CD3ζ链引入YRHQ基序可增强靶向HER2的CAR-T细胞的抗肿瘤活性

目的:探讨在靶向HER2的CAR的CD3ζ链胞内区引入YRHQ基序对CAR-T细胞的特异性杀伤活性及免疫记忆形成的影响。方法:通过DNA合成获得包含靶向HER2的编码抗原受体H28ζ或H28ζ(YRHQ)的DNA片段,通过慢病毒载体将不同CAR的DNA片段分别转导健康人外周血T细胞,制备靶向HER2的H28ζ-CAR-T及H28ζ(YRHQ)-CAR-T细胞。扩增过程中对不同CAR-T细胞进行计数,FCM检测CAR的表达率。将CAR-T细胞分别与HER2阳性的SKOV3、MDA-MB-453或HER2阴性的MCF-7细胞共培养,LDH释放法检测其杀伤活性,ELISA法检测IL-2、IFN-γ和颗粒酶B的水平,WB法检测STAT3磷酸化水平及免疫检查点分子TIM-3和PD-1的表达,通过FCM检测CCR7、CD45RO的表达,分析CAR-T细胞的表型。结果:H28ζ-CAR-T和H28ζ(YRHQ)-CAR-T细胞扩增能力较好,体外培养7 d时扩增4~5倍。H28ζ-CAR和H28ζ(YRHQ)-CAR表达率分别为(33.3±2.85)%和(28.30±3.2)%。H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞的杀伤活性较H28ζ-CAR-T细胞更高(P<0.05)。经HER2抗原刺激后,与T细胞或H28z-CAR-T细胞比较,H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞的STAT3磷酸化水平较H28ξ-CAR-T细胞明显升高(P<0.01);而两者间PD-1和TIM-3的表达无明显差异。未经抗原刺激的CAR-T细胞CCR7和CD45RO表达与正常T细胞比较差异无统计学意义(均P>0.05),与SKOV3细胞共培养后,与T细胞或H28z-CAR-T细胞比较,H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞中T_(EM)细胞比例明显增加、T_(CM)细胞比例明显减少(均P<0.05)。结论:在CD3胞内区引入YRHQ基序可在一定程度上提高CAR-T细胞的杀伤潜力。

利用贝叶斯网络提高港口国检查效率

提高港口国监控(PSC)的检查效率,本文研究了船舶固有属性(船舶年龄、船旗、船级社、船舶尺度)、港口国检查缺陷项与船舶事故间的影响关系。本文所使用的数据主要来自于英国劳氏船级社(LR)、国际海事组织(IMO)和东京谅解备忘录(Tokyo MOU)三个数据库,共5478条干散货船数据。利用贝叶斯网络(BN)构建模型,并分别采用Bayesian Network (BN)和Greedy thick thinning(GTT)算法构建网络模型。同时利用K-折交叉验证、对数似然函数(LL)、赤池信息量准则(AIC)和贝叶斯信息准则(BIC)对模型进行评估。结果表明船舶的固有属性和关键检查缺陷项对船舶事故均有较高的直接影响,而大多数的港口国监控检查缺陷之间具有相互影响,并且通过关键检查缺陷项对船舶事故产生间接影响。因此可以利用关键检查缺陷项优化港口国检验制度,提高检验效率。