Mus81基因沉默对Hep3B人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的研究甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(methyl methanesulfonate and UV sensitive gene clone 81,Mus81)沉默对Hep3B人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法采用慢病毒介导的小干扰RNA技术沉默Mus81基因的表达并以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT⁃PCR)检测Mus81基因的沉默效率。噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,平板克隆实验、碘化丙锭(PI)染色法和膜联蛋白V(Annexin V)⁃APC染色法分别检测Mus81沉默对Hep3B细胞系增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果慢病毒感染效率高于80%,Mus81基因干扰效率为76.42%(P<0.001)。MTT生长曲线和平板克隆实验的结果显示,Mus81沉默的Hep3B细胞系的生长速度明显下降(P<0.001),增殖能力也明显减弱[细胞克隆数:(2±1)比(54±3),P<0.001]。Annexin V⁃APC和PI染色检测显示Mus81沉默Hep3B细胞系的凋亡率明显升高[(20.87±0.82)%vs.(0.69±0.09)%,P<0.001]并出现G1期细胞比例轻微降低[(33.77±1.61)%vs.(42.06±0.40)%,P<0.05]。结论Mus81基因沉默可明显抑制人肝癌细胞系Hep3B的生长增殖并促进其凋亡。

基于脂代谢相关基因的肝癌预后预测模型的构建与评价

目的基于脂代谢相关基因的生物信息学分析构建肝癌预后预测模型,并评价其对肝癌患者预后的预测能力。方法从癌症基因组图谱数据库(TCGA)和国际癌症基因组联合体数据库(ICGC)下载肝癌患者肿瘤组织和正常肝组织的mRNA转录组数据和临床资料(TCGA数据以欧美人种为主、ICGC数据仅为亚洲人种),从基因集合富集分析(GSEA)下载与脂质代谢相关的基因集。以TCGA数据库中的mRNA表达数据为输入文件,通过GSEA软件对基因集进行基因富集分析。采用perl软件和R软件从基因集中筛选出在肝癌中差异表达的脂代谢相关基因,采用Cox回归分析筛选出与肝癌预后相关的关键脂代谢基因,构建肝癌患者预后预测模型。计算TC⁃GA、ICGC数据库中肝癌患者的肝癌预后预测模型风险评分,根据评分中位数将肝癌患者分为高风险者和低风险者,并进行Kaplan-Meier生存分析,绘制受试者工作曲线(ROC);根据TCGA数据库中患者的临床资料绘制诺莫列线图评价预后预测模型对肝癌预后的预测能力,通过Cox回归分析该模型风险评分与肝癌临床病理特征对肝癌患者预后的影响。结果脂质代谢相关基因集中不同基因共757个,筛选其中109个表达上调的基因进行单因素Cox分析,结果显示21个脂代谢基因与预后相关。多因素Cox分析筛选出6个能独立影响肝癌预后的关键脂代谢基因,分别为DAGLA、PCSK9、PIGU、FABP6、GLA、ESYT3。根据6个关键脂代谢基因构建肝癌预后预测模型,风险评分=DAGLA×0.161878597+PCSK9×0.01496728+PIGU×0.043461843+FABP6×0.078505362+GLA×0.019799065+ESYT3×0.27806377。TCGA、ICGC数据库Kaplan-Meier生存分析结果均显示,高风险肝癌患者的生存时间低于低风险者(P<0.01);两数据库ROC曲线下面积分别为为0.732、0.662;诺莫列线图显示该模型预测肝癌患者预后的C值为0.706;多因素Cox回归分析显示,该模型的风险评分与肝癌患者的TNM分期可作为独立预后影响因子(P<0.001)。结论成功构建了基于脂代谢相关基因的肝癌预后预测模型,该模型对肝癌患者预后的预测能力较好。

NCEH1基因在肝癌组织与细胞系中的表达及生物学作用

目的了解中性胆固醇酯水解酶1(neutral cholesterol ester hydrolase 1,NCEH1)基因在肝癌组织及人肝癌细胞系中表达水平,观察NCEH1基因敲减对SMMC-7721人肝癌细胞系增殖、凋亡、侵袭及转移能力的影响。方法选取2013年1月-2019年6月在暨南大学附属广州红十字会医院手术治疗的32例肝癌患者标本及对应的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR方法检测NCEH1基因的相对表达量。从ICGC数据库下载截至2020年9月份的肝癌样本基因表达数据,应用R软件整理数据,筛选出每个样本中NCEH1基因表达量,分别采用配对Wilcoxon符号秩检验和Wilcoxon秩和检验分析肝癌与癌旁组织间的差异。采用实时荧光定量PCR方法检测NCEH1基因在SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B人肝癌细胞系和HL7702正常人肝细胞系中的表达水平。通过慢病毒介导的小干扰RNA(siRNA)技术构建NCEH1基因敲减的SMMC-7721人肝癌细胞系,分为NCEH1敲减组(KD组)和阴性对照组(NC组),以实时荧光定量PCR法检测NCEH1基因的敲减效率,再以MTT检测实验、Annexin V-APC单染法流式细胞仪检测、划痕愈合实验、Transwell实验和Transwell侵袭小室实验检测2组SMMC-7721肝癌细胞的增殖、凋亡、转移和侵袭能力,采用t检验对两组间数据进行统计学分析。结果NCEH1基因在肝癌组织中的平均表达量高于癌旁组织(本院标本Z=2.263,P=0.024,ICGC数据库U=18768,P<0.001)。NCEH1基因在中等侵袭转移潜能的SMMC-7721细胞系中的表达量最高;在低侵袭转移潜能的Bel-7402和HepG2细胞系中的表达水平次之,在无侵袭转移潜能的Hep3B细胞系中的表达水平最低。KD组SMMC-7721细胞中NCEH1基因的表达水平明显低于NC组(t=11.578,P=0.0003),NCEH1基因的敲减效率高达74.0%。较之NC组,KD组细胞生长速度明显减缓(t=32.10,P<0.001);细胞凋亡率明显升高(t=27.303,P<0.001);迁移率、转移和侵袭细胞数均明显降低(t值分别为9.51、38.123、22.331,P值均<0.001)。结论NCEH1基因在肝癌组织及细胞系中的表达明显升高,且可促进肝癌细胞的生长增殖及侵袭转移并抑制凋亡,提示其可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。

外泌体非编码RNA在肝癌液体活检中的研究进展

外泌体内含有丰富的非编码RNA,且具有重要的基因调控功能,在肝癌的发生发展中起重要作用.外泌体非编码RNA有望成为新型的肝癌液体活检标志物,为肝癌的早期诊断、早期治疗提供新手段.尽管当前外泌体非编码RNA的临床应用仍存在不足,但随着研究的深入,外泌体非编码RNA在肝癌的诊断、个性化治疗及预后评估等方面将发挥越来越重要的作用.

外生性肝癌破裂切除术后腹腔种植瘤破裂一例

患者男,59岁,2006年因“中上腹持续性疼痛15 h”入院。既往有乙肝和肝硬化病史。入院后腹部CT见中等量腹腔积血,拟诊脾破裂。遂急诊行剖腹探查术,术中探査见左肝有一直径约3 cm的带蒂结节,结节主体游离于肝外,仅通过其蒂带与左肝相连,结节表面有1 cm破口并活动性出血,术中将肿物完整切除。术后病理证实为肝透明细胞癌并行1次肝动脉造影+栓塞化疗术。

经内镜鼻胆管引流术诊断并治疗肝吸虫病79例临床分析

目的分析经内镜鼻胆管引流术(ENBD)治疗过程中诊断为肝吸虫病患者的临床特征,为肝吸虫病的诊治提供临床证据。方法回顾性分析暨南大学医学院附属广州红十字会医院2008年1月-2019年12月经ENBD诊断为肝吸虫病的79例患者的临床资料并总结其临床特征。结果 79例患者中胆汁找虫卵阳性75例(94.94%),21例(26.58%)患者鼻胆管引流出肝吸虫虫体。实验室检查中嗜酸性粒细胞数增高23例(29.11%),白细胞数增高38例(48.10%),丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高60例(75.95%),谷氨酸氨基转移酶(AST)升高55例(69.62%),总胆红素(TBIL)升高59例(74.68%),直接胆红素(DBIL)升高67例(84.81%),谷氨酰转肽酶升高75例(94.94%)。79例患者经综合治疗后肝功能均明显好转,4例(5.06%)患者并发经内镜逆行胰胆管造影(ERCP)术后胰腺炎,全部患者无并发出血、穿孔和胆管炎。结论 ENBD诊断肝吸虫病具有较高的灵敏度,用于治疗肝吸虫病梗阻性黄疸也安全有效,可作为肝吸虫病诊断及治疗的重要手段。