地龙提取液的活血化瘀作用

为研究地龙的活血化瘀作用及其机制,本实验应用地龙组织提取液给家兔静脉注射,测定其血浆纤维蛋白原含量及优球蛋白溶解时间的变化,结果均明显减少(P<0.01)。将该提取液进一步萃取,制备含多种纤溶酶的酶液,给家兔静脉注射,测定其血液流变学多项指标变化。结果表明血小板聚集百分率、全血及血浆粘度、红细胞刚性指数均显著降低(P<0.01)。说明地龙酶提取液通过促纤溶、抑制血小板聚集、增强红细胞膜稳定性等机制,起到良好的活血化瘀作用。

蚯蚓毒素及其去除方法的初步研究

目的 研究蚯蚓毒素的来源及其成分 ,探索其去除方法。方法对蚯蚓应激分泌液进行透析、可见及紫外分光光度法检测透析袋内外液组分、电泳分析蛋白组分、动物体内试验检测毒性。结果蚯蚓应激分泌液的蛋白组分显示剧毒性 (最小致死量为 0 .2 42mg/kg)。PAGE分离主要有两条带 ;蚯蚓对不同刺激产生的应激分泌液成分相同。结论蚯蚓应激分泌液的蛋白组分有毒 ,用加盐或微电流刺激方法可去除毒素。

地龙组织中抑瘤、促髓系细胞增殖物质的分离提取及其性质作用的研究

地龙蛋白提取液中含有多种蛋白酶,诸如胶原酶、纤溶酶、纤溶酶原激活物等,具有显著的抗凝促纤溶作用。它能降低血液、血浆粘度,降低血小板聚集率和红细胞刚性指数,改善血流变,即具有显著的活血化瘀功能。已知肿瘤患者血液多呈高凝状态,转移的瘤细胞易于血流瘀滞的微血管处定居增殖。血瘀还阻碍药物深入病灶。另有报道,肿瘤细胞的增殖、转移和数种蛋白酶作用相关,在肿瘤局部尿纤溶酶原激活物(U-PA)含量增多。纤溶活性增强。

K562细胞模拟骨髓造血多能干细胞的实验应用

K5 6 2细胞具有骨髓造血多能干细胞的特性 ,既能在一般培养条件下分裂增殖 ,又能在不同培养条件下向红系、粒系、巨核细胞系分化成熟 ,因此可将它作为原始造血干细胞模型 ,用于指导分离促造血药物的有效组分。以3 H TdR掺入法或MTT法测定K5 6 2细胞增殖率 ,确定促造血有效组分的取舍。此法比应用骨髓培养细胞进行试验简便、灵活。

双胸蚓溶栓酶制剂对家兔血浆t—PA与PAI活力的影响

从双胸蚓组织分离、提取的溶栓酶制剂含有纤溶酶类及纤溶酶原激活物,具有良好的溶解血栓作用。动物实验表明该制剂能使体内t-PA活力增加,但不影响PAI活力。

血管内抗凝物质

围绕血栓的形成,血管壁、血小板、血液凝固、抗凝及纤维蛋白溶解系统均参与有关反应,而且彼此相关,反应复杂,但其中心是血液凝固与抗凝系统的作用。因纤溶系统作用于血栓或纤维蛋白形成后。

蚯蚓酶制剂对家兔血液流变学的影响

双胸蚓组织粗提液经分段盐析、透析除盐及DEAE-纤维素结合萃取,获得含多种纤溶酶的酶制剂。动物实验表明,该制剂有明显改善血液流变学的作用,使血小板聚集作用、全血及血浆粘度、红细胞刚性指数均显著降低,有显著性差异(P<0.001)。

加强研究生的《分子生物学》课程建设

为使硕士研究生与博士研究生了解当今分子生物学进展 ,熟悉有关基础理论 ,并掌握必要的分子生物学实验技术 ,近年我校为《分子生物学》课程建设做了以下改进 :1更新教材 ,新编适用的《医学分子生物学》;2加强师资队伍建设 ,集校内在该领域掌握相关前沿知识并有实践经验的教授与青年骨干教师任课 ,并聘请校外专家学者作有关新进展讲座 ;3更新教学手段 ,应用多媒体教学软件等 ,以增大知识容量、提高教学质量 ;4更新教学内容 ,突出“新”与“实用”,包括以下三部分内容—分子生物学研究进展、分子生物学实验技术、分子生物学实验。力求在教短时间内拓宽研究生的知识面 ,启迪他们的思维 。

蚯蚓组织中抑制肿瘤细胞生长物质的分离提取及其作用机制初探

目的 探索一条从蚯蚓中分离有效抑癌成分的途径 ,并对其作用机制进行初探。方法 选取赤子爱胜蚓 (EiseniaFoeti da) ,采用硫酸铵分段盐析、DEAE纤维素 DE5 2离子交换柱层析、SephadexG10 0凝胶过滤柱层析等方法分离纯化。MTT方法测定各分离步骤所得样品对于肿瘤细胞的抑制作用。流式细胞术、共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡。结果 蚯蚓组织抽提液经分离纯化后 ,得一蛋白组分。它可有效抑制BEL 74 0 2细胞 (人原发性肝癌细胞系 )、HeLa细胞 (人宫颈癌细胞系 )的生长。凝胶过滤测其分子量为 4 2 .2kD ,SDS PAGE显示两条带 (分别为 33和 10kD)。细胞凋亡检测结果证实此组分有促肿瘤细胞凋亡的作用。结论 对蚯蚓组织进行分离提取 ,可得到抑制实体瘤细胞生长的活性组分。它可引起肿瘤细胞的凋亡 ,凋亡机制有待进一步探索。

蚯蚓组织成分对成纤维细胞增生作用的实验研究

通过蚯蚓组织成分对成纤维细胞增生作用的实验研究 ,探讨其对创伤愈合的作用机制。用醋酸盐缓冲液抽提蚯蚓组织成分 ,经硫酸铵分段盐析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析等方法 ,分离提取到 1组蛋白质成分。采用MTT法分析各分离组分对小鼠成纤维细胞增生作用的影响。结果 :经分离提取促增生组分位于SephadexG1 0 0层析第 1峰 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示此促增生组分为 3条区带 ,相对分子质量范围 5 70 0 0、72 0 0 0、870 0 0。

双胸蚓纤溶酶的纯化及性质

用硫酸铵分段盐析、超滤膜分级分离及DEAE-纤维素、Sephadex A-25和Sephadex G-50三种柱层析方法从双胸蚓组织的粗提取液中分离纯化出一种纤溶酶,分子量为29kD,由一条肽链组成。此晦具有强烈的溶解纤维蛋白的作用,对家兎实验性血凝块也具有明显的溶解作用。此酶的最适pH为8.0,在pH7.6～8.4之间活力相差不到2％;酶在PH4.7—11.0范围内稳定;酶作用的最适温度为57℃;此酶热稳定性较好,于25～50℃保温3小时,酶活力基本不变,60℃时,活力保留65％。金属离子Na^(+)、K^(+)、Mg^(2+)等可提高此酶的活力,而Hg^(2+)、Ca^(2+)等金属离子对此酶有不同程度的抑制作用。

地龙溶栓酶活血化瘀作用机制的研究

中医药学认为地龙味成性寒,有清热解毒活血化瘀等多方面的作用,为探索其作用机理,笔者从地龙组织中分离出一种对人工血栓具有强烈溶解作用的蛋白水解酶,命名为地龙溶栓酶。为进一步了解该酶活血化瘀的作用机制,本实验研究了地龙溶栓酶对组成凝血纤溶系统的某些重要蛋白因子的作用。

蚯蚓组织中具有纤溶活性抑瘤组分的提取及其作用机制研究

目的:从蚯蚓组织中分离提取抑制肿瘤的组分,并探讨其作用机制。方法:对蚯蚓组织提取液进行分段盐析、离子交换及凝胶过滤层析、电泳等,分离提纯了一种活性组分;以H3-TdR参入DNA及MTT法检测提取组分对多种瘤细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测提取物抑瘤作用机制。结果:含多种蛋白酶的蚯蚓提取液对正常成熟血细胞的生长无任何影响;对多种实体瘤细胞有不同程度的抑制作用;对髓系瘤细胞(K562和HL60)有促进增殖的作用。以上作用与提取物剂量在一定浓度范围内成正相关。进一步从中提纯出一种抑瘤蛋白质(相对分子质量为42.2×103),由大小二亚基组成,有较强纤溶活性,能促进瘤细胞凋亡。结论:蚯蚓组织含多种抑制瘤细胞生长的物质,从中提纯出一种相对分子质量为42.2×103的异二聚体蛋白质,有较强纤溶活性,通过促进瘤细胞凋亡抑制其生长。

地龙溶栓酶的纯化及其对凝血功能和纤溶活性的影响

为深入研究地龙活血化瘀的作用机制,利用从地龙组织中萃取的一种纤溶酶样物质即地龙溶栓酶进行了血液学方面的研究。结果表明,此酶对家兔实验性血栓、人全血凝块、多血小板血浆凝块以及人纯纤维蛋白凝块具有强烈的溶解作用,可使血浆的凝血酶原时间(PT)、白陶土部分凝血活酶时间(KPTT)以及凝血酶时间(TT)延长(P<0.01),使血浆纤维蛋白原(Fg)浓度降低(P<0.01),纤维蛋白(原)降解产物(FDP)增多(P<0.01),但优球溶解时间(ELT)无明显改变(P>0.05),可使正常人血浆纤溶动态图呈低平改变。说明地龙溶栓酶具有明显的抗凝促纤溶作用。

双胸蚓胶原酶的萃取、纯化、性质及化学组成的研究

从双胸蚓组织中分离出水解胶原的酶(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)。其中酶Ⅱ是一不具亚基结构的大分子糖蛋白,酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸,缺乏胱氨酸。最适pH6～7,最适温度35～45℃,80℃10分钟酶失活。Ca^(++)、Mg^(++)、Ba^(++)、Mn^(++)促进酶活性,Co^(++)、Hg^(++)、EDTA、巯基化合物及正常人血浆抑制酶活性。胶原酶解产物在PAGE图谱上表现为泳动较快的新带。

地龙提取物对实验性血栓的溶解作用及有效成分的研究

地龙组织水溶性提取物中含有能够溶解家兔实验性血栓和人全血凝块、多血小板血浆凝块及人纯纤维蛋白凝块的“纤溶酶样”物质(称地龙溶栓酶)。体外实验,地龙组织粗提取液的溶栓时间为5.55±0.08小时,蛋白提取液的溶栓时间为5.67±0.12小时。DEAE纤维素及Sephadex G-50柱层析分别显示5个蛋白峰和4个蛋白峰,各峰洗脱液的溶栓实验结果表明溶栓有效成分存在于DEAE纤维素柱层析的第5蛋白峰和Sephadex G-50拄层析的第2蛋白峰。Sephadex G-50柱层析第2蛋白峰洗脱液的聚丙烯酰胺凝胶电泳显示7条区带,其中有3条区带具有明显的溶栓作用。

地龙提取液外用治疗局限性硬皮病与实验研究

用地龙提取液外搽治疗局限性硬皮病6例,3个月后硬斑均明显软化,活动障碍感基本消失。地龙提取液经生化分析,除有纤溶、降低血液粘度等活血化淤作用外,还具特异降解胶原纤维的胶原酶。鉴于硬皮病最终的病变是胶原纤维硬化性改变,地龙提取液外用显效的主要原因,很可能是局部变性胶原纤维的降解。

一种从双胸蚓中提取胶原酶的方法

提取胶原酶的方法已有不少报道,多为从细菌培养液中提取,如 GK85103913提供的一种胶原酶制备工艺,将组织梭菌经改进的培养基、发酵液静止发酵得到低毒性的胶原酶,将发酵液经过无菌过滤,硫酸铵沉淀、脱盐、冻干获得胶原酶粗品,再经 DEAE 柱层析及 SephadexG-25脱盐,冻干可得精品。由于其萃取工艺复杂、成本高,又有受细菌感染的威胁,而限制了胶原酶的生产与应用。本技术是提供一种原材料易得,提取方法简单、成本低,又不受细菌感染威胁的提取胶原酶方法。为此,本技术利用双胸蚓为原料,先将双胸蚓冷冻制成匀浆,用水或 pH 值为5～8的缓冲液抽提。

蚯蚓组织中硫氧还蛋白还原酶抑制剂初探

目的研究蚯蚓组织成份对硫氧还蛋白系统的影响。方法乙酸盐缓冲液抽提蚯蚓组织成份 ,不同处理的蚯蚓提取液与硫氧还蛋白系统反应。在 340nm波长处 ,用NADPH作为被监测的反应底物来动态监测硫氧还蛋白还原酶 (TrxR)的催化活性。结果蚯蚓提取液与TrxR单独作用后 ,监测底物NADPH的吸光值几乎不发生变化。蚯蚓提取液的溶剂及煮沸后的上清液不具有以上作用。结论蚯蚓组织中含有能够抑制TrxR活性的物质 ,该物质的化学本质为蛋白质。

蚯蚓组织中促髓系细胞增殖组分的提取及其性质和作用

用硫酸铵分段盐析、DEAE纤维素-DE52离子交换柱层析、SephadexG100凝胶过滤柱层析等方法．从蚯蚓组织中提取有促髓系幼稚细胞增殖活性的蛋白质，提纯倍数达190倍。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测行5条区带；蛋白酶复印结果显示其中3条具有蛋白酶活性。该活性蛋白质有一定耐热性（55C，60min），促增殖活性强的部分其纤清活性也强。提示该活性蛋白属于蛋白酶，可能是细胞增殖信息传递链的组分或是使传递链组分活化的物质。