变异链球菌LuxS基因缺陷突变株的构建及其生物膜结构的初步观察研究

目的:通过同源重组法构建变异链球菌LuxS基因缺陷突变菌株,比较其与变异链球菌UA159标准株在生物膜形成上的差异。方法:运用基因同源重组方法将氯霉素抗性基因(Cmr)与LuxS基因上下游区域的2个基因片段按一定顺序重组到PUC载体的多克隆位点中,构建出带氯霉素抗性标志的重组质粒,将载体质粒转化到含完整LuxS基因的变异链球菌UA159中,利用氯霉素抗性筛选出LuxS基因缺陷的突变株,并利用聚合酶链式反应(PCR)和哈氏弧菌发光实验进行检测。以釉质磨片为载体,在扫描电镜下观察上述两菌株含有20 g/L葡萄糖、20 g/L蔗糖的乳酪消化胨酵母(TPY)液体培养基中形成24 h的生物膜。结果:PCR基因扩增结果显示:突变株LuxS基因已被Cmr基因完全替换,成功的构建了变异链球菌LuxS基因突变株,并且突变株不能诱导哈氏弧菌BB170的生物发光。当用葡萄糖作为补充糖源时,变异链球菌UA159标准株和LuxS基因突变株所形成的生物膜表现型未见明显差异;而用蔗糖作为补充糖源时,两菌株所形成的生物膜有明显不同,UA159生物膜相对平滑均质,而LuxS基因突变株生物膜呈松散的蜂房状,基质间有较大的间隙,形成较大的团簇状菌落。结论:成功构建出LuxS基因缺陷的变异链球菌突变株,与变异链球菌UA159标准株其生物膜结构发生改变,提示LuxS会影响变异链球菌生物膜的形成。

口腔致病菌在生物膜状态和浮游态中的特性比较

在人类口腔中存在着种类繁多的天然菌群,这些细菌以牙菌斑生物膜的形式生长。菌斑生物膜作为人类龋病和牙周病的主要致病因素,有诸多代谢特点和生理现象明显不同于浮游态的细菌。下面就数种主要的口腔致病菌在生物膜状态和浮游态下的特性,如对抗菌剂的敏感性、基因表达和信号传导、耐酸性等方面的研究进展作一综述。

变异链球菌LuxS基因突变株生物被膜结构的电镜观察

目的:探讨变异链球菌IngbrittC(血清C型)国际标准株与LuxS基因缺失的变异链球菌突变株之间生物被膜的形成差异。方法:分别将变异链球菌标准株和LuxS基因突变株接种于含有2%葡萄糖、2%蔗糖的乳酪消化胨酵母(TPY)液体培养基中,以牙釉质磨片为载体,于扫描电镜下观察形成24h的上述两菌株生物被膜。结果:(1)当以葡萄糖作为补充糖源时,变异链球菌标准株和LuxS基因突变株所形成的生物被膜表现型未见明显差异;(2)当以蔗糖作为补充糖源时,两菌株所形成的生物被膜有明显的不同,标准株生物被膜相对平滑均质,而LuxS基因突变株的生物被膜呈松散的蜂房状,基质间有较大的间隙,形成较大的团簇状菌落;(3)加入标准株的无菌体上清液可以使LuxS基因突变株的生物被膜表型部分恢复正常,提高LuxS基因突变株形成生物被膜的能力。结论:变异链球菌标准株和LuxS基因突变株均能形成生物被膜,但LuxS基因突变株的生物被膜结构发生改变;依赖于LuxS的群体感应系统会影响变异链球菌生物被膜的形成。

LuxS基因缺失对变异链球菌生物学性状的影响

目的:观察LuxS基因突变对变异链球菌生物性状的影响。方法:将变链菌标准株和LuxS突变株分别培养于TSA、TSA-Cmr、BHI培养基培养48 h,通过菌落形态观察、常规生化检测、革兰染色涂片观察和生长曲线,比较两种菌株的生长特性;体外建立LuxS基因突变株和标准株的生物被膜模型,结晶紫染色,观察比较两菌株形成生物被膜的能力。结果:在含氯霉素的TSA-Cmr固体培养基中增塑,标准株基本不能生长,而突变株的生长状况基本正常。在不含氯霉素的TSA固体培养基中培养,两种菌株的菌落形态没有明显差别,革兰染色镜下观察,可见标准株菌体呈长链状排列且相互缠绕,而突变株菌体多呈短链状排列,形成长链的较少。生长曲线观察发现:两菌株在生长模式上基本一致,均呈典型的"S"型曲线,只是在进入生长的稳定期后,两者在细菌饱和度上有一定差异,即11.5～22.5 h之间各时间点标准株的A值均明显高于LuxS突变株(P<0.05)。在BHI培养基中两菌株均能形成生物被膜,但结构存在差异:标准株形成光滑且均匀分布的生物被膜,而突变株的生物被膜形态较粗糙。结论:LuxS基因突变对变异链球菌的生长以及生物被膜形成能力等生物学性状有一定影响。

LuxS基因缺失对变形链球菌蛋白表达的影响

目的通过双向电泳技术对比研究变形链球菌标准株与LuxS突变株菌体总蛋白质的表达差异,为进一步研究LuxS信号系统对变形链球菌致龋毒力的调控机制奠定基础。方法提取变形链球菌标准株及LuxS突变株的菌体总蛋白质,采用双向电泳技术对比研究两者蛋白质的表达差异,找出差异蛋白点。结果与标准株菌体总蛋白2-DE图谱相比较,LuxS突变株菌体总蛋白2-DE图谱中有61个斑点的蛋白质表达量发生了改变:36个点蛋白质表达量升高,25个点蛋白质表达量降低。结论变形链球菌标准株与LuxS突变株菌体总蛋白存在明显的差异,表现为2-DE图谱蛋白斑点染色的深浅不同,提示LuxS突变株菌体总蛋白发生了量的变化。

关于口腔内科临床教学的探索

要成为一名合格的口腔科医生,最重要的一点就是具有综合的工作能力,尤其是实际操作的能力。口腔医学是一门以临床实践为主的学科,临床教学不同于课堂教学,这需要专业教师引导学生突破自己学生身份的屏障,走出课堂进行实践,参与到疾病的诊治中。作者自2010年进入西安医学院教学以来,结合口腔内科临床实习特点,从多个方面对临床教学进行研究,总结出一些临床教学的方法,从而使学生尽快地转变角色,成为一名口腔专业人才。

骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠牙槽骨结构及骨代谢生化指标的影响

目的:探讨骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠牙槽骨结构及血清骨代谢生化指标的影响。方法:将24只3月龄雌性SD大鼠随机分为3组:对照组、模型组和骨碎补总黄酮组。采用摘除大鼠双侧卵巢的方法构建牙槽骨骨质疏松模型。给药12周后测血钙、血磷、碱性磷酸酶浓度,取大鼠牙槽骨进行组织切片观察和形态计量学测量。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙槽骨呈骨质疏松样改变,血清骨代谢指标表现为骨高转换。与模型组比较,骨碎补总黄酮可显著改善牙槽骨结构,增加牙槽骨骨小梁面积百分率(P<0.05)及骨小梁厚度,减小骨小梁间距(P<0.05)。血清骨代谢指标表现为血钙上升(P<0.05),碱性磷酸酶水平降低(P<0.05)。结论:骨碎补总黄酮能抑制去卵巢大鼠牙槽骨结构破坏,减缓牙槽骨骨量丢失,改善骨代谢,对牙槽骨骨质疏松具有防治作用。

关于口腔医学专业学生健康心理培养的体会

随着社会的飞速发展,人际竞争日趋激烈,人际关系也变得越来越复杂,如何在复杂的社会生活中保持一个健康的心态,已日益成为了人们关注的新焦点。在校大学生作为现代社会组成的一部分,成为了一个特殊的社会群体。他们走进大学,开始接触社会,稚嫩的心理便要接受一系列的社会问题,如人际关系的处理问题,学习、生活中的矛盾问题,对未来职业的选择问题等。医学作为一个特殊的学科,全面提高医科类学生的心理素质是十分必要的。医科类学生需要突破自我,打破从理论学习到临床实践的心理屏障,还要时刻做好心理准备,面对医患问题、医疗问题。作者从自身教学经验出发,就口腔医学专业学生的健康心理培养问题提出了一些自己的见解。

松香局部应用对牙本质小管的封闭效果及其耐磨损性

目的评价天然松香局部应用方式对牙本质小管的即刻封闭效果及其耐磨性,为其防治牙本质过敏提供实验依据。方法 (1)制备牙本质块40个,随机分为乙醇组、氟保护漆组、松香涂刷组、松香涂吹组(每组n=10)。所有样本酸蚀30 s使牙本质小管开放。松香涂吹组样本涂刷50%松香溶液+气枪轻吹,其余各组分别用无水乙醇,氟涂膜,松香乙醇溶液涂刷,场发射扫描电镜观察牙本质表面及剖面的显微形貌,并测量牙本质小管开口面积(ADTO)、牙本质小管开口相对面积(PADTO)和树脂突长度(LRT)。(2)制备20个牙本质块,分为氟保护漆磨损组和松香磨损组(每组n=10)。松香磨损组试件酸蚀、50%松香溶液处理及气枪轻吹,氟保护漆磨损组样本氟保护漆处理。两组样本均进行为期14 d的刷牙磨损,FESEM观察表面磨损形貌。结果乙醇组ADTO和PADTO均显著高于其余各组(P<0.05)。松香涂刷组和松香涂吹组ADTO和PADTO与氟涂膜组比较差异无统计学意义(P>0.05)。松香涂刷组LRT显著小于松香涂吹组(P<0.05)。扫描电镜见乙醇组牙本质小管完全开放,氟涂膜组、松香涂刷及松香涂吹组牙本质表面被覆膜状物;松香涂刷及松香涂吹组形成粗大树脂突,松香涂吹组形成的树脂突更长。氟保护漆磨损组和松香磨损组表面可见明显磨痕,牙本质小管部分开口,氟保护漆磨损组小管开口较松香磨损组大。结论松香溶液局部涂布合并吹拂可获得更好的牙本质小管即刻封闭效果和一定耐磨性。松香乙醇溶液可作为一种简便易用的抗牙本质过敏剂。

CM-DiI应用于标记大鼠牙髓干细胞的实验研究

目的探讨荧光染料CM-DiI用于标记大鼠牙髓干细胞可行性。方法酶解组织块法体外分离培养SD大鼠牙髓细胞,有限稀释法对所培养的牙髓细胞进行纯化,获得呈克隆集落式生长的干细胞,免疫组化法鉴定培养细胞种属来源,成脂/成骨诱导液诱导细胞向脂肪、骨细胞方向分化。荧光染料CM-DiI体外标记第3代大鼠牙髓干细胞,观察标记后细胞增殖情况以及细胞乳酸脱氢酶释放率,统计学分析CM-DiI标记与未标记细胞的生物学状态。结果利用酶解组织块法可培养出大鼠牙髓细胞,经有限稀释法纯化后可获得克隆集落状生长的大鼠牙髓干细胞;免疫组化法确定大鼠牙髓细胞为间充质来源,且具有向脂肪细胞、骨细胞等多向分化的潜能。CM-DiI标记后的大鼠牙髓干细胞的胞浆、胞膜呈现红色荧光,并且细胞生长为梭形、生长状况良好。与未进行细胞标记组比较,CM-DiI标记后细胞形态、上清液乳酸脱氢酶含量及CCK-8值均无明显变化,两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CM-DiI可用于标记大鼠牙髓干细胞,此种标记方法操作简便、染色速度快,对所标记的细胞无毒性。

LuxS基因缺失对变形链球菌耐酸性的影响

目的:探讨变形链球菌Ingbritt C(血清C型)国际标准株与LuxS基因缺失的变形链球菌突变株之间耐酸能力的差异。方法:配制相同浓度的变形链球菌标准株与LuxS缺陷株菌悬液,分别在不同pH值(pH3.5～7.0)的BHI液体培养基中培养相同时间后,用紫外分光光度计测定吸光度,比较2种菌株的生长情况;先在轻度酸性环境(pH5.5)中预酸化,再将2种菌株于致死性pH值环境(pH3.0)中培养,比较其适应性耐酸能力。结果:①pH值为6.0～7.0时,2种菌珠在相同pH值条件下生长情况间的差异无显著性(P>0.05),且3组不同pH值条件下细菌生长情况间的差异亦无显著性(P>0.05);②pH值为4.5～5.5时,2种菌株的生长情况的差异有显著性(P<0.05);③在pH值为3.0时,LuxS缺陷株的生存率(0.006 5%)要明显低于标准株的生存率(0.078%),差异有显著性(P<0.05)。④在pH值5.5环境下预酸化后,LuxS缺陷株的生存率(0.747%)约为标准株生存率(8.65%)的1/10。结论:在亚致死性pH值中,变形链球菌标准株与LuxS缺陷株的耐酸能力具有差异,标准株的耐酸能力强于LuxS缺陷株,2种菌株均表现出了适应性耐酸的能力;变形链球菌LuxS缺陷株对酸的敏感性增加,而适应性耐酸能力仍然存在。

混凝土中钢筋腐蚀监测无线传感器节点的设计

本文提出一种混凝土结构中钢筋腐蚀监测无线传感器节点的设计方案,该节点主要由埋入式传感器和外部电路组成。埋入式传感器基于LC振荡电路,通过不同粗细钢丝的通断情况,使谐振频率发生变化,从而判断钢筋的腐蚀情况,该模块具有电路结构简单,成本低廉,无线,无源,便于工程安装实现等特点。外部电路以MSP430F149为主处理芯片,由DDS、无线数据收发芯片NRF905等电路实现,该电路能够实时采集埋入式传感器的谐振频率变化信息,并具有通讯距离远、数据传输稳定等特点。

变形链球菌LuxS基因缺陷株生物膜结构的初步观察

生物膜是一种基质包裹的相互黏附或附着于体表及界面的细菌群体，牙菌斑就是一种典型的口腔生物膜，与龋病、牙周病的发生密切相关。变形链球菌（变链菌）是牙菌斑生物膜中的重要成分，可在菌斑内代谢产酸，使牙体局部pH值下降，硬组织脱矿继而发生龋病。研究显示生物膜中的细菌之间依赖一种密度感应（quorum sensing，QS）系统进行交流。各种细菌间的交流和协调有赖于共同的信号分子和具有同源性的信号感受系统，相对于菌种特异的自体诱导物（autoinducer，AI）信号分子AI-1来说，LuxS基因编码的AI-2系统高度保守，分布于很多种细菌中，参与牙菌斑内细菌间的信息交流，并利用QS系统调控特定的生理功能Ⅲ。本研究在成功构建变链菌LuxS基因缺陷株的基础上，体外建立变链菌LuxS基因缺陷株的生物膜模型，并与国际标准株IngbfittC比较，探讨LuxS基因在变链菌生物膜形成中的作用。

“万源统整”理念下品德与社会课程教学改革探索

在“万源统整”的理念下,通过教学目标的整合、课程资源的整合、生活信息与教材内容的梳理、人类文明成果与教材内容的整合四种途径可以实现品德与社会课程内容的丰富化、生活化、生动化以及教学有效化,从而助力学生的精神成长与教师的专业发展。

ADAMTS1基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨含凝血酶敏感素基序的去整合素金属蛋白酶1(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1,ADAMTS1)在口腔鳞状细胞癌发生发展及临床中的意义。方法采用免疫组化法检测ADAMTS1蛋白在口腔鳞状细胞癌及癌旁正常组织中的蛋白表达情况,并对相关临床病理参数进行比较。结果口腔鳞状细胞癌组织中ADAMTS1蛋白的阳性表达率显著低于癌旁组织,两组差异有统计学意义(P<0.01)。ADAMTS1的蛋白表达与口腔鳞状细胞癌患者的年龄、性别、发病部位、肿瘤大小、有无淋巴结转移、病理分化程度等无关,组内比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论ADAMTS1在口腔鳞状细胞癌中低表达,其异常表达与临床病理特征可能无关。

ADAMTS5基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨ADAMTS5在口腔鳞状细胞癌发生发展及临床中的意义。方法采用免疫组化法检测在50例口腔鳞状细胞癌及癌旁正常组织中ADAMTS5蛋白表达情况,并分析ADAMTS5表达与患者临床病理特征的关系。结果在口腔鳞状细胞癌组织中,ADAMTS5的阳性表达率为64%,癌旁组织为30%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。ADAMTS5在小于50岁患者中的表达高于50岁以上的患者;在低分化中的表达高于高中分化者;在有淋巴结转移者中的表达高于无淋巴结转移者,上述差异均有统计学意义(P<0.05);ADAMTS5表达与性别、发病部位、肿瘤大小等无关,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论ADAMTS5在口腔鳞状细胞癌中高表达,并且与口腔鳞状细胞癌患者的病理分化程度、是否有淋巴结转移等相关,是潜在的口腔鳞状细胞癌预后不良因子和治疗靶点。

VR/AR技术在口腔教学中的应用探讨

虚拟现实技术(VirtualReality,VR)与增强现实技术(AugmentedReality,AR)是目前最受关注和应用最多的技术手段之一。随着网络不断成熟和发展,VR/AR技术有望在口腔医学教学中被广泛推广。口腔医学是一门专业性较强的学科,对口腔医学生逻辑思维能力以及动手操作能力要求高。在传统的口腔医学教育模式中,学生临床操作相关的训练较少,致使学生毕业后临床操作技能普遍较差,而VR/AR的应用有望改变这一现状。本研究将对VR/AR技术在口腔教学中的应用进行探讨,分析目前VR/AR在口腔教学中的特点,结合我国教育现状,并对VR/AR在口腔教学中的应用趋势进行展望,以期优化临床训练模式,促进教学效果的提升。

变异链球菌LuxS基因突变株对葡萄糖摄取的研究

使用预酸化然后培养的方法在一组pH值梯度酸性环境中培养变异链球菌标准株和LuxS基因突变株,比较两种菌株的葡萄糖摄取能力.在pH5.5的BHI液体培养基中预酸化,设定初始pH值6.0~7.0,然后用葡萄糖氧化酶法测定在预酸化和未酸化条件下LuxS基因突变株培养上清液中葡萄糖减少的量.在不同培养条件下,LuxS基因突变株的糖摄取量明显低于亲代菌株(P<0.01);在pH5.5的培养基中预酸化后,突变株的糖摄取量增加(P<0.05).表明LuxS基因突变株的葡萄糖摄取能力降低,其致龋力低于标准株.

新时期口腔医学课程建设研究——浅谈如何上好一堂口腔医学课

要讲好一堂口腔医学课,首先我们要明确以下几个问题:什么是一堂好课?怎样讲好一堂课?口腔医学课程的特点是什么?根据课程内容特点如何准备口腔医学课?文章主要针对以上几个问题进行探讨。

PTENp1作为miR-21吸附“海绵”在口腔鳞癌中调控PTEN的表达

目的阐述肿瘤抑制因子假基因(PTENp1)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中调控PTEN mRNA表达的作用,从而为OSCC的预防、治疗及预后提供新靶点。方法收集42例OSCC患者以及癌旁正常组织标本,提取RNA,通过qRT-PCR技术检测PTENp1、PTEN以及miR-21的表达,Pearson相关分析其相关性。培养HEK293细胞并分组分别转染PTEN的3′UTR的荧光素酶质粒和miR-21模拟剂(mimics)或抑制剂(inhibitor)或者全长PTENp13′UTR质粒,通过荧光素酶活性检测验证PTENp1在PTEN-miR-21轴中的调节作用以及促癌功能。结果qRT-PCR检测发现,OSCC组织标本中PTEN(85.7%)、PTENp1(90.4%)均呈现缺失,而miR-21(76.2%)呈高表达趋势。Pearson相关性分析发现,PTEN与miR-21表达呈负相关(R=-0.1235,P<0.001),而PTEN与PTENp1表达存在正相关(R=0.0518,P=0.01)。荧光素酶活性检测显示,高表达PTENp1可显著上调PTEN的表达,提示PTENp1可靶向竞争性结合miR-21调节PTEN的表达。结论PTENp1作为PTEN的内源竞争性RNA(ceRNA)竞争性结合miR-21,对于OSCC的早期标记物预测及靶向治疗提供新的思路。