STI571对食管癌细胞株CE-48T和CE-81T的体外杀伤作用

背景与目的:酪氨酸激酶是细胞增殖和分化的介导者,有研究显示,其在食管癌的发生发展中起重要的促进作用。STI571为血小板衍生的生长因子受体β(platelet-derivedgrowthfactorreceptorβ,PDGFR-β)的酪氨酸激酶抑制剂;食管癌组织中可高表达PDGFR-β。本实验的目的就是检测靶向治疗新药STI571对食管癌细胞株的体外杀伤作用。方法:使用Westernblot分析检测两种细胞株CE-48T和CE-81T中PDGFR-α和PDGFR-β的表达,然后应用MTT法测出STI571对两种细胞的IC50值,以AnnexinV/PI染色检测细胞凋亡情况,再用Westernblot检测STI571处理前后p-PDGFR-β的表达。结果:CE-48T细胞表达PDGFR-β而不表达PDGFR-α;而CE-81T细胞既不表达PDGFR-β,也不表达PDGFR-α。STI571对PDGFR-β阳性的CE-48T细胞具有很强的抑制作用,其平均IC50值为(8.32±1.50)μmol/L,而对PDGFR-β阴性的CE-81T细胞的抑制作用较弱,其平均IC50值为(41.02±7.64)μmol/L。AnnexinV/PI染色检测表明以STI571以10μmol/L作用CE-48T细胞12h,细胞凋亡率为(52.43±5.30)%,增加作用时间和药物浓度不能增加凋亡率。使用STI571处理CE-48T细胞后,p-PDGFR-β的表达受到抑制,而对CE-81T细胞没有影响。结论:STI571可诱导PDGFR-β表达阳性食管癌细胞凋亡,在体外有明显的杀伤作用,p-PDGFR-β可能是STI571的主要作用靶点。

Ki67、P53、VEGF和C-erbB-2在乳腺癌组织中表达的相关性研究及其临床意义

背景与目的:细胞增殖抗原标记物(Ki67)为细胞增殖的一个重要生物学指标。本研究旨在探讨Ki67、P53、VEGF和C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理因素的相关性。方法:用免疫组化方法检测151例乳腺癌组织中Ki67和其他生物学指标的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果:Ki67在乳腺癌组织中的阳性率为74.8%(113/151)。Ki67表达与乳腺癌临床分期有关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移状况无显著性相关(P>0.05);Ki67表达与P53、C-erbB-2表达呈正相关(P<0.05),而与VEGF表达无显著性相关;Ki67和VEGF的共表达与肿瘤大小和临床分期有关(P<0.05)。结论:Ki67阳性表达可作为评价乳腺癌发生、发展的生物学指标,联合VEGF检测更有助于乳腺癌临床分期的判断。

超声内镜检查在食管癌术前临床分期的应用价值

背景与目的:食管癌术前临床分期对选择合理治疗方案至关重要,超声内镜(endoscopicultrasonography,EUS)对食管癌T、N分期诊断准确率高,目前已成为国外食管癌治疗前的常规诊断方法。本研究对食管癌超声内镜检查与手术病理结果进行对照研究,以评价其在食管癌术前临床分期中应用价值。方法:对72例食管癌患者行术前EUS检查及术后病理检查,按UICC(1997)TNM分期标准分期,将EUS分期结果和手术病理分期结果进行对照研究。结果:食管癌术前EUS检查T、N分期的诊断准确率分别为80.6%(58/72)、88.9%(64/72)。T0期诊断准确率为50.0%(2/4),T1期为75.0%(3/4),T2期为70.6%(12/17),T3期为90.0%(36/40),T4期为71.4%(5/7);N0期诊断准确率为92.3%(36/39),N1期为84.8%(28/33),其中纵隔淋巴结和腹部淋巴结诊断准确率分别为90.0%和64.5%。EUST分期、N分期结果与病理分期结果有显著相关性(r=0.687,P<0.001;r=0.776,P<0.001)。EUS检查判断分期不准确的22例中,T分期14例,其中8例难以鉴别T2、T3;N分期8例,其中5例为难以鉴别炎性淋巴结和转移淋巴结。结论:EUS对食管癌术前T、N分期诊断准确率较高,其中对T3期食管癌和纵隔淋巴结诊断价值尤其高;准确鉴别T2和T3分期、转移淋巴结和炎性淋巴结及正确诊断腹部淋巴结转移是提高EUS诊断率的重点和难点。

“新生食管”再生过程的组织学观察

背景与目的:在器官及组织重建过程中,由于植入材料的组织相容性及材料界面不同可诱发不同的愈合结果。本研究通过观察新型生物材料人工食管植入后诱导机体修复、再生“新生食管”的生理过程,从而探讨“新生食管”的愈合机制。方法:以病理大切片技术及特殊染色法对术后1、3、6、12、24个月的实验犬“新生食管”标本进行组织学研究,观察其组织结构的动态变化、食管重塑及其组织结构再生的过程。结果:人工食管植入后早期可替代食管缺损,术后1个月左右人工食管完全脱落;诱导的“新生食管”于术后3～6个月完成粘膜爬覆,12个月左右出现粘膜下肌层、神经纤维、粘液腺、毛细血管等结构的再生,并完成纤维结缔组织层的重塑;“新生食管”术后3～6个月新生管腔狭窄较明显,12个月后狭窄缓解。结论:新型生物材料人工食管通过早期替代并诱导纤维结缔组织沉积、裹覆而形成“新生食管”;“新生食管”经过1年左右粘膜上皮爬覆、肉芽组织增生、血管、组织结构形成等过程而再生出可完成食物正常通过的再生食管;“新生食管”的狭窄与疤痕过度增生及收缩有关。

Ⅰ～Ⅱ期非小细胞肺癌组织中VEGF的表达和微血管密度与预后的关系

背景与目的TNM分期系统广泛应用于非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)患者的预后预测,但是由于同一分期内患者的生存期大不相同,应寻找更好的生物学预后指标。肿瘤新生血管的形成与肿瘤的进展及复发转移密切相关,但目前血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)两种生物学指标与Ⅰ～Ⅱ期NSCLC预后的关系尚有较大争议。本研究检测了214例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC组织中VEGF的表达和CD34标记的MVD的状况,探讨它们与Ⅰ～Ⅱ期NSCLC预后的关系。方法应用组织芯片技术和免疫组化法检测214例根治术后且术前未接受过放化疗等抗癌治疗的早期NSCLC患者(ⅠA期20例,ⅠB期137例,ⅡB期57例)组织中VEGF的表达和CD34标记的MVD的状况。结果VEGF的表达与性别、年龄、血型、病理类型、TNM分期无相关性(P>0.05)。MVD与年龄、病理类型相关(P<0.05);与性别、血型、TNM分期无关(P>0.05)。VEGF低表达组中和高表达组中CD34标记的MVD平均值分别为65.8±5.2和67.5±2.5;VEGF的表达与MVD无相关性(P>0.05)。MVD低值组与高值组总的5年生存率分别为60.0%和34.5%。单因素分析发现MVD值高的患者生存期较短(P=0.013)。进一步的Cox比例风险模型多因素分析也证明MVD(P=0.000)是影响预后的独立因素。结论早期非小细胞肺癌患者中CD34标记的MVD值高者的预后可能不良。

Smac在Ⅰ～Ⅱ期非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的:Smac是新近发现的一种由线粒体释放的促凋亡蛋白,主要作用于凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins),促进凋亡的发生;Smac在体外实验中显示出抗肿瘤作用,但在肺癌中其作用尚不明确。本研究通过检测Smac蛋白在Ⅰ～Ⅱ期非小细胞肺癌的表达,探讨其与临床病理因素及预后的关系。方法:采用组织芯片和免疫组化方法,对213例Ⅰ、Ⅱ期非小细胞肺癌肿瘤组织中Smac蛋白的表达情况进行检测。结果:Ⅰ、Ⅱ期NSCLC的5年生存率分别为61.9%和30.0%。Smac蛋白主要定位于细胞浆,以75%的阳性细胞数为分界点时,低表达组占60.6%,高表达组占39.4%。Smac的表达与性别、年龄、血型、病理类型及生存无相关性(P>0.05),但Smac蛋白在无淋巴结转移和有淋巴结转移的表达分别为37.0%和58.3%,二者比较有统计学意义(P<0.05)。结论:Smac蛋白与Ⅰ～Ⅱ期非小细胞肺癌的淋巴结转移有关。

改良人工食管结构预防新生食管狭窄

目的观察改良人工食管结构对术后新生食管狭窄的影响,为完善人工食管设计提供实验数据。方法采用犬食管缺损模型,实验组(n=10)植入复合结构管,术后新生食管狭窄者置入食管支架。对照组(n=30)植入单一结构管,术后新生食管狭窄者行扩张治疗,治疗失败后行支架置入。结果实验组人工食管平均脱管时间为19·10d,明显低于对照组的39·07d(t=15·6,P=0·000)。与对照组相比,实验组无人工食管脱管后梗阻发生。两组术后新生食管狭窄发生率差异无显著性。结论复合结构管可缩短脱管持续时间而安全脱管。

离体食管癌手术标本长度收缩规律的研究

背景与目的:食管癌手术标本在切除后和甲醛固定后会发生收缩,但对其收缩规律进行研究的报道较少。本研究拟观察离体食管癌手术标本在切除后和甲醛固定后的收缩规律。方法:对我院手术切除的70例食管鳞癌标本,术中在食管切除前,用直尺测量肿瘤长度、上切端长度和下切端长度;当食管癌手术标本切除离体后立即在肿瘤对面沿食管纵轴剖开,在无牵拉情况下,测量上述指标;用10%甲醛固定上述标本48h后,再测量上述指标。结果:离体后食管癌手术标本与其体内实际长度的比率分别为:上切缘(40.71±10.02)%,肿瘤(83.59±16.57)%,下切缘(58.41±12.03)%;用10%甲醛固定48h后,食管癌手术标本与其体内实际长度的比率分别为:上切缘(40.06±10.50)%,肿瘤(80.92±15.88)%,下切缘(54.83±11.29)%。食管癌手术标本的上切缘长度,下切缘长度与肿瘤长度,在切除后及甲醛固定后与其体内实际长度相比较差异有显著性(P<0.05)。结论:食管癌手术标本在切除后及甲醛固定后与其体内实际长度相比有显著的收缩。

树突细胞-食管癌融合细胞体外诱导特异性抗食管癌免疫反应

背景与目的:树突细胞(dendritic cells,DC)是人体专职的抗原呈递细胞,以DC为基础的DC/肿瘤细胞融合疫苗可以有效地诱导特异性抗肿瘤免疫应答。本研究旨在探讨成熟的DC与人食管癌细胞株EC109细胞融合疫苗体外诱导特异性抗食管癌细胞的免疫反应。方法:从健康志愿者外周血中分离出单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),在重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage-colony-stimulating factor,rhGM-CSF)和白介素(interleukin-4,IL-4)作用下体外诱导DC,采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)融合法使DC与EC109细胞融合制备DC/EC109细胞融合疫苗,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测融合疫苗刺激T淋巴细胞增殖的活性,乳酸脱氢酶(LDH)实验检测融合疫苗活化的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)在体外特异性杀伤EC109细胞的活性,并与对人胃癌细胞株SGC7901及人乳腺癌细胞株MCF7的杀伤作用进行比较。结果:DC与EC109细胞的融合效率最高达到22.25%。DC/EC109细胞融合疫苗能有效地刺激T淋巴细胞的增殖反应,其刺激T淋巴细胞增殖的能力显著高于DC或EC109细胞(P<0.05)。DC/EC109细胞融合疫苗活化的CTL对EC109细胞具有特异性的杀伤作用,对EC109细胞的杀伤作用显著强于对SGC7901细胞及MCF7细胞的杀伤作用(P<0.05)。结论:DC/EC109细胞融合疫苗能有效诱导抗EC109细胞的特异性免疫应答。