阿美替尼对结肠癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的抑制作用

目的探究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)阿美替尼对结肠癌SW620、HT29细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的作用及机制。方法体外培养结肠癌SW620、HT29细胞,CCK-8法、流式细胞术、Transwell实验检测阿美替尼对SW620、HT29细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响;Western blot实验检测凋亡和侵袭迁移相关蛋白Bax、Bcl-2、E-Cadherin、Vimentin的表达。将SW620细胞注射到5周龄BALB/c裸鼠右前肢皮下,建立裸鼠皮下瘤动物模型,测量皮下瘤体积,记录裸鼠体重、生存曲线,苏木精-伊红(HE)染色观察阿美替尼对心、肝、脾、肺、肾有无损伤作用。结果CCK-8实验表明阿美替尼抑制SW620、HT29细胞增殖;流式细胞术结果表明阿美替尼诱导SW620、HT29细胞发生凋亡;Transwell实验结果表明阿美替尼抑制SW620、HT29细胞侵袭迁移能力;Western blot实验结果表明阿美替尼处理组SW620和HT29细胞中E-Cadherin、Bax蛋白上调,Bcl-2、Vimentin蛋白下调。体内实验结果表明阿美替尼可以对结肠癌细胞皮下移植瘤产生抑制作用,延缓裸鼠体重的减轻,延长荷瘤裸鼠生存时间,HE染色结果表明阿美替尼没有明显的器官毒性。结论阿美替尼能够抑制结肠癌SW620、HT29细胞的增殖、侵袭迁移并诱导SW620、HT29细胞凋亡。

阿美替尼对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其病死率排在众多恶性肿瘤之首。非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)患者的病死率较高,总体5年存活率<15%。当NSCLC发生局部侵袭时,患者5年生存率仅为20%,而当发生远处转移时5年生存率更是低至4%。阿美替尼(almonertinib)是我国自主研发并拥有自主知识产权的创新药,其作为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂主要用于EGFR T790M突变的局部晚期或转移性NSCLC患者。本研究旨在探讨阿美替尼对NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养NSCLC H1975、PC-9细胞,采用CCK-8法、细胞凋亡实验、Transwell实验检测阿美替尼对H1975、PC-9细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响;蛋白质印迹法检测侵袭迁移相关蛋白质的表达。结果:CCK-8实验结果显示阿美替尼呈时间和剂量依赖性抑制H1975、PC-9细胞增殖,PC-9细胞24、48 h的IC_(50)值分别为5.422、1.302μmol/L,H1975细胞24、48 h的IC_(50)值分别为4.803、2.094μmol/L。细胞凋亡实验结果显示1、2、4、8μmol/L阿美替尼分别处理PC-9和H1975细胞24 h时,细胞凋亡率分别为(8.82±3.22)%、(9.53±4.24)%、(13.62±3.69)%、(42.10±1.76)%和(9.81±0.90)%、(10.51±1.49)%、(15.34±3.50)%、(28.97±2.57)%。Transwell实验结果显示阿美替尼抑制H1975、PC-9细胞侵袭和迁移。蛋白质印迹法结果显示:与对照组相比,1、2、4μmol/L阿美替尼处理组PC-9和H1975细胞中MMP-9,MMP-2和Vimentin蛋白表达水平均明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。裸鼠实验结果发现:与对照组和阳性对照奥希替尼(AZD9291)组相比,阿美替尼治疗组肿瘤生长被显著抑制,裸鼠体重减轻,肿瘤体积显著减小,肿瘤质量也明显减轻(均P<0.05)。结论:阿美替尼能够在体内外抑制H1975、PC-9细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进H1975、PC-9细胞凋亡。其抑制侵袭的作用机制可能与抑制肿瘤细胞上皮间质转化和金属蛋白酶表达有关。

阿美替尼具有较好的抗神经母细胞瘤作用:基于下调MMP2和MMP9的表达

目的探究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂阿美替尼对神经母细胞瘤SH-SY5Y的作用。方法CCK-8法、集落克隆法和流式细胞术检测不同浓度阿美替尼(0、2、4、8μmol/L)对SH-SY5Y细胞增殖、细胞存活和细胞凋亡的影响;透射电镜观察阿美替尼处理后SH-SY5Y细胞亚显微结构;Transwell小室实验检测阿美替尼对SH-SY5Y细胞侵袭及迁移的作用;Western blot实验检测阿美替尼对SH-SY5Y细胞凋亡和侵袭迁移相关蛋白Bax、Bcl-2、E-Cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9表达的影响;SH-SY5Y细胞注射到5周龄BALB/C裸鼠皮下,建立裸鼠皮下瘤动物模型,每组6只,设置空白对照组、阿美替尼处理组(15 mg/kg)、阳性药环磷酰胺处理组(20 mg/kg),测量裸鼠肿瘤体积及体质量变化,HE染色观察阿美替尼对荷瘤裸鼠心、肝、脾、肺、肾的毒副作用。结果CCK-8结果表明,相比于对照组,阿美替尼能够抑制SH-SY5Y细胞增殖(P<0.05),其作用24、48、72 h的IC50分别为5.004、3.728、3.228μmol/L;集落克隆结果表明阿美替尼能够抑制SH-SY5Y细胞存活;流式细胞术结果表明阿美替尼诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡(P<0.05),透射电镜下观察到阿美替尼处理后具有典型的细胞凋亡形态学特征;Transwell小室实验结果表明阿美替尼能够抑制SH-SY5Y细胞的侵袭迁移能力(P<0.01);Western blot实验结果表明阿美替尼处理后SH-SY5Y细胞中E-Cadherin、Bax蛋白表达水平上调,Bcl-2、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白表达水平下调(P<0.05);动物实验结果表明阿美替尼能够抑制神经母细胞瘤的生长,HE染色结果表明阿美替尼没有对小鼠脏器产生明显毒性。结论阿美替尼能够抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖并诱导细胞发生凋亡,通过下调MMP2、MMP9蛋白表达,从而抑制神经母细胞瘤侵袭和迁移。