PCR检测感染牛血液中边缘无浆体DNA

以边缘无浆体表面保护抗原的ｍｓｐｌβ基因设计和合成的１对２０ｍｅｒ寡核苷酸作为引物，用耐热的Ｔａｇ－ＤＮＡ聚合酶经５０个循环扩增边缘无浆体模板，扩增产物直接用凝胶电泳检测，并用标准分子量确定。结果表明，只有用边缘无浆体ＤＮＡ模板进行扩增时，扩增产物才能生成，而以血液原虫，如牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、锥虫和牛白细胞ＤＮＡ作模板扩增，无扩增产物生成。ＰＣＲ检测边缘无浆体的灵敏度可达约３００个无浆体的ＤＮＡ。

快速凝集试验与补体结合试验检测牛边缘无浆体感染的效果对比

从138份血清样品的比较试验结果显示，快速凝集试验（RCA）比补体结合试验（CF）检测边缘无浆体感染的敏感性高（88．9％：81．5％），假阴性率低（11．1％：18．5％），两者都具有良好的特异性和预测性，检测阳性符合率高，快速凝集试验对一次感染牛的持续检出阳性时间更长久（303天：92天）

猪传染性胸膜肺炎HT株的分离、鉴定与定型试验

近年来从山东省等地曾发生过猪传染性胸膜肺炎的一些猪场，分离并获得了ＡＰＰ菌株１８株。１９９８年又从青岛地区发病猪场分离到ＡＰＰ菌ＨＴ株。

奶牛瑟氏泰勒虫病诊断和综合防制的研究

从青岛市崂山区宁韩镇的奶牛分离获得瑟氏泰勒虫中韩珠,进而建立了诊断奶牛瑟氏泰勒虫病的间接免疫荧光试验;对青岛地区奶牛瑟氏泰勒虫病进行了流行病学调查、综合防制试点及推广工作,取得了显著效果。

间接免疫荧光抗体试验检测瑟氏泰勒焦虫病的研究

用从青岛奶牛中分离的瑟氏泰勒焦虫株建立了间接荧光技体试验（IFA），人工感染牛7天后即可检出血清抗体，30天左右阳性反应较强，康复后一年仍为阳性反应，阳性检出率比查虫法高，与异种焦虫及其他血原虫血清光明显交叉反应。

间接免疫荧光试验(IFA)检测动物心水病

应用小白鼠或牛血管内皮细胞培养考德里氏体作为抗原，建立了检测动物心水病（反刍兽考德里氏体病）的间接免疫荧光试验（ＩＦＡ），与南非的标准抗原的试验有着等同的检测效果。

光生物素标记DNA探针检测牛巴贝斯虫研究初报

光生物素标记重组质粒DNA(c51A)探针检测牛巴贝斯虫研究的初步试验结果表明,能特异地检出感染牛血中的巴贝斯虫,灵敏度为10pg质粒DNA,相当于约150个感染红细胞的虫体DNA。

地高辛标记C15A核酸探针检测牛巴贝斯虫

为了提高牛巴贝斯虫核酸探针的检测性能，制备了地高辛标记的牛巴贝斯虫Ｃ１５Ａ核酸探针。该探针检测牛巴贝斯虫ＤＮＡ的灵敏度为３２ｐｇ，检测探针ＤＮＡ的灵敏度为０．１ｐｇ；检测其他对照血液原虫（双芽巴贝斯虫、边缘无浆体、瑟氏泰勒虫、伊氏锥虫、卵圆巴贝斯虫）和牛血细胞的ＤＮＡ，均未出现非特异性反应。与光敏生物素标记的牛巴贝斯虫Ｃ１５Ａ核酸探针比较，光敏生物素标记探针能检出１０％带虫血１２．５μＬ，而地高辛标记探针能检出１０％带虫血０．０１５μＬ，且杂交背景浅，显色深。

间接血凝诊断牛双芽巴贝斯虫病

本报告初步建立了牛双芽巴贝斯虫间接血凝方法。以适宜的低渗溶解和高速离心的方法,从染虫红细胞中分离完整的裂殖体,超声处理获得可溶性粗抗原。该抗原在适宜条件下致敏绵羊红细胞,测定兔抗双芽巴贝斯血高免血清,血凝效价达1:81920,测定自然感染牛最高血凝效价为1：640，人工感染牛10天左右可以测到抗体，13天左右即可达到效价高峰。该方法具有良好的特异性和敏感性。

牛双芽巴贝斯虫病补体结合试验研究

用单一株双芽巴贝斯虫高染虫率红细胞,经有控制的低渗溶解获得完整裂殖体,超声裂解和高速离心获得补体结合试验抗原。本研究提供了用这种抗原作小量法补体结合试验的程序。检查人工感染12天的牛血清,补反抗体已达到1:10的效价。研究初步证明了这种方法的特异性、敏感性和实用性。

双芽巴贝斯虫体外培养技术初探

应用双芽巴贝斯虫染虫血和液氮保藏株，进行体外培养技术初步研究，获得了生长、增殖和保种效果。双芽巴贝斯虫在牛红细胞内带虫率达５％，低染虫率的连续培养已超过２５ｄ。奠定了双芽巴贝斯虫培养技术应用基础。

牛巴贝斯虫核酸探针检测中血样处理优化试验

分别采用光敏生物素，地高辛标记的牛巴贝斯虫ＤＮＡ探针检测三种血样处理方法提取的虫体ＤＮＡ，结果表明：ＴｒｉｔｏｎＸ－１００／乙酸处理方法与全血提取法有相同检测水平；但前者操作简便；皂素处理法不能回收全部虫体。

牛巴贝斯虫核酸探针研制和应用试验

对比不同方法制备牛巴贝斯虫Ｃ５１Ａ探针ＤＮＡ和光敏生物素标记的效果，建立ＥＣＯＲＩ酶切纯化的Ｃ５１Ａ探针制备技术。该探针除具备重组质量ＤＮＡ探针的特异性和灵敏度外，杂交效果更规律清晰。开始应用到流行地区奶牛血样检测。