人APL细胞株NB4不同二维电泳条件对电泳结果的影响

本研究探讨不同二维电泳条件对人急性早幼粒细胞性白血病 (APL)细胞株NB4二维电泳结果的影响。选用 2 4cm ,pH3- 10L的固定 pH梯度 (immobilizedpHgradient,IPG)胶条 ,用IPGphor进行第一相等电聚焦 ,然后用EttanDaltII垂直电泳系统进行第二相SDS PAGE ,银染后用ImageMaster 2DElite软件进行分析。结果表明 :采用低离子强度的缓冲液冲洗收集样品可以提高等电聚焦效果。裂解液中 7mol/L尿素、4 0mmol/LDTT能溶解NB4细胞大部分蛋白质 ,而水化液中硫脲与尿素合用可以明显增加碱性端中低分子量区可分辨的蛋白质点。NB4细胞用 2 4cm ,pH3- 10L的IPG胶条进行二维电泳时 ,10 0 μg左右的上样量、6 32 0 0V小时左右的等电聚焦时间是恰当的。结论 :APL细胞的蛋白质种类繁多 ,受多种因素影响 ,正确选择样品制备方法和二维电泳条件十分重要。

β-AP脑损伤老化鼠认知能力和脑组化改变研究

目的 用 β-淀粉样肽 (β- AP)损伤鼠脑胆碱能神经元 ,了解 β- AP对动物认知能力和神经元的损害及 NO在其中的作用。方法 将 β-AP2 5- 3 5定位注射至老化 1 8月龄大鼠脑右侧 Meynert核 ,观察损伤动物学习能力改变 (Y型迷宫法 )。分光光度法检测脑胆碱酯酶 (Ach E)活性 ,并用免疫组化染色法观察鼠脑一氧化氮合酶 (NOS)及凋亡相关蛋白 Bax、Bcl- 2的表达情况。结果 与对照组比较 ,脑损伤老化鼠表现学习能力及脑胆碱酯酶活性显著降低 (均 P<0 .0 1 ) ;NOS2 和 Bax在额叶皮层和海马的表达均升高 ,而 Bcl- 2表达则显著减少 (P均 <0 .0 1 )。结论 β- AP2 5- 3 5定位损伤脑Meynert核老化大鼠显示胆碱能系统损伤 ,学习能力障碍 ,NOS2 和 Bax表达增加而 Bcl- 2表达降低 ,提示损伤脑有 NO过量生成并诱导发生神经元凋亡损伤。这与 AD病人某些临床和病理特征基本一致。

差异表达蛋白质组学中的常用技术

人类基因组计划基本完成后,人们又开始对生物所有蛋白质性质和功能进行大规模研究,即蛋白质组学。尤其是由于差异表达蛋白质组学在制药和疾病研究中的巨大潜力,更是倍受重视。蛋白质组学的极端复杂性决定了它所应用的技术更加复杂和综合,本文简要介绍了在差异表达蛋白质组学中的常用技术。

胆碱能系损伤老化鼠的脑神经肽表达与学习能力改变

目的 探讨兴奋性神经毒素定位损伤脑胆碱能神经元的老化大鼠行为及脑组化改变 ,及在 AD发病中兴奋性毒素脑损伤的机制。方法 分别用兴奋性毒素鹅膏蕈氨酸 (IBA)、N-甲基 - D-天冬氨酸 (NMDA)定位损伤老化大鼠脑右侧 Meynert核。用 Y型迷宫法和分光光度法检测损伤大鼠学习能力和脑胆碱酯酶 (Ach E)活性改变 ,并用免疫组化染色法测定损伤动物脑神经肽 :β-淀粉样肽前体 (β- APP)、生长抑素 (SOM)及 P物质(SP)的表达。结果 脑损伤大鼠与对照组比较 ,表现学习能力及脑胆碱酯酶活性显著降低 (均 P<0 .0 5) ;鼠脑额叶皮层和海马区显示β- APP的表达明显升高 ;而生长抑素阳性神经元数量则显著减少。用 IBA及 β- AP2 5- 3 5同时或 NMDA损伤鼠脑时 ,可显示脑皮质区 P物质过表达 (均 P<0 .0 1 ) ;用IBA单独注射时 ,SP表达无显著改变。结论 以 IBA、NMDA定位损伤老化大鼠脑 Meynert核后 ,显示鼠脑胆碱能系统损伤 ,学习能力障碍 ,β- APP、P物质表达明显增多 ,可能与脑中 β- AP的沉积有关。神经肽 SOM表达降低可能致动物学习能力下降。该 AD模型动物表现 AD类似临床和病理特征。

应用IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF鉴定蛋白质泛素化修饰

近年来,在蛋白质研究中,特别是在蛋白质翻译后修饰(PTM)的研究中,生物质谱技术的应用越来越广泛,与纳升级HPLC的联合应用,使这一技术手段更加有效.针对泛素化在细胞功能调控中发挥关键作用的PTM的特点,将免疫沉淀、2Dnano-HPLC和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF)有机整合,建立了天然状态下蛋白质泛素化位点的鉴定方法,并应用这一方法确定出K562细胞内具有酪氨酸激酶活性的蛋白c-ABL的泛素化位点.为定性鉴定生理和病理状态下内源性蛋白的泛素化修饰提供了借鉴.

结膜松弛症泪液蛋白质肽质量指纹谱分析

目的分析结膜松弛症泪液蛋白表达谱的变化。方法收集22例结膜松弛症患者和13例正常对照组的泪液样本,毛细管从每眼收集15μL泪液,采用ZipTip C18柱浓缩和纯化泪液样本,利用基质辅助的激光解吸质谱进行线性模式和肽质量指纹谱(PMF)检测,并对PMF图谱数据进行多变量数据统计分析,比较结膜松弛症组和正常对照组的泪液PMF的差异。结果2组泪液的质谱检测峰在数量上差异无统计学意义(P>0.05),主成分分析结合偏最小二乘法分析显示结膜松弛症组泪液蛋白质表达与正常对照组比较有差异,结膜松弛症组泪液蛋白质表现为"离群"样本,且离群分散度较大的样本为结膜松弛症Ⅳ级的患者。结论应用ZipTipC18柱分离联合基质辅助的激光解吸质谱技术可有效筛查泪液蛋白质。对PMF图谱进行多变量数据统计分析,可以观察到结膜松弛症组与正常对照组泪液蛋白质存在差异,并可为结膜松弛症临床诊断、疾病发生发展的机理及治疗提供参考。

同位素标签技术在人肾小管上皮细胞蛋白质组学研究中的应用

目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴定,研究iTRAQ在HK-2细胞的标记情况和蛋白质组学。结果通过质谱检测,检测到带有iTRAQ标记肽段。随机选取20个前体离子,通过3次重复试验,鉴定出iTRAQ标记多肽肽段分别为17、15和18个,标记效率在75.5%～90.0%,且组间标记效率差异无统计学意义(P>0.05)。结论iTRAQ可以在HK-2细胞中标记效果满意,且重复性较好,为进一步研究肾脏疾病的蛋白质组学奠定了基础。

IBA损伤老化鼠脑Meynert核的AD模型动物研究

目的 :研究定位损伤脑胆碱能系Alzheimer病 (AD)模型大鼠学习能力及相关脑神经肽免疫组化改变。方法 :用兴奋性毒素鹅膏蕈氨酸 (IBA)定位损伤大鼠脑右侧Meynert核 ,观察模型动物学习能力改变 (Y型迷宫法 ) ,并用分光光度法和免疫组化染色法观察动物脑胆碱酯酶 (AchE)活性和皮层及海马 β 淀粉样肽前体 (β APP)、生长抑素 (SOM )及P物质 (SP)的表达情况。 结果 :模型组老化大鼠经损伤后 ,学习能力及脑AchE活性显著低于对照组 (P均 <0 .0 5 )。β APP在额叶皮层和海马的表达均升高 ,而SOM表达则显著减少 ,用IBA及β AP2 5- 3 5同时损伤鼠脑时 ,可显示脑皮质区SP表达增加 (P均 <0 .0 1) ,单独用IBA注射无效。结论 :IBA损伤老化大鼠脑Meynert核建立的动物模型 ,显示胆碱能系统损伤 ,学习能力障碍 ,β APP过表达而神经肽SOM表达降低 ,一定条件下SP表达增加 ,与AD病人某些临床和病理特征基本一致。

基因和蛋白质的批量注释系统UBROAD

以DNA微阵列、二维电泳、二维高压液相色谱和质谱等技术为代表的转录组和蛋白质组高通量实验技术,能够产生海量的基因或蛋白质数据,对这些基因或蛋白质的注释是对相关数据进行后期处理的基础和必要条件.海量数据的注释人工难以完成,而目前基因和蛋白质的批量注释网站给出的注释又往往不够全面.在比较常用基因和蛋白质的批量注释网站的基础上,本工作研发了基因和蛋白质的批量注释系统UBROAD(Unified Batch Retriever ofAnnotation Data),该系统整合了NCBI、Swiss-Prot、BIND、enzyme-expasy、gene2accession和gene2Unigene 6个有关基因和蛋白质的数据源;支持Uniprot/trEMBL AC、Uniprot Entryname、Genbank Protein Accession Number、Genbank mRNA gi、Genbank mRNA Accession Number、Gene name、Gene ID和Unigene ID 8种登录号混合查询;含有各种登录号以及基因或蛋白质的基本信息、功能分类、相互作用共38项注释项供选择;提供微软电子表格形式的注释结果.可以通过访问网页http://www.bioscience.org.cn/ubroad免费使用该系统.

糖皮质激素联合特布他林治疗慢阻肺急性加重期的临床效果评价

目的:探析糖皮质激素联合特布他林治疗慢阻肺急性加重期的临床效果。方法:研究对象选取本院2012年8月至2015年9月收治的76例慢阻肺急性加重期患者,随机方法分组。参照组患者治疗药物选取特布他林,治疗组患者治疗药物选取特布他林+糖皮质激素。比较治疗效果、治疗前后血气分析结果的差异性。结果:治疗后所有患者FEV1、FVC、FEV1/FVC均有所改善,其中治疗组患者改善幅度明显大于参照组,P<0.05。治疗组患者总有效率明显高于参照组,P<0.05。结论:糖皮质激素联合特布他林治疗慢阻肺急性加重期的临床效果确切,可有效改善患者症状,对其预后有益,值得推广。

Meynert核损伤老化鼠脑组化改变及神经元凋亡机制研究

目的 用兴奋性神经毒素N -甲基 -D -天冬氨酸 (NMDA)损伤大鼠脑胆碱能神经元 ,研究NMDA损伤对认知能力和神经元凋亡的影响及NO在其中的作用。方法 用NMDA定位注射损伤老化大鼠脑右侧Meynert核。测定损伤动物学习能力改变 (Y型迷宫法 ) ,检测脑胆碱酯酶活性 (分光光度法 ) ,并用免疫组化染色法观察动物脑皮层及海马一氧化氮合酶 (NOS)及凋亡相关蛋白Bax、Bcl- 2表达阳性神经元的变化情况。结果 与对照组比较 ,经NMDA损伤后老化大鼠显示学习能力及脑胆碱酯酶活性显著降低。 (P <0 0 1)NOS和Bax在额叶皮层和海马的表达阳性神经元数量均显著升高 ,而Bcl- 2阳性神经元数量则显著减少。 (P <0 0 1)。结论 兴奋性毒素NMDA定位损伤脑Meynert核后 ,老化大鼠显示胆碱能系统损伤 ,学习能力障碍。损伤脑NOS酶表达增加 ,提示有NO过量生成。Bax过表达而Bcl- 2表达降低 ,显示脑中诱导发生神经元凋亡。

磷酸化蛋白质组学揭示小热休克蛋白27是胶质细胞源性神经营养因子引起神经突触生长的新信号分子

胶质细胞源性神经营养因子（GNDF）是胶质细胞分泌的一种神经营养刚子，是胶质细胞对神经元发挥保护作用最主要的途径。GNDF对多巴胺能神经元的保护及促生长作用明显，是神经保护治疗帕金森病（PD）首选神经营养因子。而对GDNF信号转导的机制尚不清楚，因此，我们用蛋白质组学的方法寻找参与GDNF信号转导通路的可能信号分子。

人肾小管上皮细胞蛋白质组的双向电泳及计算机图像分析

目的 双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2DGE)技术是蛋白质组研究中最为重要的蛋白质分离方法。建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术。方法 由于不同的细胞系特殊性,样品处理亦不同,因此以人肾小管上皮细胞HK-2为研究对象,对样品液组成、样品处理、上样方式、上样量、IPG胶条和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法等相关技术进行了研究和条件优化后,以固相pH梯度等电聚焦为第一向和SDS均一胶(T=12.5％)的水平电泳为第二向,研究人肾小管上皮细胞蛋白质组。结果 成功地得到了人肾小管上皮细胞双向电泳图谱,并通过ImageMaster 2D Elite 3.01软件进行图像分析,输出初步的检测结果。结论 建立蛋白质组研究的技术平台,为从更高的水平来寻找肾脏疾病的功能蛋白和特异性蛋白,阐明肾脏疾病发生发展的网络机制等后续研究工作奠定基础。

西洛他唑对糖尿病大鼠黏附分子的影响

目的 探讨西洛他唑对糖尿病 (DM)大鼠黏附分子CD54、CD10 6、CD62p的表达和坐骨神经传导速度及对肾脏以及主动脉病变的影响。方法 实验设正常组 8只大鼠 ,糖尿病组 8只大鼠 ,胰岛素组 7只大鼠和西洛他唑组 7只大鼠。测定各组坐骨神经传导速度 ,单个核细胞表面CD54、血小板表面CD62p以及肾脏、主动脉CD54或CD10 6的表达水平。结果 西洛他唑明显加快坐骨神经传导速度 (DM组 2 0 3m·s-1± 2 2m·s-1,西洛他唑组 2 8 9m·s-1± 7 9m·s-1,P <0 0 5 )。降低单个核细胞表面CD54的表达 (DM =6 5 1%± 14 9% ,西洛他唑组 2 5 4 %± 8 6 % ,P <0 0 5 ) ,减少肾脏和主动脉CD54和CD10 6表达 ,改善肾脏和主动脉病理变化。而降低血小板表面CD62p的作用不明显 (DM组 4 0 4 %±8 7% ,西洛他唑组 2 8 5 %± 3 7% ,P >0 0 5 )。结论 西洛他唑能降低CD54、CD10 6的表达 。

Alzheimer病模型大鼠脑生长抑素表达与学习能力改变

目的:研究损伤脑胆碱能系ＡＤ模型大鼠学习能力及相关脑组化改变。方法:鹅膏蕈氨酸(ＩＢＡ)定位损伤大鼠脑建立ＡＤ模型,分光光度法、免疫组化法测定其脑胆碱酯酶(ＡＣｈＥ)活性及生长抑素(ＳＯＭ)表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠显示学习能力明显下降(Ｐ＜０．０５),鼠脑ＡＣｈＥ活性显著降低(Ｐ＜０．０１);额叶皮质和海马区ＳＯＭ表达显著减少(Ｐ＜０．０１)。结论:模型鼠学习功能下降可能与中枢胆碱能系毁损导致的ＡＣｈＥ活性下降和ＳＯＭ表达减少有关。

慢性肾脏病5期患者的肠道菌群变化

目的通过16S rDNA测序技术探究慢性肾脏病5期(CKD5)患者与健康人体内肠道菌群构成的差异。方法研究入组健康对照组69例、慢性肾脏病5期非透析(CKD5-NHD)组24例、慢性肾脏病5期透析(CKD5-HD)组29例。通过16s rDNA测序技术研究CDK5组(CKD5-NHD组和CKD5-HD组)与健康对照组肠道菌群构成的差异,以LDA>2.0表示两组间生物群落存在显著差异。基于测序结果,应用宏基因组数据统计分析(STAMP)软件映射到京都基因与基因组百科全书(KEGG)和蛋白质直系同源簇(COG)数据库,研究CKD5患者肠道微生物群可能具有的功能。结果健康对照组中,拟杆菌门(Bacteroidetes)、γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)等占优势;在CKD-HD组中,肠球菌科(Enterococcaceae)、真细菌属(Eubacterium)、红杆菌科(Rhodobacteraceae)等丰度较高;而在CKD-NHD组中,放线菌门(Actinobacteria)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、红蝽菌目(Coriobacteriales)等为主要优势菌群。通过肠道微生物群功能预测发现,CKD5患者肠道失调的微生物群在脂质代谢、碳水化合物代谢、蛋白质及氨基酸代谢方面有着更活跃的表现。结论与健康人相比,CKD5患者肠道菌群发生显著变化。CKD5患者的紊乱肠道菌群能够影响机体物质代谢,并通过影响机体多种代谢及信号传导通路增加罹患并发症风险。

促排卵治疗后暴发1型糖尿病一例

患者女,44岁,因“口渴多饮多尿乏力11天”入院。患者因不孕于2013年10月开始采用克罗米芬-人绒毛膜促性腺激素促排卵治疗,12月16日完成第3周期治疗。治疗期间雌二醇水平多次大于1200 pg/ ml,最高2161.2 pg/ ml。12月19日出现口渴多饮多尿乏力,后出现腹痛,伴恶心呕吐,神志恍惚。当地医院测血糖32 mmol/ L,尿酮体15 mmol/ L, C 肽0.01 ng/ L,餐后2 h C 肽0.02 ng/ L,HbA1C 6.5%,胰淀粉酶358.3 U/ L、脂肪酶＆gt;300 U/ L,血 pH 7.27,诊为糖尿病酮症酸中毒,急性胰腺炎,给予胰岛素降糖、补液、纠酮,血淀粉酶迅速下降至正常,第二天腹痛缓解。10天后改为三餐前门冬胰岛素12 U,早晚地特胰岛素15 U 皮下注射；第11天患者血糖和血淀粉酶再次升到17.9 mmol/ L 和245.2 U/ L,转入本院。无糖尿病家族史,无上呼吸道及消化道感染史,平时月经规律。