Npu DnaE内含肽构建及其对293T细胞高效反式剪接活性分析

目的构建Npu DnaE内含肽,探讨Npu DnaE内含肽是否在293T细胞中具备高效反式剪接活性。方法制备融合基因Vn-NDn-myc和NDc-Vc,插入pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体,构建质粒。转染293T细胞,荧光显微镜下观察目的蛋白Venus是否形成。48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术进一步印证。结果构建的质粒经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T后可见共转染细胞组出现明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明高量目的蛋白Venus形成。结论成功构建Npu DnaE内含肽,其能在293T细胞中发挥反式剪接的生物学功能,并具有高效的剪接效率及功能目的蛋白形成率。

荧光蛋白Venus载体构建及在哺乳动物细胞中的表达

目的构建黄色荧光蛋白Venus重组载体,并观察其在哺乳动物细胞中表达情况。方法将Venus克隆至限制性内切酶处理的pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体上,转染293T细胞,荧光显微镜下观察结果。48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术印证荧光蛋白Venus表达情况。结果重组载体经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T细胞后可见明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明荧光蛋白Venus高量表达。结论成功构建了Venus重组载体,荧光蛋白Venus在哺乳动物细胞中高表达,此为分子与细胞生物学提供了一种重要的研究工具。

含串联多拷贝DNA序列的质粒载体的构建

目的探索简便快速的构建含有串联多拷贝DNA序列的质粒载体的方法。方法通过PCR的方法获得不同拷贝数的DNA序列的片段,以与载体同源重组的方式将PCR片段与载体重组,得到重组质粒。最后经BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定来确定所构建质粒中插入重复DNA序列的拷贝数。结果经酶切鉴定分析,所得质粒分别可以切出不同大小的片段,而且片段大小与所插入的重复DNA序列拷贝数是相对应的。结论成功构建了含有串联多拷贝DNA序列的质粒载体,为向质粒载体中插入多拷贝DNA序列提供了简便实用的新方法。

ICTP、IGF-Ⅰ、BGP指标评价肝癌的研究

目的:了解Ⅰ型胶原羧端交联肽原(C-terminal telopeptide of typeⅠcollagen,ICTP)、胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、骨钙素(BGP)三项肝纤维化指标在原发性肝癌和转移性肝癌血清中的变化,了解三项指标、肝肿瘤指标和肝功能指标之间的关系。方法:正常对照组30例、原发性肝癌组28例、转移性肝癌组23例。采用放射免疫分析测定51例原发性和转移性肝癌病人的血清中的ICTP、IGF-Ⅰ、BGP三项肝纤维化指标;采用罗氏Elecsys1010电化学发光全自动免疫分析仪测定甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA-199)三项肿瘤指标;采用美国贝克曼库尔特公司SynchronLX20全自动生化分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰氨转酞酶(γ-GT)三项肝功能指标。结果:51例病人ICTP、IGF-Ⅰ、BGP水平均明显高于正常对照组(P<0.01);ICTP、IGF-Ⅰ、BGP原发性肝癌组和转移性肝癌组比较无统计学差异(P>0.05);AFP、肝功能指标在原发性肝癌组明显升高,和转移性肝癌组比较有统计学差异(P<0.01);CEA、CA-199在转移性肝癌组明显升高,和原发性肝癌组比较有统计学差异(P<0.05);ICTP、IGF-Ⅰ指标与肝肿瘤指标和肝功能指标之间的相关分析无相关关系(P>0.05);BGP指标与AST、γ-GT指标之间的相关分析有统计学差异(P<0.05)。结论:ICTP、IGF-Ⅰ、BGP三项指标对了解肝内占位性病变的纤维化程度有一定的帮助,ICTP、IGF-Ⅰ指标与肝肿瘤指标和肝功能指标之间无相关关系;BGP与AST、γ-GT之间有一定的相关关系。

双启动子shRNA干扰的协同效应

目的构建含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体,并比较其与单个靶特异干扰序列的shRNA载体的干扰效应。方法通过PCR方法扩增H1启动子序列,构建含有U6和H1双启动子的shRNA载体,命名为PLKO.1-H1。设计2对针对EGFP基因不同位点的shRNA片段,同时设计2对无干扰作用的片段shS1和shS2作为对照。分别构建携带上述片段的慢病毒表达载体shEGFP1-H1-shS2、shS1-H1-shEGFP2及shEGFP1-H1-shEGFP2,同时以shS1-H1-shS2质粒作为对照。将重组质粒转染293t细胞,收集病毒感染Hela/EGFP细胞。比较各组之间细胞的荧光强度,并以Western blot检测EGFP的蛋白表达情况。结果成功构建含有双启动子的shRNA慢病毒表达载体。实验组与对照组相比,EGFP蛋白表达水平明显下调,以shEGFP1-H1-shEGFP2重组质粒干扰效应最强。结论含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体存在协同干扰效应。

酉阳旅游品牌推广

酉阳旅游资源非常丰富，只是受到地理位置、历史与开发等因素的影响，很少有人知道这里。现代旅游产业的竞争是品牌的竞争。所以酉阳要想发展自己的旅游业，就必须先树立自己的品牌。本文将对酉阳旅游业的现状进行分析，并对分析结果进行总结和提炼，得出了酉阳旅游业的王牌：桃花源与少数民族民间文化，并提出“世外桃源——土家苗寨”的品牌定位。再联系酉阳的资源，提出了一系列的品牌推广策略。

我国消费金融公司的发展现状及问题浅析

消费金融公司是在我国大力刺激居民消费，拉动经济增长大环境下的一个新生事物，相对于主流西方国家完善的消费信贷市场来说，我国的消费信贷目前仍处于初创期。本文分析了消费金融公司的发展现状、特点及所面临的问题，进而提出促进我国消费金融公司发展的若干建议。

联合应用垂体后叶素 氢氟噻嗪 卡马西平治疗尿崩症

我院自1996年7月至2000年8月,果用垂体后叶素、氢氯噻嗪、卡马西平联合用药对21例尿崩症患者进行治疗,取得满意效果.现报告如下.

观千剑而后晓器——钟神天神一号音箱

2003年CES上，来自中国的钟神音响展示了JA-2/JA-100三分体甲类放大器，受到了广泛好评。之后钟神音响又在2005年的CES上展示了极品旗舰JA-10/JA-200三分体甲类放大器。2006年CES上，钟神音响将该产品扩大为一整套极品音响；印象CD机＋JA-10/JA-200放大器＋天神一号音箱＋全套纯银线材。

50例重度颅脑损伤大骨瓣开颅术探讨

目的：探讨临床医师使用大骨瓣开颅术对重度颅脑损伤进行手术治疗的经验与效果。方法：以本院在2010年1月~2012年1月收治的50例重度颅脑损伤患者作为此次研究对象,临床医护人员在对所有患者的基础身体状况与病症状况进行检验的基础上,使用大骨瓣开颅术为其进行全方位治疗,并采用GCS评分标准,对50例患者的临床治疗效果进行分析。结果：50例患者治疗后的GCS评分结果显示,本组患者中,良好、中残、重残、植物生存与死亡的患者例数分别为13、11、11、5、10,比例分别为26.00%、22.00%、22.00%、10.00%、20.00%,其中,术后并发皮瓣切口部位脑脊液漏的患者3例,发生硬膜外血肿、对侧硬膜下血肿、同侧脑内血肿且实施了第二次手术的患者2例,发生脑膨的患者7例,比例分别为6.00%、4.00%、14.00%。结论：重度颅脑损伤作为当前临床上致残率、致死率较高的病症,具有发病的急骤性与严重性,临床医师必须使用有效治疗方案对其进行及时控制与处理,本次的临床研究工作证明,以大骨瓣开颅术为患者进行及时严谨的手术治疗,可以实现对于坏死组织、血肿部位的有效清除,并达到对于患者脑组织的减压处理,降低患者发病后的死亡率与残疾率,使患者恢复身心健康,因此,该方法应当在临床上治疗重度颅脑损伤时加以推广应用。但是,该方法容易并发脑脊液渗漏、血肿、脑膨等问题,是降低手术治疗成功率的关键因素,应当在今后的临床研究工作中重点解决。

选择内乳动脉穿支作为受区血管的腹壁下动脉穿支皮瓣乳房再造18例

目的探讨选择内乳动脉穿支(IMAP)作为受区血管在乳腺癌术后即刻用腹壁下动脉穿支皮瓣(DIEPF)进行乳房再造的临床应用效果。方法2020年5月-2023年5月,在河南省肿瘤医院乳腺科接受DIEPF乳房再造的病例中选择IMAP作为受区血管的18例,年龄31~50岁,平均41.5岁。乳腺癌分期为cT_(is/1-2)N_(0-2)M_(0),均为I期乳房再造。皮瓣切取面积9.0 cm×26.0 cm~15.0 cm×38.0 cm,术前行胸腹壁CTA造影,确定IMAP在肋间隙的位置以及粗细。术中记录IMAP的数量,测量受区相应的动、静脉管径。患者出院后通过门诊或微信定期随访,观察皮瓣成活质量,采用乳腺癌患者报告结局量表(BREAST-Q)对乳房外形及供区恢复情况进行评分。结果18例患者,根据CTA提示,术中均发现IMAP,第2肋间13例,第3肋间3例,另外2例在第2、3肋间隙均有IMAP,其中的1例2条分支均适合吻合。15例患者动脉的伴行静脉为1条,2例伴行静脉为2条,1例缺少伴行静脉。动脉管径为(1.1±0.1)mm,静脉管径为(1.8±0.3)mm。随访时间6~40个月,平均28个月。18例皮瓣,17例完全成活,1例皮瓣出现静脉危象,探查发现静脉广泛栓塞,采取假体置入补救。18例患者的患侧内乳区均无凹陷畸形。17例患者BREAST-Q评分平均为94.4分,1例BREAST-Q评分为79.0分。结论IMAP可作为DIEPF乳腺癌术后即刻乳房再造的可靠受区血管,在严格的筛选条件下,值得推广应用。

腹壁下动脉穿支皮瓣乳房重建术后并发症对患者报告结局的影响

目的探讨腹壁下动脉穿支皮瓣乳房重建术后并发症的影响因素,以及术后并发症是否会影响患者的生活质量。方法回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院乳腺科2019年12月至2023年3月行腹壁下动脉穿支皮瓣乳房重建手术患者的临床及随访资料。结果85例行腹壁下动脉穿支皮瓣乳房重建的患者入组。其中Ⅰ期重建71例,Ⅱ期重建14例。22例(25.9%)出现了术后并发症,11例(12.9%)出现了皮瓣并发症,11例(12.9%)出现了腹部供区并发症。单因素及多因素分析显示,总体并发症发生与高的BMI、早期开展的手术相关(P<0.05),皮瓣并发症与高的BMI、早期开展的手术、术中采用内乳血管的分支作为受区血管有关(P<0.05),而腹部并发症与既往腹部手术瘢痕相关(P<0.05)。BREAST-Q评分显示,与无手术并发症组相比,手术并发症组在乳房满意度、心理健康、躯体健康-胸部、躯体健康-腹部、对腹部的满意度、性健康等维度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论腹壁下动脉穿支皮瓣乳房重建存在明显的学习曲线,患者的临床特征(BMI、腹部切口瘢痕)以及术中受区血管的选择可能对患者术后的并发症产生影响,而术后并发症的出现并未对患者报告结局产生影响。

糖尿病与乳腺癌相关性研究进展

糖尿病是一组以血糖水平升高为特征，进而导致肾脏、视网膜、血管及神经等并发症和心血管疾病风险增加的慢性新陈代谢紊乱性疾病；糖尿病还与多种恶性肿瘤存在相关性，如与非糖尿病患者相比，糖尿病患者患肝癌、胰腺癌、子宫内膜癌的相对风险升高2倍以上，乳腺癌、大肠癌、膀胱癌升高1．2-1．5倍。近年来，随着乳腺癌发病率的升高，糖尿病与乳腺癌的相关性研究越来越多，研究显示2者存在着复杂的联系。1流行病学研究乳腺癌为女性高发的恶性肿瘤，在许多国家女性恶性肿瘤中的排位仅次于肺癌。根据世界卫生组织的报道，乳腺癌在欧洲和北美最为高发，其中最高为荷兰，其乳腺癌世界人口标化发病率高达91．60／10万。

三阴性乳腺癌的钼靶影像学表现和临床病理特征

目的比较三阴性乳腺癌[雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人类表皮生长因子受体2（HER-2）均表达阴性]、ER＋／PR＋／HER-2-型乳腺癌和ER-／PR-／HER-2＋型乳腺癌的钼靶影像学表现和临床病理特征，探讨钼靶影像学表现和临床病理特征诊断三阴性乳腺癌的价值。方法收集临床资料完整的乳腺癌患者500例，其中三阴性乳腺癌患者112例，ER＋／PR＋／ttER-2-型乳腺癌患者310例，ER＋／PR-／HER-2＋型乳腺癌患者78例。比较3组患者的钼靶影像学表现和临床病理特征。结果三阴性乳腺癌组与ER＋／PR＋／HER-2-组比较，具有较高的病理组织学分级（P〈0．001）。三阴性乳腺癌组钼靶X线检查多表现为肿物，其中单纯肿物占58．0％，肿物伴钙化占19．6％。三阴性乳腺癌组肿物边缘多表现为光滑（47．1％），高于ER＋／PR＋／HER-2-组（9．8％，P=0．032）和ER-／PR-／HER-2＋组（0，P=0．028）。三阴性乳腺癌组钼靶X线检查较少表现为钙化，其中单纯钙化占13．4％，肿物伴钙化占19．6％。三阴性乳腺癌组钙化多为良性钙化（70．3％），明显高于ER＋／PR＋／HER-2-组（23．1％，P=0．002）和ER-／PR-／HER-2＋组（10．2％，P〈0．001）。结论不吲类型的乳腺癌有不同的生物学特征，其钼靶影像学表现也不尽相同，乳腺癌的钼靶影像学特征町帮助临床医师预测乳腺癌类型和患者的预后，以及评估患者对各种治疗方法的敏感性，有利于制定最优的治疗方案。

老年人乳腺癌综合治疗研究进展

乳腺癌是妇女中最常见的癌症，乳腺癌发病率随年龄增长而增长，全球内1／3的乳腺癌患者在65岁以上。与年轻患者相比，老年乳腺癌患者并发症较多，接受综合治疗较少。本文将从老年乳腺癌患者的临床病理特点、综合治疗等方面进行综述。

乳腺癌原发肿瘤与局部复发肿瘤组织中受体表达的差异及其临床意义

目的探讨乳腺癌患者原发肿瘤和局部复发肿瘤组织中受体表达的差异及其对生存的影响。方法采用免疫组织化学和荧光原位杂交法检测70例乳腺癌患者的原发肿瘤和局部复发肿瘤组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（HER-2）的表达情况，分析其表达差异对乳腺癌患者总生存时间（OS）和复发后生存时间（PRS）的影响。结果乳腺癌原发肿瘤和局部复发肿瘤组织中ER表达有效变化率为26．1％（18／69），PR表达有效变化率为50．0％（34／68），HER-2表达有效变化率为10．3％（4／39）。60例随访患者中，死亡23例（38．3％），中位生存时间为107个月（11～288个月）；3年生存率为84．3％，5年生存率为71．6％，10年生存率为45．7％。Kaplan-Meier方法分析结果显示，ER表达改变可影响乳腺癌患者的0S（P=0．001）和PRS（P〈0．001），PR表达改变不影响乳腺癌患者的OS（P：0．416）和PRS（P=0．056），但不论原发肿瘤的PR状态如何，局部复发肿瘤PR阳性患者的0s和PRS明显好于PR阴性患者。HER-2表达改变不影响乳腺癌患者的OS（P=0．840）和PRS（P=0．544）。结论乳腺癌原发肿瘤和局部复发肿瘤组织中ER、PR和HER-2的表达存在差异，对患者生存有明显的影响。重新检测复发肿瘤组织中的ER、PR和HER-2表达情况，对指导治疗和评估预后有一定意义。

我打破了钓鳙纪录

云南抚仙湖以其常出大鱼而为广大钓友所熟悉。钓大鱼的乐趣吸引我和钓友孙联盟、代能建、王昆等于6月26日驾车来到抚仙湖。当天只钓到一些鲫鱼和小鲤鱼，为了次日钓大鱼，傍晚收竿时我们将早已备好的诱饵全部投入窝点。

2012再获大草鱼

我曾于2005年钓获一尾34.8千克的大鳙鱼，刊登于当年第九期《中国钓鱼》杂志上。多年来我辗转云南的大小水库垂钓，所获的罗非和鲤鱼颇多，遗憾的是一直都没有遇到大鱼。