神经干细胞,免疫荧光法检测巢蛋白(nestin)、微管相关蛋白2(MAP2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算对照组和感染组分化为神经元和星形胶质细胞的百分率。取E9、E10和E11天的2组胚胎鼠神经组织作冰冻切片,免疫荧光法检测神经细胞黏附分子(NCAM)在胚胎不同发育时期神经组织中的表达情况。结果血涂片和RT-PCR结果证实,感染组孕鼠和胚胎鼠均感染弓形虫。体外培养神经干细胞,镜下见细胞形态符合神经干细胞特点,神经干细胞标志物nestin蛋白染色呈阳性。MTT结果显示,感染组细胞传代后增殖水平均低于对照组,其中传代后第3和第4天两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。MAP2和GFAP荧光染色结果显示,对照组和感染组神经元分化百分率分别为15.15%(55/363)和8.73%(31/355),两者间差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和感染组星形胶质细胞分化百分率分别为53.35%(199/374)和67.48%(249/369),两者间差异无统计学意义(P>0.05)。E9、E10和E11天2组胚胎神经组织均检测到NCAM蛋白表达,荧光随时间逐渐增强,对照组表达水平均显著高于感染组(P<0.01)。结论大鼠孕早期感染刚地弓形虫可抑制神经干细胞的增殖、分化和迁移。

多种维生素及微量元素对高温致神经管畸形的保护作用及其对纤维粘连蛋白和层粘连蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨高温致神经管畸形(NTD)的因素及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用。方法:实验孕鼠随机分为A组(孕前第8天开始灌服多种维生素及微量元素)、B组(孕后第1天开始灌服)和C组(不灌服)孕鼠高温处理。对各组胎鼠进行形态学观察,记录NTD发生率;用原位杂交技术检测纤维粘连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)在神经上皮细胞及其周围间充质中的转录状况。结果:(1)各组鼠胚均出现不同类型的NTD,C组NTD发生率最高,为77.5%。(2)各组鼠胚神经上皮细胞及其周围间充质中见FN和LN mRNA阳性转录信号,C组明显弱于其他组。结论:FN和LN转录降低是NTD发生的重要因素之一,多种维生素及微量元素对高温致NTD有一定的保护作用。

肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中自噬相关基因ATG5表达降低

目的明确自噬相关基因ATG5在肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)转基因鼠脊髓中的表达情况.方法取95d、108d和122d ALS转基因小鼠和野生型小鼠脊髓,应用免疫荧光、Western blot和RT-PCR技术,检测ATG5在脊髓中的表达.结果免疫荧光染色检测显示,在脊髓内,ATG5免疫反应产物主要定位于神经元;与同窝野生型小鼠比较,脊髓内ATG5免疫反应性在95d转基因小鼠无明显差异,而在108d和122d转基因小鼠明显降低.Western blot和RT-PCR分析显示,与同窝野生型小鼠比较,脊髓内ATG5 mRNA和蛋白表达水平在95d无明显变化,但在108d和122d时,转基因小鼠脊髓内ATG5 mRNA和蛋白表达均显著低于同窝野生型小鼠.结论ATG5在ALS转基因鼠脊髓中表达降低,提示ATG5表达异常与ALS发生密切相关.

大鼠脊髓神经干细胞的鉴定及光镜和电镜观察

本研究应用无血清培养技术对分离的大鼠胚胎脊髓神经干细胞进行体外培养,在倒置显微镜和电镜下观察细胞形态,应用BrdU标记、免疫荧光染色检测细胞增殖、分化情况。免疫荧光显示nestin、MAP2、GFAP以及BrdU/nestin、BrdU/MAP2、Br-dU/GFAP均有阳性表达,说明从大鼠胚胎脊髓可成功分离出神经干细胞,它们分化后可以表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原。脊髓神经干细胞具有自我更新能力,能分化为神经元和星型胶质细胞。

转染miR-17-5p对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响

目的:观察基因miR-17-5p转染对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。应用免疫细胞化学染色法和Western-blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,电镜观察各组细胞超微结构改变。结果:对照组与空载组Bcl-2、Bax蛋白表达无显著性差异,miR-17-5p组与空载组比较,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.01),而Bax蛋白表达明显增多(P<0.01),Western blot检测其凋亡相关蛋白表达变化与免疫组化结果一致。电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无明显差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;miR-17-5p转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集。结论:miR-17-5p基因过表达能引起PC12细胞促凋亡的Bax蛋白表达增多,抗凋亡的Bcl-2蛋白表达减少,导致PC12细胞形态学损伤。

脂肪乳剂逆转布比卡因心肌毒性中线粒体凋亡途径相关蛋白的变化

目的检测脂肪乳剂逆转布比卡因心肌毒性作用中线粒体凋亡通路相关蛋白的变化,探讨脂肪乳剂逆转布比卡因心脏毒性的可能机制。方法日龄1~3d的健康SD大鼠乳鼠,取其心室肌进行体外原代培养,用含有布比卡因的培养基培养24h来建立心肌细胞布比卡因中毒模型。实验分组:空白对照组(C组)、布比卡因组(B组)、布比卡因+脂肪乳剂组(BL组)。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Western blot法检测细胞内细胞色素C(cytochrome C,Cyto-C)和活化的casepase-3蛋白含量。结果与C组比较,B组和BL组细胞凋亡率明显升高,且B组明显高于BL组(P<0.05)。与C组比较,B组和BL组Cyto-C和活化的casepase-3含量均明显升高(P<0.05),且B组明显高于BL组(P<0.05)。结论脂肪乳剂可能通过抑制线粒体Cyto-C释放,降低casepase-3激活来调节细胞凋亡,从而发挥保护心肌细胞的作用。

维甲酸、音猬因子对大鼠脊髓神经干细胞向运动神经元样细胞分化的影响

目的：分离大鼠胚胎的脊髓神经干细胞进行体外培养，探讨维甲酸（RA）、音猬因子（Shh）诱导其向运动神经元样细胞分化。方法：应用无血清培养技术分离培养脊髓神经干细胞，通过5-溴-2-脱氧尿苷标记、免疫荧光显色检测细胞增殖、分化情况；培养液分组添加Shh、RA或shh＋RA，观察神经干细胞向运动神经元样细胞的分化情况。结果：大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞，分化后可表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原；诱导分化后结果显示Shh组未检测到胆碱乙酰转移酶阳性细胞，RA组为20．63％，shh＋RA组为66．84％，其差异具统计学意义。结论：从大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞，Shh、RA可不同程度地诱导脊髓神经干细胞分化为运动神经元样细胞。