SPAG5在胃癌细胞恶性增殖中的生物学作用

目的在胃癌组织及癌旁组织中分析SPAG5的表达情况,通过干扰SPAG5分析其在胃癌细胞生长中的生物学作用。方法结合TCGA分析,免疫组织化学、免疫荧光染色分析SPAG5及MKi67在胃癌及癌旁组织中的表达模式,利用胃癌细胞AGS和MGC803进行体外细胞生物学实验,分别设置空白对照组和干扰组,采用慢病毒干扰,其中空白对照转染shCtrl,干扰组转染shSPAG5。通过Celigo、MTT和克隆形成实验、凋亡检测分析敲减SPAG5基因后对胃癌细胞生长的影响。结果Proteinatlas数据库、TCGA数据库分析结果发现SPAG5在胃癌中高表达,KM-plot及GEPIA数据库分析SPAG5在肺腺癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、宫颈癌、膀胱癌中高表达,免疫组化发现SPAG5在胃癌中高表达(P<0.001),免疫组化和免疫荧光共聚焦证明SPAG5与MKi67存在显著相关性(R=0.393,P<0.001)。Real time-PCR及Western blotting结果显示SPAG5在MKN74、BGC823、MGC803、SGC7901和AGS等细胞中表达水平较高(P<0.01)。敲减SPAG5后mRNA和蛋白的表达下降,Celigo、MTT和克隆形成实验结果显示敲减SPAG5抑制胃癌细胞增殖(P<0.01),流式凋亡分析发现敲减SPAG5促进胃癌细胞凋亡(P<0.001)。结论SPAG5和MKi67在胃癌组织中的表达具有相关性,干扰SPAG5基因可以抑制胃癌细胞的增殖。SPAG5与患者预后相关,可能成为胃癌的潜在标志物。

麝香酮抑制低氧下胃癌细胞中HIF-1α以及HK2、VEGF的表达

目的探究麝香酮在低氧状态下对胃癌细胞中缺氧诱导因子1(HIF-1α)以及己糖激酶-2(HK2)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA和蛋白表达的影响。方法通过CEPIA数据库在线分析HIF-1α、HK2、VEGF在胃癌STAD(Stomach adenocarcinoma)与癌旁组织中的表达情况。利用KM-plotter网站的Log-rank、Breslow检验分析基因表达与胃癌预后的关系。利用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测三种基因的mRNA表达情况。用蛋白质印迹法(Western Blot)分析胃癌HGC27细胞在低氧(由CoCl_(2)形成)时,麝香酮对HIF-1α、VECF、HK2 mRNA和蛋白表达的影响。结果HIF-1α和HK2在胃癌组织呈现高表达(P<0.01),预后评估提示VECF为胃癌风险基因(P<0.05),与胃癌患者预后不良相关。qRT-PCR结果显示,用麝香酮干预低氧状态下的HGC27细胞8h后,VECF的mRNA表达量下调,24h后,HIF-1α、HK2的mRNA表达量下调;WesternBlot结果显示,用麝香酮干预低氧状态下的HCC27细胞24h后,HIF-1α蛋白表达量降低(P<0.05)。结论麝香酮可能对低氧状态下的HIF-1α、HK2和VECF的mRNA和蛋白表达产生抑制作用.