骨关节炎软骨下骨的成骨细胞生物学表型研究

目的培养骨关节炎患者软骨下骨成骨细胞,探讨硬化区和非硬化区软骨下骨成骨细胞的生物学特性。方法收集本科2009年10月至2010年3月拟行全膝关节置换入院的骨关节炎患者7例,男性5例,女性2例,平均年龄68(55～79)岁,留取术后遗弃的胫骨平台骨组织。应用Ⅰ型胶原酶消化联合贴壁培养方法,培养软骨下骨的成骨细胞,光镜下观察细胞形态,免疫组化检测Ⅰ型胶原,NBT/BCIP染色法检测碱性磷酸酶,茜素红染色检测矿化结节,油红O染色检测脂质成分。应用实时定量RT-PCR技术检测并比较硬化区和非硬化区软骨下骨成骨细胞相关基因[碱性磷酸酶(ALP),骨钙蛋白(OCN),转化生长因子β1(TGF-β1),胰岛素样生长因子1(IGF-1),Ⅰ型胶原(COL1)A1/(COL1)A2,基质金属蛋白酶13(MMP-13),骨桥蛋白(OPN),肿瘤坏死因子(TNF-α),白介素(IL)-6和IL-8]的表达。应用茜素红染色比较两种细胞矿化能力。结果光镜下观察到细胞渐从骨片中爬出的生长过程,免疫组化证实细胞表达Ⅰ型胶原,NBT/BCIP染色显示细胞表达碱性磷酸酶,茜素红染色显示细胞能形成矿化结节,油红O染色显示细胞内无脂质成分,证实Ⅰ型胶原酶消化联合贴壁培养方法能较好的培养出成骨细胞。茜素红染色显示软骨下骨硬化区成骨细胞矿化能力低于非硬化区[(0.92±0.06),(1.32±0.15),P<0.01]。RT-PCR显示,硬化区软骨下骨成骨细胞比非硬化区软骨下骨成骨细胞高表达基因OPN[(2.62±1.47)×10-2,(9.63±3.37)×10-4,P<0.05]、OCN[(6.04±6.27)×10-6,(4.84±2.18)×10-6,P<0.05]、ALP[(73.62±15.75)×10-4,(3.10±0.33)×10-4,P<0.01]、IGF-1[(14.84±1.23)×10-4,(6.33±2.80)×10-4,P<0.01]、IL-6[(8.24±1.05)×10-4,(2.64±0.37)×10-4,P<0.01]、IL-8[(14.68±6.97)×10-6,(2.60±0.89)×10-6,P<0.01]、MMP-13[(1.50±0.11)×10-3,(1.23±0.10)×10-3,P<0.05]、TGF-β1[(4.41±0.42)×10-3,(2.96±0.36)×10-3,P<0.01]、COL1A1[(55.44±21.61)×10-2,(9.17±3.30)×10-2,P<0.01];而TNF-α[(5.62±2.03)×10-6,(5.62±3.146)×10-6]和COL1A2[0.64±0.07,0.46±0.12]表达水平没有明显差异(P>0.05)。结论硬化区软骨下骨成骨细胞的生物学表型变化是骨关节炎患者病变的重要特征之一。

VEGF特异siRNA对骨肉瘤细胞凋亡和仿血管发生的影响

目的:探讨VEGF特异siRNA在骨肉瘤细胞株(MG63)增殖、凋亡以及仿血管发生中的作用。方法:以pSilienc-er载体构建VEGF特异siRNA质粒pSilencer-VEGF siRNA,并转染骨肉瘤细胞MG63;将细胞分为pSilencer-VEGF siRNA质粒组(试验组)和空siRNA质粒组(对照组),Western blotting在蛋白水平检测转染重组质粒后MG63细胞VEGF表达情况;MTT比色法、光镜、流式细胞仪结合Annexin V-FITC/PI染色和H-E染色观察质粒转染后骨肉瘤细胞增殖、凋亡和仿血管发生情况。结果:测序证实成功构建了针对VEGF的siRNA重组质粒。转染pSilencer-VEGF siRNA重组质粒后的试验组培养液中及骨肉瘤细胞内VEGF蛋白表达下降;转染后48、72、96h骨肉瘤细胞的增殖抑制率分别为41.67%、43.92%、35.32%,并发生了早期凋亡,凋亡率为28.27%。转染pSilencer-VEGF siRNA重组质粒的骨肉瘤细胞未见仿血管发生,转染空质粒的对照组骨肉瘤细胞则有仿血管发生。结论:RNA干扰VEGF基因能抑制骨肉瘤细胞增殖,促进骨肉瘤细胞早期凋亡,干扰骨肉瘤细胞仿血管发生,为临床基因治疗骨肉瘤提供了新的思路。

股骨头内螺旋刀片与拉力螺钉的特点对比和生物力学的研究进展

在股骨粗隆间骨折的内固定治疗中，获得头颈部骨块的稳定性有着非常重要的作用。目前临床上打入股骨头内并固定头颈骨块的内置物，以单枚粗大的内固定物使用较广泛，主要为传统的拉力螺钉（lag screw）和新近的螺旋刀片（helical blade）两种。两种内固定物的结构与设计各具特色，是临床应用的基础。本文从两者的发展、结构特点、操作步骤、力学分析等方面进行比较，围绕两种内植物的结构特点和生物力学的研究进展进行了综述，以期为临床研究和应用提供基础。

人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞的共培养

背景:软骨细胞移植等组织工程方法已经成为非常有潜力的骨关节炎治疗措施,软骨下骨的成骨细胞对软骨细胞的作用不仅参与骨关节炎的发生和发展,而且与细胞移植治疗预后有着密切的关系。目的:培养人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞,构建两者共培养的细胞培养模型,探讨软骨下骨成骨细胞对软骨细胞的作用。方法:收集骨关节炎患者行全膝关节置换和严重创伤患者行截肢后遗弃的胫骨平台组织,采用Ⅰ型胶原酶连续消化后进行贴壁培养的方法,培养软骨下骨的成骨细胞,应用Ⅱ型胶原酶消化方法,培养软骨细胞,然后应用多孔插入器细胞培养池构建成骨细胞和软骨细胞三维共培养模型。结果与结论:通过免疫组化,NBT/BCIP染色,茜素红染色等检查,证实成功培养出成骨细胞和软骨细胞。实时定量RT-PCR显示,在与骨关节炎的软骨下骨成骨细胞共培养的软骨细胞中,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达明显下降。可见骨关节炎患者的成骨细胞能促进软骨细胞的退变。

骨化三醇联合降钙素治疗对膝骨性关节炎的临床疗效

目的探讨骨化三醇联合降钙素治疗对有骨质疏松的老年绝经后女性膝骨性关节炎的治疗疗效。方法门诊选取绝经后具有骨质疏松的老年女性患者125例,所有的患者均具有膝痛和膝部骨性关节炎,应用Kellgren-Lawrence影像系统评分分级,骨关节炎分类为I～III级。对这些患者应用肌肉注射降钙素联合口服骨化三醇,并针对患者的关节疼痛予以口服塞来昔布,治疗后3个月、6个月、12个月通过西安大略和麦马斯特大学骨性关节炎指标(WOMAC),简明健康调查量表(SF-36)评分系统评估,以及可视化量表(Visual Analog Scale,VAS)评分系统对患者治疗前后的疗效进行分析。结果治疗后患者WOMAC疼痛指标和功能障碍的指标均明显下降,而且随观察时间延长,呈逐渐下降趋势,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后3个月、6个月、12个月VAS评分疼痛指标逐渐下降,塞来昔布用量逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后12个月的SF-36量表的各维度得分均有明显提高(P<0.01),患者没有明显的不良反应。骨化三醇联合降钙素治疗能有效缓解骨关节炎患者的疼痛,改善患者关节功能,减少塞来昔布的用量。结论降钙素和骨化三醇的联合治疗不仅对骨质疏松有治疗作用,对骨性关节炎也有重要的治疗作用。

p53基因与骨肉瘤治疗及其预后的相关性(英文)

骨肉瘤的发生是多基因、多步骤、多阶段、多重损伤并存的过程,众多情况下认为是由于细胞核DNA分子受破坏,细胞不能修复受损的DNA分子,其继续存在并复制可激活癌基因和(或)抑癌基因异常,发展成为骨肉瘤。在细胞抑癌基因中p53基因研究最广泛,50%人类肿瘤与p53基因突变有关。动物试验证实:存在p53基因突变的转基因鼠中除了淋巴瘤和肺腺癌外,骨肉瘤的发生率最高。p53基因的突变和失活影响着骨肉瘤的发生、发展、预后。随着少数p53基因治疗进入临床实验阶段,目前p53的基因治疗研究也出现了一些新的策略。随着分子生物学手段的不断发展和完善,基因治疗的安全性和有效性的提高,p53基因治疗将在骨肉瘤的治疗中体现出不可估量的作用。

软骨下骨与骨性关节炎病变的发生发展:从基础研究到临床治疗

骨性关节炎(OA)是软骨与骨的退行性变过程。软骨下骨是构成关节结构和功能的基本单位之一,维持软骨正常结构和功能。在复杂应力和生物学作用下,OA软骨下骨的重塑和结构改变使软骨承受更高的应力。软骨下骨内血管生成和结构病变扩大了骨软骨异常交流途径,软骨下骨产生的代谢调节因子通过异常生物学交流直接促进软骨退变。研究软骨下骨内细胞及其变化,血管生成与骨软骨间生物学交流,揭示软骨下骨重塑和结构变化特点,探寻改善骨重塑治疗方法,将有利于延缓OA病变进展,有效防治OA。

骨免疫学研究进展

骨重塑主要通过成骨细胞和破骨细胞之间相互作用而进行,其中RANKL-RANK-OPG系统在骨吸收和骨形成的耦联中起着关键作用。巨噬细胞集落刺激因子与其受体结合对破骨细胞发展是必须的。近年发现,成骨细胞还可与破骨细胞直接通过ephrin-Eph途径双向促进骨形成。免疫细胞和骨细胞共同起源于骨髓,从起始、成熟到活化,存在着相互影响。免疫细胞和骨细胞间通过许多细胞因子及其受体相互作用,调节骨代谢平衡,存在共同的骨代谢转录因子和信号转导途径。脂肪因子作为骨骼、免疫、脂肪系统的共同交叉机制,通过影响免疫细胞、成骨细胞或破骨细胞,进一步影响骨重塑方向。越来越多研究证实,骨免疫参予许多骨科疾病的发生与发展,揭示免疫系统对骨代谢的重要调节作用,有助于有效地预防和治疗骨科相关疾病。

骨肉瘤细胞血管自成相关基因表达

目的探讨骨肉瘤肿瘤细胞自身血管形成基因表达,为靶向骨肉瘤肿瘤血管治疗提供研究基础。方法利用RT-PCR技术对骨肉瘤肿瘤细胞(MG63、U2OS)血管形成相关基因进行检测,并同内皮细胞(ECV304)相比较。结果骨肉瘤肿瘤细胞和内皮细胞相类似,自身在mRNA水平均能表达VEGF和其受体KDR,受体Tie-2,以及EPHA2,Thrombin,VE-Cadherin等血管形成相关基因。结论骨肉瘤肿瘤细胞表达成血管细胞表型,具有类胚胎表型的逆转,这可能是骨肉瘤富含血供基础,在肿瘤的靶向治疗中,具有进一步的研究前景。

软骨下骨成骨细胞在骨性关节炎中的作用与机制

骨性关节炎是一种骨组织代谢疾病,软骨下骨成骨细胞直接参与骨性关节炎的病理过程。成骨细胞表达异常的生物学表型与软骨下骨结构和功能改变密切相关,其可使软骨承受更高的应力;软骨下骨成骨细胞产生的代谢调节因子通过骨和软骨间微结构直接促进软骨细胞退变。免疫和脂类代谢通过成骨细胞调节骨组织代谢,参与骨性关节炎病变过程。进一步阐明软骨下骨成骨细胞在骨性关节炎病变过程中的作用和机制,可为骨性关节炎研究和治疗提供新方法和思路。

RNAi抑制骨肉瘤细胞KDR蛋白表达的研究

目的研究siRNA表达载体对骨肉瘤MG63细胞KDR蛋白表达的抑制作用。方法构建pSuper质粒,化学合成2段编码发卡RNA序列、靶向KDR基因的寡核苷酸,克隆进pSuper的pol IIIH I启动子的下游,重组构建抑制KDR表达的siRNA质粒,并转染入骨肉瘤MG63细胞,W estern b lot检测转染后KDR基因在蛋白水平表达的变化。结果酶切后电泳鉴定正确的重组质粒小量扩增后测序,证实成功构建了KDR siRNA表达质粒,转染入细胞后,有效抑制了KDR基因在蛋白水平的表达。结论成功构建的siRNA表达载体有效抑制了骨肉瘤MG63细胞KDR蛋白的表达,为进一步分析骨肉瘤中KDR基因的功能及肿瘤治疗奠定了研究基础。

Gamma钉治疗左侧股骨粗隆间骨折导致头颈骨块旋转

目的 探讨顺时针拧入Gamma-3的拉力螺钉时,是否造成头颈骨块的旋转而加大骨块间分离.方法 回顾性分析2013年1月-12月收治的左侧股骨粗隆间骨折32例,均接受闭合复位Gamma-3内固定治疗.在患肢中立位侧位片上,测量头颈骨块轴线与股骨干轴线的成角,比较该角度在闭合复位后、拧入拉力螺钉后及出院前的变化.结果 在术中拧入头颈部拉力螺钉后,头颈骨块发生顺时针旋转分离的有9例,下方皮质向前上翘起.骨折分型OTA31 A2.3,均为不稳定型顺向粗隆间骨折.头颈骨块轴线和股骨干轴线的夹角,骨折闭合复位后为16.78°±4.55°,拧入拉力螺钉后为27.78°±6.0°,回拧后为17.67°±4.30°,出院时为17.89°±3.89°.经统计学分析,拧入拉力螺钉能显著加大头颈骨块的顺时针旋转（P＜0.05）,反向回拧后分离角度显著减少（P＜0.05）.结论 拉力螺钉在拧入头颈骨块时有造成其顺时针旋转的倾向,对左侧粗隆间骨折能加大头颈骨块的旋转分离.

血管内皮生长因子与骨肉瘤的研究进展

血管内皮生长因子在骨肉瘤血管生长中起着关键的调节作用,并参与骨肉瘤细胞凋亡,与肿瘤的免疫和耐药有关。在治疗中,不应忽视其在骨肉瘤的发生、发展、浸润及转移中的重要作用。

水稻新品种连粳7号高产栽培技术探讨

对中熟中粳水稻新品种连粳7号进行不同播期、不同密度、不同施氮量的栽培技术试验。结果表明,连粳7号具有产量高、品质优、抗病性强等特性,在江苏淮北稻区产量在10 500 kg/hm2以上,播期范围为5月5—10日,栽插密度控制在30万～37.5万穴/hm2之间,适宜氮肥用量为纯氮337.5 kg/hm2左右。

急性重症胰腺炎继发感染的大黄复方免疫疗法的临床试验研究

目的 :初步探讨大黄复方综合免疫疗法对ANP继发感染的治疗作用。方法 :肠道菌群检测和免疫组化 ,放射免疫分析法研究了ANP模型肠道菌群变化和肠道局部免疫的变化 ,在此基础上进一步对严格按标准选入的SAP病人 ,采用中药大黄复方及微生态制剂综合疗法分别在临床表现 ,生化及血清内毒素 ,肠道局部免疫与细菌易位等方面进行对比研究。结果 :ANP肠道膜菌群生物屏障受到破坏 ,G-肠杆菌是急性重症胰腺炎内源性感染的主要原因菌。综合免疫疗法治疗后 1周及 2周的生化指标及血清内毒素水平降低均优于常规组。结论 :初步表明综合疗法能减轻或消除ANP继发感染临床表现 ,缩短感染持续时间。

经后外侧入路支持钢板固定治疗后踝骨折

2012年1月~2013年5月,我科应用桡骨远端T形钢板经后外侧入路固定后踝、结合内外踝切开复位内固定治疗15例三踝骨折患者,疗效满意,现报道如下。1材料与方法1.1病例资料本组15例,男10例,女5例,年龄32~65（47.6±7.1）岁。

精确施肥对水稻增产的效应分析

为了探讨精确施肥的增产效应,通过采用大田试验,以中熟中粳‘徐稻3号’为材料,设置精确施氮高产处理、常规施氮对照处理和无氮空白处理,研究精确施肥对水稻产量及其构成因素的影响以及水稻主要生育指标的影响。结果表明,精确施氮高产处理产量高达11365.05 kg/hm2,较常规施氮对照处理和无氮空白处理分别增产7.10%和60.09%;精确施氮提高每穗粒数和千粒重,而穗数和结实率略有下降;精确施肥水稻主要生育指标得到明显改善,成穗率较常规施肥对照处理增加2.41%。精确施肥不仅能节省氮肥和改善生态环境,还是水稻生产实现丰产高效可持续发展的重要技术措施,应用前景广阔。

口服氨基葡萄糖联合关节腔内注射治疗膝骨性关节炎

目的探讨口服氨基葡萄糖联合关节腔内注射治疗膝骨性关节炎的疗效。方法门诊选取膝骨性关节炎患者402例,将患者按第1次关节腔内注射药物的不同分为透明质酸钠关节腔内注射组(214例)和三联针(透明质酸钠、醋酸曲安奈德、盐酸利多卡因)关节腔内注射组(188例),并在治疗后1、2、3、5周对患者按预先设定的疗效评价标准进行随访。结果治疗后两组患者西安大略麦马斯特大学骨性关节炎指标可视化量表(WOMAC)疼痛指标和机体功能指标均明显下降,而且随观察时间延长,呈逐渐下降趋势,组间比较差异无统计学意义(P>0.05),但治疗后第1周随访,三联针关节腔内注射组疼痛指标下降趋势更明显,两组治疗期间塞来昔布用量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的不良反应发生率分别为8.9%(19/214)和8.5%(16/188),主要表现为轻中度的胃肠道不适和便秘。结论口服氨基葡萄糖联合关节腔内注射在短期内能有效减轻膝骨性关节炎患者疼痛,改善关节功能,第1次关节腔内注射三联针能更快、更有效地缓解疼痛,减少了塞来昔布的用量。