金黄色葡萄球菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系的构建

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白。方法利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细胞内表达金葡菌分泌蛋白的RAW264.7巨噬细胞阵列。金葡菌感染RAW264.7后,清除胞外菌,观察金葡菌胞内生存情况。最后通过构建相应分泌蛋白的过表达及敲除金葡菌验证筛选结果。结果通过探索RAW264.7质粒转染剂量、金葡菌感染复数(multiplicity of infection,MOI)以及感染时间,确立筛选体系的最优质粒转染剂量为1.0μg/孔、MOI为1.0、感染时间为4 h。筛选结果结合相应分泌蛋白过表达和敲除菌株验证,成功筛选出hypothetical protein、Serine protease E等分泌蛋白具有促进胞内金葡菌生存功能。结论成功构建金葡菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系。

印苦楝内酯靶向RNF114治疗金黄色葡萄球菌急性肺炎

目的探究印苦楝内酯(nimbolide,NIM)治疗金黄色葡萄球菌急性肺炎作用机制。方法通过气管插管构建小鼠金葡菌急性肺炎模型,NIM治疗后,观察小鼠生存率差异,平板培养分析肺部荷菌量变化,ELISA检测肺组织炎性细胞因子表达差异;ELISA及Western Blot检测腹腔原代巨噬细胞感染金葡菌后,NIM对炎症细胞因子的表达水平及炎症通路激活的影响;慢病毒shRNA敲低原代腹腔巨噬细胞RNF114蛋白水平,通过ELISA及Western Blot探究NIM是否通过RNF114抑制炎症反应。结果金葡菌感染小鼠肺部后可导致急性死亡,NIM显著提高了小鼠生存率,下调小鼠肺部炎症细胞因子水平,但短期内不影响金葡菌肺部定植;巨噬细胞感染结果表明,NIM可能通过调控RNF114功能,下调ERK的磷酸化水平抑制MAPK通路激活,进而抑制炎症细胞因子的表达。结论NIM可能通过调控巨噬细胞RNF114功能,抑制MAPK通路激活进而抑制小鼠肺部炎症细胞因子的表达,最终抑制金葡菌急性肺部高炎症导致的小鼠死亡。

元胡止痛片有效成分作用机制和药代动力学研究进展

检索近年来的相关文献,对元胡止痛片有效成分的作用机制、药代动力学研究现状进行综述,以期为元胡止痛片的进一步研究奠定基础。

癌症预防 环境因素不可小视

随着对癌症的不断探索,目前科学家们已认识到癌症预防刻不容缓。2009年10月28日《临床医师肿瘤杂志》(CA Cancer J Clin)上刊载了一篇关于癌症预防的综述,题为"美国癌症协会对癌症与环境因素的观点"。我们研读该论文后,深感受益匪浅,并以Letter形式向文章作者补充提出黄曲霉毒素这一致癌因素。该Letter于2010年3月8日发表在《CA Cancer J Clin》的评论中。

国家虚拟仿真实验教学课程共享平台用于“生物技术制药”课程实验教学实践

目的提升“生物技术制药”课程的实验教学效果。方法以中国人民解放军陆军军医大学2020级药学专业四年制本科生为授课对象,随机分为线上线下混合组(观察组)和线下组(对照组)。以生物技术制药经典实验为例,对照组采用传统方式教学;观察组由教师通过国家虚拟仿真实验教学课程共享平台中浙江中医药大学相应内容虚拟实验课程,进行虚拟仿真实验教学辅助传统线下教学。比较两组的学习效果。结果观察组学生均认为线上学习方式降低了自身学习难度,提高了兴趣,增强了掌握实验技能的自信。每个实验的观察组学生教学当天即可完成教学过程,短于对照组实验使用时间。观察组学生实验课平均得分为(93.78±1.41)分,明显高于对照组的(75.94±0.00)分(P<0.05)。结论虚拟仿真实验教学作为“生物技术制药”课程课堂教学辅助手段,可有效解决传统实验课程面临的学时有限、操作机会有限、教学效果欠佳的难题,助力生物技术制药专业人才实际操作技能的培养。

产教融合思政案例库教学在“生物技术制药”课程体系中的实践探索

专业课程实施课程思政,对学生的职业政治觉悟及岗位服务意识有直接影响,生物技术制药作为应用性课程,产教融合是其理想的实施模式.目前产教融合与课程思政如何有机结合,是生物技术制药课程亟须解决的问题.本文在充分挖掘真实疫苗产业案例、典型研发方案的基础上,融入课程实践,并突出中国特色,强化课程思政效果,构建了产教融合的思政案例库.产教融合思政案例库教学在“生物技术制药”课程实践中培养了学生的自主创新意识,显著提升了本学科教育水平.

不同产地蟾皮药材的HPLC指纹图谱研究

目的:对10批不同来源的蟾皮药材进行比较分析,建立蟾皮药材的指纹图谱,为其质量控制和药材鉴别提供依据。方法:采用高效液相色谱法进行检测,通过计算机辅助相似性评价系统对HPLC指纹图谱进行处理和分析,结合相似度计算对药材进行比较。结果:①建立了蟾皮药材HPLC指纹图谱共有模式,确定了29个峰构成蟾皮药材的指纹特征,其中9个吸收峰与已知9种蟾毒配基类标准品相对应;②10个不同来源的蟾皮药材相对保留时间相似度较高,均在0.99以上,但其相对峰面积相似度较低。结论:①该方法准确可靠、重复性好,其指纹图谱可用于蟾皮的鉴别和质量控制;②不同产地蟾皮药材在主要成分的构成上基本稳定,但各成分的含量却不尽相同。

优质教育的核心要素与追求

基于国家人才培养战略和学生终身利益关怀的《中国学生发展核心素养》的出台，进一步优化了人才培养的目标，引导并促进教育向“育人”的本质回归。在学生发展“核心素养”和“以人为本”的语境下，学生成长过程中的获得感与幸福感，必然成为教育质量追求与评价的重要内容。

金黄色葡萄球菌分泌蛋白LukG抑制巨噬细胞炎症反应

目的利用同源重组法构建金黄色葡萄球菌LukG(leukotoxin G)基因敲除株,探究LukG缺失对金黄色葡萄球菌刺激巨噬细胞炎症反应的影响。方法用双荧光素酶报告基因检测LukG蛋白对NF-κB通路的作用;利用USA300野生株和LukG敲除株(ΔLukG/USA300)感染小鼠原代腹腔巨噬细胞,实时荧光定量PCR法检测TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA转录水平,Western blot检测IκB-α及p-p65表达水平;利用USA300和ΔLukG/USA300气管插管感染小鼠肺部,观察生存率差异,稀释涂板法测定肺部荷菌量,HE染色法观察肺组织病理学变化,ELISA法检测肺组织匀浆炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达量。结果分泌蛋白LukG能够明显抑制NF-κB通路的激活;感染原代腹腔巨噬细胞后;相对于USA300感染组,ΔLukG/USA300感染组TNF-α、IL-6和IL-1β的转录水平升高(P<0.05),IκB-α表达下调,p-p65表达上调;气管插管感染小鼠后,相对于USA300感染组,ΔLukG/USA300感染组生存率提高(P<0.05),肺组织荷菌量降低(P<0.05),病变程度减轻,炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达量升高(P<0.05)。结论金黄色葡萄球菌可能通过分泌LukG蛋白抑制巨噬细胞NF-κB通路进而下调炎性细胞因子的表达,达成免疫逃逸进而成功感染宿主。

欧前胡素在大鼠体内的药动学与组织分布研究

目的:建立欧前胡素在生物样品中的分析测定方法,并进行欧前胡素在大鼠体内药动学和组织分布研究。方法:采用液-液萃取方法进行生物样品预处理;采用高效液相色谱法测定大鼠灌胃欧前胡素后不同时间的血药浓度。色谱柱为HypersilBDSC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(60:40,V/V),流速为1.0ml/min,柱温为25℃,内标为异欧前胡素,检测波长为300nm。以DAS2.0版药动学程序软件计算药动学参数,并进行组织分布研究。结果:血浆和组织样品中欧前胡素和异欧前胡素峰面积比值与欧前胡素血药浓度在一定范围内线性关系良好(r≥0.9984);样品加样回收率均在87.69%以上,日内、日间精密度的RSD为0.58%～6.15%和0.53%～8.00%,稳定性的RSD为0.56%～6.99%。大鼠口服欧前胡素后体内代谢符合二室模型(W=1),tmax=2.5h,cmax=(1.45±0.49)mg/L,AUC0-∞=(7.03±2.27)mg(/h.L);并在组织中广泛分布。结论:本方法简便、快捷、灵敏、准确,适用于欧前胡素的药动学和组织分布研究。

元胡止痛方的研究进展

目的归纳总结经典二味药材成方的元胡止痛方研究进展。方法在笔者团队科研工作的基础上检索分析相关文献。结果通过分析药代动力学、药效学、药理学研究发现延胡索乙素和欧前胡素是元胡止痛方的体内外高含量成分,二者合用具有协同作用且该作用与母方功效一致。结论延胡索乙素和欧前胡素极可能是元胡止痛方的主要功效成分。