蓝舌病毒HbC_3对几株人和动物肿瘤细胞的感染特性研究

用BTV-HbC3感染人肺癌SPC-A-1细胞,人宫颈癌HeLa细胞,人星型胶质瘤U251细胞,小鼠星形胶质瘤C6细胞及人胚肺HEL细胞后,观察细胞病变效应(CPE);运用透射电镜技术及琼脂双扩散试验检测BTV-HbC3对各种不同肿瘤细胞及人胚肺HEL细胞的感染性;并用RT-PCR技术检测蓝舌病毒的增殖情况。结果显示,BTV-HbC3对正常HEL不感染,但能在不同来源的某些肿瘤细胞中选择性增殖,产生不同程度的细胞病变效应(CPE)及调亡现象,终致肿瘤细胞死亡。其中以人肺癌SPC-A-1细胞对其最为敏感。因此,初步认为BTV-HbC3株能靶向性杀死某些肿瘤细胞,从而为深入开展BTV-HbC3靶向性抗肿瘤的研究提供了第一手实验室依据。

蓝舌病毒HbC_3株S7基因5′非编码区序列分析

根据已发表的蓝舌病毒(bluetonguevirus,BTV)10型标准株S7基因设计合成一对与其5′ NCR(non codingregion)序列同源的引物,经反转录 聚合酶链反应(RT PCR)扩增出HbC3株和10型标准株长度分别为277bp和290bp的S7基因5′非编码区cDNA片段,以建立起dsRNA体外扩增系统.将扩增的BTV HbC3毒株的S7基因5′非编码区片段通过粘端连接克隆到pUCm T载体中,用PCR技术和限制性内切酶分析鉴定,表明获得重组质粒pUCm T BTV HbC3 S7.通过核苷酸序列分析方法分别将2个毒株的S7基因5′非编码区与呼肠孤病毒 3(reovirus 3)型比对,发现BTV HbC3株与呼肠孤病毒 3L2基因5′非编码区基因具有完全的同源性.将BTV HbC3毒株接种在不同细胞系如猴肾传代细胞(Vero)、人肝癌细胞(Hep 3B)和小鼠成纤维细胞(L929)等细胞株上,比较BTV HbC3在不同种系细胞上的增殖特征,并且用双向免疫扩散试验证实BTV HbC3和BTV 10型之间的血清学关系.结合本实验室的研究结果提示BTV HbC3株可能是蓝舌病毒的一个新的基因型.

生命泉膏滋抗实验小鼠阴道单纯疱疹病毒2型感染的研究

目的 :研究中药生命泉膏滋 (FESOL)抗小鼠阴道 HSV- 2感染的药效学作用。方法 :以不同剂量 FESOL作用于阴道感染 HSV- 2实验小鼠 ,观察用药后动物的发病率、死亡率和病变发展速度及程度。结果 :FESOL 高、中剂量组 ,[8.33、1.6 7、0 .34 g/ (kg.d) ]能显著降低感染鼠的发病率、死亡率 ,同时显著减轻病变程度 ,减慢病变发展速度。结论 :中药 FESOL能有效抗小鼠阴道 HSV- 2感染。

“生命泉流浸膏”抗HSV-2的体外实验研究

为了解生命泉流浸膏（ＦＥＳＯＬ）抗单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）的效果，以无环鸟苷（ＡＣＶ）作对照药，采用ＭＴＴ法和细胞病变（ＣＰＥ）抑制法进行体外实验观察。结果：ＭＴＴ法测得ＦＥＳＯＬ的ＴＣ５０为１．３９ｍｇ／ｍｌ，ＩＣ５０为０．０４１ｍｇ／ｍｌ，治疗指数（ＴＩ）为３３．９；以ＣＰＥ抑制法测得ＦＥＳＯＬ的ＴＣ５０为１．６１ｍｇ／ｍｌ，ＩＣ５０为０．０５５ｍｇ／ｍｌ，ＴＩ为２９．２７。与ＡＣＶ相比，ＦＥＳＯＬ在体外有明显的抑制ＨＳＶ－２的作用。

胃癌MGMT基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达缺失

目的:探讨6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子甲基化状况在胃癌发生、发展中的作用. 方法:用甲基特异性聚合酶扩增链式反应检测20例正常胃黏膜组织、38例胃癌组织及癌旁正常组织DNA中MGMT 基因启动子的甲基化状况,用免疫组化方法检测MGMT 蛋白的表达隋况. 结果:19.1%(9/47)的肿瘤组织和10.6%(5/47)的癌旁正常组织存在MGMT基因启动子甲基化,正常胃黏膜组织均不存在甲基化.免疫组化发现有21.3%(10/47)的肿瘤组织MGMT蛋白失表达,其中7例(70.0%)存在启动子甲基化. 胃癌中MGMT基因启动子高甲基化与MGMT蛋白表达缺失存在显著联系(P<0.001). 结论:胃癌组织中存在一定程度的MGMT基因启动子高甲基化和MGMT蛋白表达缺失.胃癌发生过程中MGMT基因高甲基化可导致MGMT蛋白表达缺失,可能是胃癌发生的重要途径之一.

中药FESOL抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的实验研究

目的 研究中药FESOL抗HSV -Ⅱ的药效学。方法 用MTT法和小鼠阴道模型分别进行了体内和体外抗HSV -Ⅱ实验。结果 MTT法测得FESOLTC50 为 2 .5mg·ml-1,IC50 为 0 .0 31mg·ml-1,治疗指数为 80 .6 5。与ACV相比 ,抑制HSV -Ⅱ的作用无显著性差异。小鼠阴道模型研究结果 ,FESOL高剂量组 (8.33、1.6 7g·kg·d-1)均明显降低感染鼠的发病率、死亡率 ,延长其平均存活天数 ,延缓病变发展速度 ,减轻病变程度。结论 FESOL具有良好的抗HSV

生命泉流浸膏抗人巨细胞病毒的体外实验研究

以病毒唑（ Ｒ Ｂ Ｖ） 作 阳性对 照药，采用 Ｍ Ｔ Ｔ 法和细 胞病变（ Ｃ Ｐ Ｅ） 抑 制法， 观察 生命 泉流 浸膏（ Ｆ Ｅ Ｓ Ｏ Ｌ） 抗人 巨细胞 病毒（ Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ） 的作用 。结果： Ｍ Ｔ Ｔ 法测得 Ｆ Ｅ Ｓ Ｏ Ｌ 的 Ｔ Ｃ５０ 为２ ．３８ ｍ ｇ／ ｍｌ ， Ｉ Ｃ５０为０ ．５４７ ｍ ｇ／ ｍｌ ，治 疗 指数 Ｔ Ｉ 为４ ．３５ ； Ｃ Ｐ Ｅ 抑 制 法测 得 Ｆ Ｅ Ｓ Ｏ Ｌ 和 Ｔ Ｃ５０ 为 ３ ．２０ ｍ ｇ／ ｍｌ ， Ｉ Ｃ５００ ．４０３ｍ ｇ／ ｍｌ ，治疗 指数 Ｔ Ｉ 为５ ．４６ 。结 论：与阳 性药 Ｒ Ｂ Ｖ 相比， Ｆ Ｅ Ｓ Ｏ Ｌ 在体 外可有 效抑制 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ。

重组人α1b干扰素软膏抗豚鼠皮肤单纯疱疹病毒Ⅰ型感染实验研究

IFN是国内外公认的抗病毒作用机理及疗效都较明确的生物制剂,临床一直用其治疗多种病毒性疾病.

甲型肝炎病毒结构蛋白的分离纯化及鉴定

利用高效持续带毒增殖的细胞株传代增殖获取甲型肝炎病毒（ Ｈ Ａ Ｖ） 。采用不连续蔗糖／甘油密度梯度超速离心分离高度纯化的 Ｈ Ａ Ｖ 颗粒。温和病毒裂解液裂解病毒后，运用高效液相色谱分离出三种蛋白， Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 证实所分离蛋白为 Ｈ Ａ Ｖ 三种主要结构蛋白 Ｖ Ｐ１ 、 Ｖ Ｐ２ 和 Ｖ Ｐ３ 。

胰岛素样生长因子Ⅰ对软骨细胞复合物体外成软骨能力的影响

目的 :探讨一种修复关节软骨的有效途径。方法 :自制藻酸钙载体复合软骨细胞置入DMEM培养基中 ,实验组加入胰岛素样生长因子Ⅰ (insulin likegrowthfactor Ⅰ ,IGF Ⅰ ) ,体外培养 4周。 结果 :两周内开始出现软骨样物质 ,以后体积增大 ,数量增多 ,质地变硬 ,实验组与对照组差别显著。结论 :藻酸钙与软骨细胞具有良好的相容性 ,软骨细胞在藻酸钙载体中保持了原有特性和成软骨能力 ,IGF Ⅰ能够促进软骨细胞的分化增殖 ,并维持软骨细胞的原有表型。

一种新的高纯度蓝舌病毒中国湖北株制备方法

目的 :获得高纯度蓝舌病毒HbC株 ,为制备生产和实验室研究奠定基础。方法 :利用反向免疫共沉淀方法获取纯化的蓝舌病毒颗粒 ;运用透射电镜和凝胶过滤层析检测纯化产物病毒的结构完整性和纯度 ;组织培养技术检测产物的生物学活性并计算纯化得率。结果 :纯化后的病毒经凝胶过滤层析分析仅见一个层析峰 ;所对应的电镜照片背景干净 ,未见明显杂质 ;纯化后的病毒对Vero细胞的TCID50 是 1 0 -5.7·ml-1 ;纯化得率为 5 0 .4 %～70 .8%。结论 :这种新方法能制备出高纯度、高活性的蓝舌病毒 ,且得率较高 ,易于放大生产 。

GSTM1、GSTT1基因多态与胃腺癌及幽门螺杆菌感染的关联

为探讨 GSTM1、GSTT1基因多态与胃腺癌 (GAC)临床特征及其与幽门螺杆菌 (Hp)感染的相关性 ,应用多重聚合酶链反应 (PCR)技术 ,检测了 GSTM1、GSTT1基因多态性、1 4C尿素呼气试验和外周血 ELISA法检测 Hp感染情况。结果显示 ,GSTM1空白基因型与 GAC易感性有关 ,肿瘤多处于早期 ;GSTT1空白基因型与肠型 GAC易感性有关 。

小儿胆总管囊肿穿孔与巨细胞病毒感染关系的初步探讨

目的：探讨小儿胆总管囊肿穿孔与巨细胞病毒（CMV）感染的关系。方法；将2000年～2005年间收治的11例小儿胆总管囊肿穿孔和20例小儿胆总管囊肿的患者，结合临床表现，应用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测患儿血清中CMV-IgM抗体，手术切除标本采用免疫组织化学方法检测CMV—EA，以及应用PCR检测切除组织的CMV特异性基因片段，并进行统计学分析。结果：小儿胆总管囊肿穿孔组11例患儿，酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测患儿血清中CMV—IgM抗体阳性率、免疫组化阳性率、PCR检测特异性CMV片段阳性率与对照组阳性率有显著性差异（P〈0．001）。结论：小儿胆总管囊肿穿孔与小儿胆总管囊肿患者相比较，CMV活动性感染可能是小儿胆总管囊肿穿孔的重要因素。

菲索抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的体外实验研究

为了解菲索 (FESOL )在体外抗单纯疱疹病毒 型 (HSV-2 )的效果 ,以临床常用的无环鸟苷 (ACV)作对照药 ,采用细胞病变抑制法 (CPE)抑制法和 MTT法进行实验。结果显示 ,CPE抑制法测得 FESOL的 TC50 为 3 mg/ ml,IC50 为 0 .0 3 2 mg/ ml,治疗指数 TI为 93 .75 ;以 MTT法测得 FESOL的 TC50 为 2 .5 mg/ ml,IC50 为 0 .0 3 1mg/ ml,TI为 80 .65。与 ACV相比 ,FESOL在体外有明显抑制

生命泉膏滋抗小鼠阴道单纯疱疹病毒感染的研究

目的 :研究中药生命泉膏滋 (FESOL)抗小鼠阴道单纯疱疹病毒 2型 (H SV- 2 )感染的药效学作用。方法 :以不同剂量 FESOL作用于阴道感染 HSV- 2实验小鼠 ,观察用药后小鼠的发病率、死亡率和病变发展速度及程度。结果 :FESOL高、中剂量组 (8.33,1.6 7,0 .34 g/ kg)能显著降低感染鼠的发病率、死亡率 ,同时显著减轻病变程度 ,减慢病变发展速度。结论 :中药 FESOL能有效抗小鼠阴道 H SV-

蓝舌病毒HbC_3株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式的研究

目的:研究蓝舌病毒湖北株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式及其作用机制。方法:原位末端标记(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡情况;激光扫描共聚焦显微镜检测荧光标记的细胞核及内质网变化;萤光照度仪检测病毒诱导细胞Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性变化。结果:凋亡染色未见明显凋亡细胞,共聚焦检测见细胞核膜不完整,染色质分散,有的凝集在核膜周围,部分染色质外溢,内质网分散,混浊不清,细胞与细胞之间分界不清;萤光照度仪检测酶活性可见Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性均无明显变化。结论:蓝舌病毒湖北株诱导HeLa细胞胀亡而发挥其抑瘤作用。

EHFV感染家兔后组织脏器的病毒抗原定位及其病理变化

采用流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）１１４株实验感染家兔，用免疫荧光法（ＩＦＡ）及ＰＡＰ双桥法对家兔各脏器组织进行病毒抗原定位，同时将各脏器石蜡切片作常规Ｈ－Ｅ染色，观察受检组织的病理变化。结果表明：家兔在感染后７－１５天中，用ＩＦＡ法在胸腺、心、肺、肝、脾、胰腺、淋巴结、脑、睾丸、卵巢、肾、大肠及小肠中均检出ＥＨＦＶ抗原。用ＰＡＰ双桥法在细胞水平进行病毒抗原定位，发现所有受检组织小血管及毛细血管内皮细胞均为ＥＨＦＶ的原始靶细胞。生殖腺实质细胞病毒抗原阳性，为ＥＨＦＶ的垂直传播提供了实验依据。从肺支气管粘膜内皮细胞、尤其是腔面的纤毛柱状上皮内检出病毒抗原。推测ＥＨＦＶ通过气溶胶造成传播可能是水平传搐的方式之一。病理学初步观察，各脏器组织细胞未发现不可逆的病理损害。

结合RT-PCR体外扩增检测HCVssRNA的研究

本研究旨在以HCV为平台,在简化RT-PCR基础上,结合体外转录,建立一种特异、高效、简便的检测血清中HCVRNA的体外转录合成系统。本法扩增终产物为特定极性的ssRNA,其特异性经凝胶电泳和斑点杂交确定;RNA定量分析结果显示本法核酸扩增效率高于巢式PCR近20倍。

生命泉流浸膏体外抗HSV-2和HCMV作用的实验研究

以无环鸟苷 ( ACV)和病毒唑 ( RBV)作阳性对照物 ,采用 MTT法和细胞病变 ( CPE)抑制法 ,观察了生命泉流浸膏( FESOL)抗单纯疱疹病毒 型 ( HSV-2 )和人巨细胞病毒 ( HCMV)