大黄素通过调控miR-29a-5p/VEGFB介导的细胞凋亡抑制多柔比星诱导的心脏毒性

目的研究大黄素(Emodin)对抗多柔比星(Doxorubicin,DOX)诱导的心脏毒性的作用和可能的机制。方法使用低、中、高剂量(5、15、25μmol·L^(-1))的大黄素预孵育H9C2细胞8 h,然后使用2.5μmol·L^(-1) DOX处理心肌细胞16 h建立心脏毒性损伤模型。采用MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测H9C2细胞中心肌肌钙蛋白(cTnT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平以及Caspase-3和Caspase-9活性;使用TUNEL法检测H9C2细胞凋亡水平;采用RT-qPCR法检测miR-29a-5p和血管内皮生长因子B(Vascular endothelial growth factor-B,VEGFB)表达量;Western blot检测VEGFB蛋白及其他凋亡相关因子表达水平;在转染miR-29a-5p模拟物和抑制剂后,RT-qPCR和Western blot法检测VEGFB对miR-29a-5p的靶向性;H9C2细胞转染miR-29a-5p模拟物,在大黄素15μmol·L^(-1)剂量下,MTT法检测H9C2细胞活力、RT-qPCR和Western Blot法检测VEGFB表达水平。结果与DOX组相比,大黄素低、中、高剂量组均显著提高了H9C2细胞活力(P<0.05,P<0.01),降低了cTnT、LDH、CK水平(P<0.05,P<0.01);RT-qPCR检测结果显示miR-29a-5p表达水平显著降低,VEGFB表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);细胞内ROS、MDA水平显著降低,GSH和GSH-Px水平显著升高(P<0.05,P<0.01);TUNEL阳性细胞显著减少,Caspase-3和Caspase-9活性显著降低,Western blot结果显示VEGFB表达水平显著升高,凋亡相关因子Bax表达水平显著降低、Bcl-2和Bcl-xl表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。在转染miR-29a-5p模拟物和抑制剂后,VEGFB表达水平分别降低和升高(P<0.05,P<0.01)。转染miR-29a-5p模拟物同时给予H9C2细胞大黄素15μmol·L^(-1)治疗后,DOX诱导的H9C2细胞活力明显降低的现象被逆转,并且VEGFB表达水平明显降低的现象也被逆转(P<0.05,P<0.01)。结论大黄素通过调节miR-29a-5p/VEGFB介导的心肌细胞凋亡显著降低了DOX诱导的心脏毒性。

基于网络药理学研究杜仲叶提取物改善非酒精性脂肪肝的作用及机制

目的基于网络药理学探讨杜仲叶提取物(Eucommia ulmoides leaf extracts,ELE)改善非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的有效成分、作用靶点及可能的作用机制。方法使用CNKI、万方、TCMSP、Pubmed等数据库、获取并筛选杜仲叶活性成分;使用TCMSP数据库和SwissTargetPrediction数据库检索并预测ELE活性成分的靶点;使用Genecard数据库和Drugbank数据库收集NAFLD疾病的靶点;使用String 11.0构建蛋白互作(Protein-protein interaction)网络图,分析蛋白靶点之间的关系;使用Cytoscape 3.7.1软件构建化合物-疾病靶点-通路网络图,分析三者之间相互作用的关系;使用DAVID数据库,对靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析,并对关键靶点进行实验验证。结果ELE改善NAFLD疾病靶点网络主要包含9个化合物和35个靶点,与脂质代谢相关的靶点有PPARα和CPT-1A,与NAFLD相关的通路主要有胰岛素抵抗、AMPK信号通路。体内、体外实验发现ELE能通过激活AMPKα及增强靶点PPARα和CPT-1A的表达,增强脂质氧化,改善NAFLD。结论ELE能增强脂质代谢,改善NAFLD,其机制主要与AMPK信号通路相关。

加味二妙颗粒安慰剂的制备工艺及模拟效果评价研究

探索加味二妙颗粒安慰剂的制备工艺并开展模拟效果评价,为加味二妙颗粒临床试验提供合格的安慰剂样品,也为中药颗粒剂型安慰剂的制备与质量评价提供参考。在加味二妙颗粒综合分析结果的基础上利用正交试验进行其安慰剂制备的味道模拟和颜色模拟小试,并通过初步人工评价确定安慰剂处方:糊精10 g,党参浸膏5.0 g,苦瓜提取物1.6 g,乌梅提取物0.3 g,甜菊糖苷0.1 g,蔗糖八乙酸酯0.004 g,靛蓝0.004 g,柠檬黄0.003 1 g,日落黄0.001 8 g,乔木苦茶粉0.001 8 g,焦糖0.001 3 g。根据安慰剂处方进行中试。对安慰剂的模拟效果进行独立性、对比性人工评价及电子鼻、电子舌客观化检测,结果显示此安慰剂处方在独立性人工评价中错误率较高,在对比性人工评价中与加味二妙颗粒得分差距不大,相似度为99.61%;电子鼻检测安慰剂处方与加味二妙颗粒气味相似度为99.19%,电子舌检测结果显示两者口味差距不大,相似性较高。因此,加味二妙颗粒安慰剂模拟效果较好,与加味二妙颗粒相似度高,应用于临床试验时不易破盲。此研究为中药颗粒剂型安慰剂的制备及质量评价提供了参考,对促进中药颗粒剂型安慰剂生产的规模化,推动中药安慰剂的临床应用,提高中药疗效的说服力及认可度起到一定的积极作用。