DENV2感染外周血单个核细胞增加TNF-α基因启动子区域CpG位点的甲基化水平

目的:检测正常人外周血单个核细胞(PBMC)感染2型登革病毒(DENV2)后肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子区域CpG位点的甲基化水平。方法:采用亚硫酸氢盐测序PCR法检测DNA甲基化水平。结果:TNF-α基因启动子区域为-294 bp到+58 bp,覆盖11个散在CpG位点;PCR反应后取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析显示,扩增序列大小与理论预测相符合;PBMC感染DENV2 0 h和6 h在11个甲基化位点中有2个处于甲基化状态,感染12 h有6个甲基化位点甲基化。0 h、6 h和12 h的平均甲基化率分别为10.3%、12.1%和25.5%,且0 h和12 h及6 h和12 h的甲基化率差异有统计学意义。结论:PBMC感染DENV2后会引起TNF-α基因启动子区域的甲基化水平增加。

“解构不是拆毁或破坏”——被劫持的,被解构的解构主义

本文把德里达的解构主义置于哲学和社会发展的各个角度去透析其发生及发展的可能性要素,最终阐述笔者对解构主义本质及态度的探索理解。

microRNA家族成员let-7e对人单核细胞系THP-1细胞活性的影响及机制研究

目的：研究let-7e对单核细胞系THP-1细胞凋亡和细胞因子分泌的影响及其机制。方法免疫荧光法检测cy3标记的mimic 对照转染THP-1细胞转染率，qRT-PCR法检测let-7e mimic及对照、let-7e inhibitor及对照转染THP1-细胞后let-7e的表达；MTT法检测转染后THP-1细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot法检测let-7e靶基因IFI6（interferon alpha-inducible protein 6）、EZH2（enhancer of zeste homolog 2）、caspase-3的表达；转染48h 后THP-1细胞用LPS刺激2h收集细胞培养上清，细胞因子芯片法检测上清中炎性因子的表达。结果 miRNA模拟物可以转染THP-1细胞，转染率约为75％，转染 let-7e mimic 12h 、24 h、48 h 后THP-1细胞的 let-7e 表达倍数分别为8．551±0．365、83．893±15．941、38．858±2．743，转染 let-7e inhibitor 12 h、24 h、48 h后THP-1细胞的let-7e表达倍数分别为0．594±0．174、2．427±1．229、3．053±0．207；let-7e mimic转染组THP-1细胞活性升高、凋亡率降低；miranda数据库分析证实let-7e与EZH2、IFI6、caspase-3结合的mirSVR score 分别为－0．1608、－0．5693、－09．423，证实IFI6、EZH2、caspase-3可能是let-7e的靶基因；let7-e mimic转染组IFI6、EZH2、caspase-3表达都有所下降；let-7e mimic 转染组 CD154、粒细胞集落刺激因子（ G-CSF）、CD54、IL-13、IL-1RA和IL-23表达有所下降。结论 let-7e有抗THP-1细胞凋亡的作用，可影响LPS诱导的细胞因子的表达。 let-7e可能通过调节其靶基因caspase-3、IFI6、EZH2对THP-1细胞的生物学功能产生影响。

MicroRNA let-7e对LPS诱导的TNF-α表达的影响及机制的初步研究

目的研究let-7e对LPS诱导的人原代单核细胞产生的TNF-α表达的影响及其机制。方法用全血分离人原代单核细胞，流式细胞术检测单核细胞表面标记CD14；let-7e mimics或mimics NC瞬转原代单核细胞24h、36h、48h，qRT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率；采用1mg／L LPS刺激原代单核细胞1h、3h、6h、12h后，ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的浓度，筛选出LPS最佳刺激时间；qRT—PCR法及ELISA法评估let-7e对LPS诱导原代单核细胞产生TNF-α的影响；Western blot法检测瞬转1et-7e mimics后EZH2的表达水平以及瞬转siEZH2后NF-κB p65、ARFGAP1和Arfaptin 2的表达水平。结果CD14^＋细胞大于70％；免疫荧光结果显示miRNA模拟物可以转染原代单核细胞，转染率约为70％；let-7e mimics转染原代单核细胞24h，细胞内即可表达较高水平的let-7e；LPS刺激原代单核细胞12h即可产生较高水平的TNF-α。ELISA结果证实let-7e mimics显著抑制LPS诱导的TNF-α的产生，同时在mRNA水平也得到一致的结果；Western blot结果显示let-7e mimics组EZH2的水平明显低于let-7e mimics NC组，沉默EZH2后胞核中NF—κ Bp65显著下调，沉默EZH2后囊泡转运调节蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达显著下降。结论在原代单核细胞中，let-7e显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达；其机制可能是1et-7e靶向作用EZH2进而调节NF—κB的活性及囊泡转运相关蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达水平。

表观遗传学在登革病毒感染中的研究进展

登革热是世界上广泛流行的蚊媒病毒性热带疾病。关于登革病毒感染的病理与免疫机制至今尚未完全阐明,诸多报道显示表观遗传学在病毒感染中起重要作用,其中关于登革病毒也有一些报道。本文论述了表观遗传学在病毒感染及登革病毒感染中的研究进展。