GⅡ.17型诺如病毒人源中和性单链抗体制备及生物特性鉴定

目的:基于一起暴发疫情,构建人源噬菌体单链抗体库,筛选特异性GⅡ.17型诺如病毒(NoV)单链抗体(scFv),并进行表达纯化及鉴定。方法:采集患者粪便或肛拭子样本,RT-PCR检测肠道病毒核酸,PCR扩增NoV衣壳蛋白N/S区和P区序列,Mega 4.0构建系统进化树。采集并分离患者恢复期外周血PBMC,Trizol提取总RNA;RT-PCR扩增抗体重轻链可变区基因,重叠扩增PCR将两者拼接为scFv基因,将其克隆至噬菌粒载体pCANTAB-5E构建人源噬菌体单链抗体库。以GⅡ.17 P颗粒为固相抗原,对抗体库进行筛选及鉴定,将阳性克隆进行原核表达及纯化,ELISA鉴定其生物特性。结果:此次疫情中,83.3%(15/18)粪便或肛拭子样本呈GⅡ型NoV核酸阳性,经序列比对分析确定由GⅡ.17型感染导致;成功构建人源噬菌体单链抗体库,以GⅡ.17 P颗粒为抗原筛选得到11株序列不同且正确的阳性克隆;经原核表达获得9株与GⅡ.17 P颗粒具有良好亲和力的高纯度scFv,且与GⅡ.4和GI.3 P颗粒均有较好的特异性交叉反应,其中7株具有较强阻断GⅡ.17 P颗粒与HBGA受体结合的能力。结论:此次疫情为一次GⅡ.17型NoV引发的急性胃肠炎暴发,构建了人源噬菌体抗体库,经淘筛及表达纯化,最终获得9株GⅡ.17型NoV单链抗体,其中7株具有较强的中和能力。