OSGEP在小鼠肝缺血再灌注损伤中的作用:与氧化应激反应的关系

目的评价O型唾液酸糖蛋白内肽酶(OSGEP)在小鼠肝缺血再灌注损伤中的作用及其与氧化应激反应的关系。方法实验ⅠSPF级健康雄性C57BL/6小鼠24只,野生型12只和OSGEP敲减型12只,6~8周龄,体质量18~22 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):野生型假手术组(Sham组)、野生型HIRI组(HIRI组)、敲减OSGEP+假手术组(Sham+KD组)和敲减OSGEP+HIRI组(HIRI+KD组)。阻断肝动脉与肝门静脉60 min恢复灌注的方法制备缺血再灌注损伤模型,Sham组和Sham+KD组仅暴露血管,不进行夹闭;HIRI组和HIRI+KD组夹闭60 min恢复灌注。于再灌注6 h后处死小鼠提取肝组织标本,HE染色后光学显微镜下观察病理学结果进行Suzuki评分,检测血清ALT和AST浓度,DCFH-DA荧光探针法检测ROS水平,比色法测定肝组织MDA和谷胱甘肽(GSH)含量,采用Western blot法检测OSGEP表达水平。实验Ⅱ将生长良好的AML12细胞采用随机数字表法分为4组(n=30):对照组(C组)、氧糖剥夺/复糖复氧组(OGD/R组)、氧糖剥夺/复糖复氧组+敲减OSGEP组(OGD/R+KD组)和氧糖剥夺/复糖复氧+敲减OSGEP阴性对照组(OGD/R+NC组)。C组在正常条件下培养,OGD/R组氧糖剥夺6 h后复糖复氧24 h,OGD/R+KD组先构建稳定转染OSGEP的AML12细胞,余同OGD/R组。采用CCK-8法检测细胞存活率,检测LDH释放量,DCFH-DA法检测ROS水平,比色法测定MDA和GSH含量。结果实验Ⅰ与Sham组比较,HIRI组OSGEP表达下调,血清AST和ALT浓度、Suzuki评分、肝组织ROS水平和MDA含量升高,GSH含量降低(P<0.05),Sham+KD组各指标差异无统计学意义(P>0.05);与HIRI组比较,HIRI+KD组血清AST和ALT浓度、Suzuki评分、肝组织ROS水平和MDA含量升高,GSH含量降低(P<0.05)。实验Ⅱ与C组比较,OGD/R组OSGEP表达下调,细胞存活率和GSH含量降低,LDH释放量、ROS水平和MDA含量升高(P<0.05);与OGD/R组比较,OGD/R+KD组细胞存活率和GSH含量降低,LDH释放量、ROS水平和MDA含量升高(P<0.05),OGD/R+NC组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论OSGEP在小鼠肝缺血再灌注损伤中通过抑制氧化应激反应发挥内源性保护作用。