3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

【目的】了解湖北地区鸭疫里氏杆菌病的分布流行与耐药情况,为该地区肉鸭养殖场鸭疫里氏杆菌病的临床用药提供参考。【方法】对武汉周边区县(江夏区、黄陂区、黄梅县)肉鸭养殖场的鸭疫里氏杆菌疑似病例进行采样并分离病原菌,对分离菌的形态学、染色特性、生化特性、16S rRNA进行鉴定,并对鉴定为鸭疫里氏杆菌的分离株进行血清型和耐药性分析。利用标志基因整合酶的特异性引物PCR鉴定分离菌基因组,判断是否整合有50K基因岛。【结果】分离鉴定了3株鸭疫里氏杆菌,3株分离菌均能在TSA平皿培养基中生长为光滑的半透明状菌落,革兰氏染色为阴性、瑞氏染色可观察到两极浓染;生化试验结果显示,3株鸭疫里氏杆菌均不发酵多种糖类,过氧化氢酶阳性,不产硫化氢,不能液化明胶。16S rRNA鉴定结果显示,获得大小为1480 bp的目的条带,血清型均为1型;50K基因岛标志基因PCR扩增结果显示,仅黄梅分离株(HM株)含有该基因岛。最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)试验与纸片扩散(Kirby-Bauer,K-B)试验测定耐药性结果显示,3株分离菌株均对青霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟、氟苯尼考及庆大霉素敏感,对萘啶酮酸、壮观霉素、恩诺沙星、多黏菌素B表现出不同程度的耐药性。【结论】分离鉴定了3株血清1型鸭疫里氏杆菌,药敏试验结果对本地区鸭疫里氏杆菌病的防治及流行病学研究提供一定的理论指导。

鸭疫里默氏杆菌KYF39_09285基因缺失株的构建及生物学特性研究

为研究KYF39_09285基因对鸭疫里默氏杆菌生物学特性及其对雏鸭致病力的影响,试验利用基因同源重组的原理构建KYF39_09285的基因缺失株RA-YMΔKYF39_09285,并使用穿梭质粒构建其基因回补菌株,评价其对鸭疫里默氏杆菌生物学特性以及雏鸭致病力的影响。结果显示:与亲本株相比,KYF39_09285基因缺失株的生长速度、生化特性、对Vero细胞的黏附入侵能力均未发生改变,但缺失株中dnaK表达量降低,对高渗、青霉素、氨苄西林、庆大霉素和链霉素的敏感性增强,对雏鸭的致病力(LD_(50))降低1.84倍,45℃胁迫下的KYF39_09285表达量显著降低。研究表明KYF39_09285与鸭疫里默氏杆菌对高温、高渗和抗生素的耐受性以及致病力有关,结果为深入研究鸭疫里默氏杆菌的致病机制奠定基础。