CDC28蛋白激酶调节亚基2对卵巢癌A2780细胞丝足形成的影响及其机制研究

目的探讨CDC28蛋白激酶调节亚基2(CKS2)对A2780细胞丝足形成的影响及其可能机制。方法采用慢病毒介导的sh RNA敲除A2780细胞的CKS2基因,显微镜下观察细胞丝足的变化;采用细胞划痕实验检测A2780细胞迁移能力的变化;采用real time PCR检测CKS2敲除对CDC42两种剪接变异体(CDC42-V1和CDC42-V2)表达的影响,以及不同卵巢癌标本中CKS2、CDC42-V1和CDC42-V2剪接变异体的表达情况。结果 CKS2表达抑制后,A2780细胞丝足明显减少,细胞迁移能力明显减弱(P<0.05),CDC42-V1 m RNA表达降低,而CDC42-V2 m RNA表达升高(P<0.05)。Real time PCR结果显示,卵巢癌组织标本中CKS2及CDC42-V1的表达高于对应的正常卵巢组织,而CDC42-V2的表达低于对应的正常卵巢组织(P<0.05)。结论 CKS2通过调控CDC42的选择性剪接而影响细胞丝足的形成,进而影响卵巢癌细胞A2780的迁移能力。

心系百姓 民生为本

2016年5月19日,沈阳市大东区信访行风办接到来自沈河区东顺城街122号居民的上访诉求信件,反映沈河区东顺城街122号楼前存在污水横流的现象。在接到诉求件之后,行风办立即开展调查。经查,东顺城街122号楼产权归属大东区房产局第三房管所管辖。信访办与三所取得了联系,并进行了实地勘查。

18q11.2杂合微缺失(含GATA6基因缺失)1例并文献复习

目的分析1例罕见的18q11.2杂合微缺失(含GATA 6缺失)患儿的临床资料及其基因检测情况,以提高对18q11.2缺失综合征的认识。方法对2018年5月我院儿科收治的1例18q11.2杂合微缺失患儿的临床资料及基因检测结果总结分析,并对相关文献资料进行复习。结果患儿,男,12岁2月龄,因“生长落后伴血糖升高4年”就诊。出生体质量2500 g;2月龄时诊断为“法洛四联症”,并先后于2岁及5岁时行姑息性手术、根治术;6岁时诊断为“甲状腺功能减低症”;8岁时诊断为“糖尿病”。身高131.3 cm(-2.78 SDS),体质量29000 g(低于第3百分位),BMI 16.8 kg/m^2;心前区可闻及Ⅱ~Ⅲ级收缩期杂音;双睾约1 mL,阴毛、腋毛未见。骨龄(BA)10岁,胰岛素样生长因子1(64.40μg/L)低于正常,垂体内分泌功能检测提示部分性生长激素缺乏(GH峰值5.88μg/L);空腹血糖、糖化血红蛋白正常,C肽(0.42μg/L)低于正常,抗胰岛素自身抗体、抗谷氨酸脱羧酶抗体阴性。全外显子基因组测序发现患儿chr18:19746826-21390514区域存在杂合缺失,患儿父母该区域均未见缺失。缺失区域共存在13个OMIM基因:LAMA 3、GATA 6-AS 1、LOC 101927571、RBBP 8、CABLES 1、TMEM 241、RIOK 3、C 18 orf 8、NPC 1、ANKRD 29、GATA 6、MIR 4741、CTAGE 1。结论本文首次报道了18q11.2的chr18:19746826-21390514区域杂合微缺失的病例,通过相关文献的复习,推测患儿大部分临床表型(法洛四联症、甲状腺功能减低症、糖尿病等)主要与GATA 6杂合缺失相关。

McCune-Albright综合征患儿临床特征分析

目的总结分析26例儿童McCune-Albright综合征(MAS)的临床特征,以期提高对MAS诊疗的认识,实现早期临床诊断。方法回顾性分析2011年8月至2021年6月在华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科就诊的26例MAS患儿的临床资料,总结分析其临床特点。采用t检验、Mann-Whitney U检验、χ^(2)检验或Fisher′s确切概率法进行组间比较。结果1.共纳入MAS患儿26例(女22例、男4例),女性平均起病年龄为(5.87±2.94)岁,男性平均起病年龄为(7.48±3.36)岁。2.女性患儿中,典型三联征7例,非典型三联征15例。3.首发症状:女性患儿阴道出血8例、乳房早发育14例;4例男性患儿,1例因"骨折"就诊,3例因"身高落后于同龄人"就诊。4.与乳腺发育组比,阴道出血组患儿起病年龄早[(4.06±1.88)岁比(7.82±1.82)岁](t=5.023,P<0.001)、骨龄超前明显[(1.26±0.07)比(1.09±0.13)](t=2.933,P<0.05)、预期终身高受损严重[(-2.16±0.98)SDS比(-0.96±1.09)SDS](t=1.352,P<0.05)、血磷水平低[(1.41±0.14)nmol/L比(1.67±0.24)nmol/L](t=1.941,P<0.05)、碱性磷酸酶水平高[339(313,656)U/L比243(205,452)U/L](U=1.000,P<0.05)。阴道出血组8例患儿均存在骨纤维发育不良。5.10例患儿转为中枢性性早熟(CPP),转为CPP组与未转为CPP组相比,起病年龄晚[(7.27±2.69)岁比(4.69±2.68)岁](U=44.000,P<0.05)、确诊时骨龄超前明显[(1.23±0.11)比(1.01±0.13)](t=1.834,P<0.05)、预期终身高低[(152.00±4.62)cm比(162.10±6.91)cm](t=3.805,P<0.05)。6.11例患儿出现骨纤维发育不良,多数(8例)为多骨纤维结构不良,好发部位为下肢骨、颅骨。7.20例患儿出现皮肤牛奶咖啡斑,散在分布,其中35%(7/20)的患儿皮肤牛奶咖啡斑越过中线。结论MAS临床表现复杂,女童发病常见且较男童早,男性患儿起病隐匿,症状不典型,临床诊断相对困难。以阴道出血为首发症状的MAS患儿通常起病年龄早,骨龄超前明显,预期终身高较低,临床需注意监测和评估。在MAS患儿中,阴道出血与多发性骨纤维发育不良存在明显相关性,故针对阴道出血患儿建议常规行骨骼单光子发射计算机断层显像扫描,以了解隐匿性骨纤维结构不良的情况。对就诊晚、骨龄超前严重的患儿应警惕进展为CPP的可能。

沉默ESRP1基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中FGFR2亚型转化的影响

目的 :研究沉默上皮剪接调节蛋白(1epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中成纤维细胞生长因子受体2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)亚型转换的影响。方法:构建靶向ESRP1基因的ESRP1-sh RNA慢病毒表达载体(p LVTHM/ESRP1-sh RNA1和p LVTHM/ESRP1-sh RNA2),同时设置阴性对照(negative control,NC)质粒(p LVTHM/NC-sh RNA);将3种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染卵巢癌OVCAR5细胞后,分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测ESRP1 m RNA及蛋白的表达水平;采用限制性内切酶AvaⅠ和Hin CⅡ检测沉默ESRP1基因后对FGFR2亚型转换的影响;MTT法检测沉默ESRP1基因后对OVCAR5细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)及β-链蛋白(β-catenin)表达的变化。结果:成功构建靶向ESRP1基因的sh RNA慢病毒表达载体并包装获得慢病毒;与阴性对照组比较,靶向ESRP1基因的sh RNA能明显抑制OVCAR5细胞中ESRP1 m RNA及蛋白的表达(P值均<0.05);沉默ESRP1基因的表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2由上皮亚型(FGFR2b)向间质亚型(FGFR2c)的转换,并促进OVCAR5细胞的增殖(P<0.05);同时,下调E-cadherin的表达水平而上调N-cadherin的表达水平,并激活β-catenin(P值均<0.05)。结论:沉默ESRP1基因表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2亚型的转换,促进OVCAR5细胞增殖,并诱导OVCAR5细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),该过程可能涉及Wnt/β-catenin信号通路。