大鼠局灶性脑缺血模型的定量分析

目的 :采用大脑中动脉阻塞 (MCAO)诱导大鼠局灶性脑缺血模型的方法 ,用计算机辅助技术定量分析脑损伤变化及药物保护作用。方法 :以不同 MCAO时间诱导脑缺血并再灌注 2 4 h后 ,观察神经功能缺失症状 ,并以计算机图像分析技术测定脑梗死体积、脑半球面积、皮层及纹状体神经元密度及白蛋白渗出 ;在缺血前后腹腔注射地塞米松 0 .1mg/ kg或尼莫地平 0 .4 mg/ kg,观察药物的保护作用。结果 :缺血 30 min和再灌注 2 4 h可发生神经功能缺失症状、梗死灶形成、缺血侧脑半球面积增加 11.4 %、神经元密度减少 36 .2 %、白蛋白渗出明显增加。地塞米松和尼莫地平可改善神经功能缺失症状 ,显著减小梗死体积 ,抑制缺血侧脑半球面积增加、神经元死亡和白蛋白渗出。结论 :缺血 30 min和再灌注 2 4 h是诱导局灶性脑缺血的合适条件 ,计算机辅助技术客观定量综合评价脑缺血损伤及药物作用是可行的方法。

速激肽NK-1受体拮抗剂SR-140333对抗原引起致敏大鼠气道高反应性的影响

为观察速激肽ＮＫ１受体拮抗剂ＳＲ１４０３３３对抗原攻击引起的致敏大鼠气道高反应性的影响，测定了致敏大鼠在抗原攻击前后的基础呼吸频率，对ＭＣｈ的反应性及支气管肺泡灌洗液中的白细胞数量。实验结果显示，致敏大鼠吸入ＯＡ后６ｈ基础呼吸频率增加，并显著增加乙酰甲胆碱（ＭＣｈ）的反应性、ＭＣｈ的－ｌｏｇＰＣ３０值和支气管肺泡灌洗液中的白细胞数量。ｉｐ速激肽ＮＫ１受体拮抗剂ＳＲ１４０３３３（０１ｍｇ·ｋｇ－１）或地塞米松（０５ｍｇ·ｋｇ－１），可明显抑制上述反应，小剂量ＳＲ１４０３３３（００１ｍｇ·ｋｇ－１）仅有部分抑制作用。结果提示抗原攻击可引起致敏大鼠气道高反应性和气道炎症。

速激肽受体拮抗剂抗豚鼠过敏性哮喘的作用

实验目的是研究速激肽与哮喘的关系，评价速激肽受体拮抗剂对哮喘的治疗作用。结果表明，ｉｐ速激肽ＮＫ１受体拮抗剂ＣＰ９６３４５，ＮＫ２受体拮抗剂ＳＲ４８９６８或两药合用，均可有效减少清醒致敏豚鼠吸入抗原引起的喘息反应，降低过敏性休克死亡率。ＳＲ４８９６８减轻麻醉豚鼠抗原引起的气道收缩，并浓度依赖性降低抗原引起的气管和支气管平滑肌收缩幅度。ＣＰ９６３４５可抑制抗原诱导的支气管和肺叶伊文思蓝渗出，仅对支气管平滑肌收缩有部分抑制作用。结果提示，速激肽参与哮喘发病，速激肽受体拮抗剂可抑制抗原诱导的气道平滑肌收缩（ＮＫ２受体）和微血管渗漏（ＮＫ１受体）而减轻哮喘反应。

清醒无拘束豚鼠气道反应性特点

作者通过对清醒无拘束豚鼠对组胺、乙酰胆碱和抗原气道反应性的研究，发现有以下特点：呼吸变化在24h连续可测；吸入组胺（His）和乙酰胆碱（ACh）后的引喘作用有浓度依赖性，半数有效引喘浓度（EC50）分别为53．3μmol／m3和269μmol／m3；对His的反应有昼夜节律性；致敏豚鼠吸入抗原可以诱发哮喘反应，在30min内最明显，吸抗原后6h对ACh的反应性增强。

白三烯拮抗剂ONO-1078对小鼠局灶性脑缺血的保护作用

AIM To determine whether ONO 1078 {pranlukast, 4 oxo 8 [p (4 phenylbutyloxy) benzoyl amino] 2 (tetrazol 5 yl) 4H 1 benzopyran hemihydrate}, a potent leukotriene antagonist, has protective effect on focal cerebral ischemia in mice. METHODS Focal cerebral ischemia was induced by permanent middle cerebral artery (MCA) occlusion in mice. ONO 1078 (0 01, 0 05, 0 10 mg·kg -1 ), dexamethasone (0 5 mg·kg -1 ), nimodipine (0 2 mg·kg -1 ) or saline (control) were injected ip once daily for 3 days, and 30 min before MCA occlusion. Twenty four hours after cerebral ischemia, the neurological scores were evaluated, infarct volumes and areas of the right and left cerebral hemispheres were measured by computer imaging analysis. RESULTS ONO 1078, dexamethasone and nimodipine reduced the neurological scores. ONO 1078 and dexamethasone reduced the ratio of right/left hemisphere area, indicating inhibition of brain edema, while nimodipine showed no effect. ONO 1078 dose dependently reduced infarct size, and dexamethasone and nimodipine showed the same effect. CONCLUSION ONO 1078 showed protective effect on focal cerebral ischemia. This may represent a novel approach to the treatment of acute cerebral ischemia.

黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用

目的:观察黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用。方法:以大脑中动脉阻塞(MCAO)15min诱导小鼠短暂性局灶性脑缺血。从术前7d开始,用药组灌服黄连解毒汤2g/kg和4g/kg,实验对照组和假手术组灌服生理盐水,均连续给药21d,一日一次。缺血后35d(5周)内进行神经症状评分、斜板试验,并记录小鼠的最终生存率。实验结束后,测定脑损伤体积和神经元数量。结果:黄连解毒汤4g/kg能显著提高小鼠MCAO术后35d的最终生存率,2g/kg和4g/kg均明显改善术后的神经症状,降低脑梗死体积、减轻脑萎缩。黄连解毒汤4g/kg可明显增加缺血侧海马CA1区、纹状体和皮层的神经元密度,2g/kg明显增加缺血侧海马CA1区的神经元密度。结论:黄连解毒汤对小鼠局灶性脑缺血慢性神经损伤有保护作用,能提高小鼠的最终生存率并促进神经功能的恢复。

一种测定小鼠长时间自发活动时空特点的新方法

目的 :应用计算机视频跟踪技术 ,建立一种测定小鼠长时间开场自发活动的新方法。方法 :应用连续记录 2 2 h内小鼠在开场的自发活动 ,并用我们研制的 Analy Power1.1系统分析活动轨迹 ;以自发活动总路程、各区域活动路程及其占总路程的比例、各区域停留时间及其占总时间比例等指标 ,评价小鼠自发活动的特点。结果 :小鼠在清醒自由状态下 ,2 2 h内的活动表现显著的区域、时间依赖性特点。停留及活动主要集中在生活区 (食物和饮水区 ) ,其次周边区 ,中央区很少。小鼠在进入开场的第 1h内有明显频繁的活动 ,1h后活动明显减少。在活动趋于稳定后 ,小鼠表现出较明显的昼夜活动特点 ,夜间活动增加。结论 :本研究建立的方法 ,可客观、定量、连续测定小鼠自发活动时间、空间规律。

一种定量评价离体海马脑片缺糖/缺氧损伤的新方法

目的 :建立一种定量评价离体脑片缺糖 /缺氧损伤的简便、快速、灵敏的方法。方法 :离体海马脑片缺糖 /缺氧不同时间后以 2 % 2 ,3,5 -三苯基氯化四氮唑 (TTC)染色 ,用乙醇∶二甲亚砜 (5 0∶ 5 0 )抽提 TTC红色结晶产物 ,分光光度法测定 OD490 值 ,并与 LDH释放率进行比较。结果 :随着缺糖 /缺氧时间的延长 ,TTC染色 (OD490 值 )逐渐下降 ,而 LDH释放率逐渐上升 ,两结果呈负相关 (r=- 0 .933,P<0 .0 1) ,提示脑片缺血性损伤。尼莫地平、地塞米松和氯胺酮可减轻脑片缺血性损伤 ,但 ONO- 10 78无效。结论 :TTC染色法简单易行 ,且客观灵敏 ,可用于离体脑片损伤的评价及药物初筛。

二氢青蒿素抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖和诱导凋亡

目的:研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响。方法:在培养的C6细胞,加入DHA1～125μmol/L作用24、48、72h。以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst33342染色,观察细胞凋亡;以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化。结果:DHA5～125μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48h后的IC50是23.4μmol/L;5～25μmol/L能诱导细胞凋亡(P<0.05);5～125μmol/L DHA可增高细胞内的ROS(P<0.01)。结论:DHA能够抑制C6细胞增殖,并诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关。

半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代皮质神经元的作用

目的：观察受体激动剂LTD4对大鼠原代皮质神经元的作用，以及不同拮抗剂对LTD。及缺血性损伤的影响。方法：在大鼠原代培养皮质神经元，以细胞内钙检测、噻唑蓝（MTT）还原反应、碘化吡啶（PI）和Hoechst-33258染色观察神经元损伤；以缺氧缺糖（oxygen—glucose deprivation，OGD）1．5h和再灌24h诱导神经元损伤。结果：LTD4（0．01～1μmol／L）不能诱导神经元内钙升高，对神经元活性也没有明显的影响。OGD1．5h，再灌24h，可显著降低神经元活性；CysLT1受体拮抗剂普鲁司特（0．2～10μmol／L）和孟鲁司特（0．2～10μmol／L）以及CysLT1／CysLT2受体非选择性拮抗剂BAYu9773（0．02～1μmol／L），对OGD损伤无明显保护作用。结论：半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代神经元及缺血性损伤无明显作用。

半胱氨酰白三烯受体与脑损伤关系的研究进展

近年来发现,半胱氨酰白三烯CysLT1和CysLT2受体参与整体水平脑缺血和脑外伤后神经损伤。CysLT1受体调节脑缺血后血脑屏障通透性增高、血管性脑水肿,介导星形胶质细胞增殖及炎症反应;CysLT2受体调节脑缺血后AQP4表达增加、细胞性脑水肿,介导星形胶质细胞损伤;新发现的GPR 17也与脑缺血损伤有密切关系。加深CysLT受体在脑损伤及神经保护中作用的认识,将为CysLT受体作为药物靶点筛选和开发防治脑损伤的药物提供新的途径。

水通道蛋白AQP4基因缺失加重NMDA诱导的小鼠脑损伤

目的:评价水通道蛋白AQP4在兴奋性氨基酸NMDA诱导脑损伤中起的作用。方法:在AQP4基因敲除小鼠,皮层注射NMDA 150 nmol诱导损伤。甲苯胺蓝染色评价损伤面积,Fluro-Jade B染色评价变性神经元,免疫组化法评价血脑屏障通透性增高。结果:与野生型小鼠比较,AQP4基因缺失加重NMDA诱导的皮层损伤,增加损伤区变性神经元密度,加重血脑屏障通透性的增高。结论:AQP4在NMDA诱导的脑损伤中可能起保护作用。

西洛他唑对脑缺血后神经元损伤的保护作用

目的:观察西洛他唑对小鼠持续性局灶性脑缺血后神经元损伤的剂量依赖性保护作用。方法:以大脑中动脉阻塞诱导小鼠持续性局灶性脑缺血。缺血前30min腹腔注射西洛他唑(3～30mg/kg)和普鲁司特(0.1mg/kg)。观察药物对缺血后神经元形态、密度的影响。结果:脑缺血损伤后,神经元密度降低,变性神经元密度增加。西洛他唑(3～10mg/kg)和普鲁司特能明显增加缺血侧存活神经元密度,减少变性神经元密度。结论:西洛他唑对小鼠持续性局灶性脑缺血后神经元损伤有保护作用。

鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体1表达变化

目的:制备和鉴定半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)抗体,以此观察鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞损伤过程中CysLT1受体表达变化。方法:以KLH偶联的CysLT1受体多肽(小鼠)免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性。用新制备的抗体以Western blotting检测鱼藤酮(0.01～1μmol/L,作用24 h)损伤BV2细胞过程中,BV2细胞上CysLT1受体的表达变化,并以RT-PCR检测验证CysLT1受体mRNA表达水平,同时以免疫组化观察CysLT1受体的亚细胞分布变化。结果:ELISA测定显示,制备的兔抗小鼠CysLT1受体抗体的效价大于1/32728,对CysLT1受体的特异性强,对CysLT2受体和GPR17基本无交叉反应。Western blotting和RT-PCR显示,鱼藤酮作用BV2细胞24 h剂量依赖性诱导CysLT1受体mRNA及蛋白水平表达升高;免疫组化显示在鱼藤酮诱导BV2细胞损伤过程中,随鱼藤酮剂量增加,CysLT1受体发生核移位。结论:制备的CysLT1受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blotting和免疫组化检测的要求;CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的BV2细胞损伤。

半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂普鲁司特调节SK-N-SH细胞分化

目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响。方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-SH细胞CysLT1和CysLT2受体的表达;用免疫荧光法观察神经元分化标记物微管相关蛋白(MAP-2)的表达。结果:免疫印迹显示,SK-N-SH表达CysLT1受体和CysLT2受体,CysLT2受体表达较多。形态学结果显示,维A酸、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞发生形态学改变,表现为胞体变小,有明显的突起生长;而LTD4无明显作用。免疫荧光结果显示,在对照组和普鲁司特组MAP-2主要分布于胞体;在维甲酸组MAP-2除了分布于胞体外,还分布于突起。普鲁司特增加MAP-2阳性细胞数。结论:CysLT1受体拮抗剂普鲁司特参与SK-N-SH细胞分化的调节。

5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位

目的:通过绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)/5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)稳定转染PC12细胞,以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法:将带有5-LOX基因的pEGFP-C2质粒及pEGFP-C2质粒(对照),稳定转染至PC12细胞;在缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)、H2O2和NMDA处理后,荧光显微镜下观察GFP/5-LOX在细胞内的定位;同时,以免疫细胞化学方法观察野生型5-LOX分布及其变化。结果:转染GFP/5-LOX的细胞内,GFP/5-LOX主要均匀表达于细胞核内;仅转染GFP的细胞GFP表达于胞核和胞浆。OGD和H2O2处理后,分别有50.6%和57.7%细胞的GFP/5-LOX移位到核膜;NMDA处理或仅转染GFP的细胞,未见核膜移位现象。野生型5-LOX分布在细胞核和细胞浆内,3种损伤处理均诱导核膜移位。结论:稳定转染GFP/5-LOX的PC12细胞,GFP/5-LOX主要分布在细胞核;不同损伤处理诱导的5-LOX核膜移位,有不同的特点。

咖啡酸对氧化应激诱导的PC12细胞5-脂氧酶激活的抑制作用

目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶（5-LOX）激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白（GFP）-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复（OGD/R）及过氧化氢（H2O2）160μmol.L-1处理后的变化。MTT法和碘化丙啶染色法分析细胞存活率和死亡率;荧光显微镜观察OGD 2 h/R2 h和H2O2处理40 min时5-LOX的核膜移位;ELISA法测定OGD 2 h/R 3 h时5-LOX代谢产物的生成;DCF法检测OGD 2 h/R 0.5 h细胞内活性氧（ROS）的产生。结果 OGD 2 h/R 24 h GFP-5-LOX转染和GFP-转染PC12细胞的存活率分别为（63.1±6.6）%和（70.7±6.9）%;H2O2处理24 h细胞存活率分别为（62.5±7.7）%和（75.7±9.5）%。在GFP-5-LOX转染的PC12细胞中,咖啡酸和对照药MK886可使OGD/R细胞存活率从（63.1±6.6）%分别增加到（87.3±2.0）%和（89.9±6.3）%,细胞坏死率从（31.4±1.5）%降低到（10.1±2.0）%和（11.7±1.3）%（P〈0.01）;使H2O2处理细胞存活率从（62.51±7.65）%增加到（92.59±4.02）%和（75.31±6.60）%;使OGD/R细胞CysLTs的生成从261.1±33.7降低到108.5±16.7和（90.6±19.5）ng.g-1蛋白（P〈0.01）。此外,咖啡酸抑制OGD/R诱导PC12细胞的ROS产生,IC50值为8.021μmol.L-1;抑制OGD/R诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.974μmol.L-1;抑制H2O2诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.501μmol.L-1;MK886无上述作用。结论咖啡酸可抑制氧化应激诱导的PC12细胞5-LOX激活,对缺血损伤的PC12细胞具有保护作用。

物体材质与检测间隔时间对小鼠新物体识别实验结果的影响

目的：研究不同实验条件下,新物体识别实验（NOR实验）在ICR小鼠学习记忆能力评价中的应用效果.方法：将130只ICR雄性小鼠随机分为10组：4组用于不同间隔时间（10 min、90 min、4h、24 h）的测试,4组用于不同物体材质（木质-木质、塑胶-塑胶、塑胶-木质、木质-塑胶）的测试,2组用于重复测试（隔1d或3d测1次,共测3次）.视频跟踪记录小鼠在开场内的活动轨迹,分析其探索新旧物体的时间,计算小鼠对新物体的分辨比（DR）和分辨指数（DI）,评价各组小鼠的学习记忆情况.结果：检测间隔时间为10 min和90 min组的小鼠对新物体的DR和DI较旧物体显著加大（均P＜0.01）;新旧物体不同材质对小鼠探究物体的时间、DR和DI影响较大,选择同一材质物体可使小鼠对新物体保持较为稳定的DR和DI;NOR实验可在同一批小鼠中重复测试,小鼠可持续保持对新物体的探究兴趣.结论：进行NOR实验时,选择较短的检测间隔时间和选用相同材质的物体可较好地评价小鼠学习记忆能力.NOR实验可重复测试.

大鼠哮喘模型中气道炎症的定量研究

作者建立了一种SD大鼠的过敏性哮喘炎症模型的定量分析方法，用卵白蛋白（OA）低剂量多点皮下注射法致敏SD大鼠，2周后气雾吸入1％OA15min，吸入后6h和24h可见支气管-肺泡灌洗液中的白细胞计数显著增加，其中嗜酸性粒细胞增加较明显；肺切片显示细支气管和小血管周围水肿、大量嗜酸性粒细胞渗出浸润；计算机图象分析表明，细支气管管壁面积及管壁单位面积内嗜酸性粒细胞数增加显著。结果表明，抗原可诱导SD大鼠气道过敏性炎症，可以作为研究过敏性支气管哮喘的动物模型。