猪苓中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选分离及质谱分析

试验以猪苓为研究对象,综合利用遗传算法-BP神经网络数学模型、色谱和质谱等技术,建立快速筛选猪苓中黄嘌呤氧化酶抑制剂的新方法。首先,利用遗传算法-BP神经网络数学模型优化猪苓中麦角甾醇的提取工艺;其次,以黄嘌呤氧化酶为生物靶分子,应用超滤质谱技术,筛选猪苓中潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂,同时,应用分子对接技术验证超滤实验的准确性;最后,以活性筛选为导向,利用高速逆流色谱技术分离猪苓中黄嘌呤氧化酶抑制剂。结果显示:猪苓中麦角甾醇的最佳提取工艺为乙醇体积分数80%、液料比16 mL/g、提取时间1.4 h、提取次数3次,在此条件下,麦角甾醇得率为2.31%;从猪苓中筛选并分离出4个纯度均在90%以上的黄嘌呤氧化酶抑制剂,其抑制效果强弱顺序为猪苓酮A>猪苓酮B>麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮>麦角甾-7,22-二烯-3-酮。该方法快速、灵敏,为猪苓抗痛风药理作用的进一步研究提供了一定的理论基础。

桑黄中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选分离及质谱分析

以桑黄为研究对象,综合利用数学模型、色谱和质谱技术,建立了快速筛选分离桑黄中黄嘌呤氧化酶抑制剂的新方法。利用数学模型结合响应面优化桑黄中黄酮类活性成分的提取工艺,以黄嘌呤氧化酶为靶点,应用超滤-质谱技术快速筛选桑黄中黄嘌呤氧化酶的抑制剂;在活性指导下,利用高速逆流色谱技术分离纯化桑黄中活性成分,采用高效液相色谱-高分辨质谱结合核磁共振波谱技术对其进行结构鉴定。结果表明,在此条件下得到桑黄黄酮提取率为24.95 mg/g,优于响应面试验;从桑黄中筛选并分离出3个纯度均在90%以上的黄嘌呤氧化酶抑制剂,抑制效果强弱顺序为桑黄素D>桑黄素E>纤孔菌素A。本方法快速、灵敏,可为桑黄药理作用研究提供支撑,同时可为桑黄食品开发提供可行方法和理论支持。

遗传算法结合响应面优化超声提取松杉灵芝三萜工艺及其质谱分析

研究松杉灵芝三萜最佳提取工艺条件,对其三萜类化合物进行分析鉴定。采取单因素实验和响应面法分析超声辅助提取时间、提取次数、液料比和乙醇浓度对松杉灵芝三萜提取率的影响,结合Matlab遗传算法筛选最佳工艺参数;利用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI-MS)对松杉灵芝中三萜类化学成分进行分析鉴定。结果显示:最佳工艺条件为料液比1∶33(g/mL)、乙醇浓度88%、提取次数4次、提取时间1.0 h、超声功率200 W、超声温度50℃;三萜提取率为(1.210±0.002)%;从松杉灵芝中鉴定出7种三萜类化合物,分别为灵芝酸I、灵芝酸C、赤芝酸C、赤芝酮A、灵芝酸B、灵芝酸A、赤芝酸A。实验结果表明,遗传算法结合响应面筛选松杉灵芝三萜的提取工艺参数准确可靠,可用于松杉灵芝三萜的生产制备;松杉灵芝中具有多种三萜类成分,可为松杉灵芝药理作用的进一步研究提供一定理论基础。

罗布麻叶黄酮类成分酶解前后的液相色谱-质谱分析及活性比较

采用高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESIMS)联用技术,对罗布麻叶中的黄酮类化合物及酶解产物进行了系统的研究。结果表明,罗布麻叶所含黄酮成分极性较大,包含白麻苷、芦丁、山萘酚-3-O-β-D-芸香糖苷、异槲皮素、扁蓄苷和乙酰化金丝桃苷。罗布麻叶黄酮类成分经过β-葡萄糖苷酶和α-鼠李糖苷酶混合酶液酶解后发生水解,水解产物包括金丝桃苷、异槲皮素、乙酰化金丝桃苷、三叶豆苷、紫云英苷、槲皮素和山萘酚。将酶解前后各化合物的高效液相色谱峰面积进行比对,证明白麻苷、山萘酚-3-O-芸香糖苷和扁蓄苷为酶解前罗布麻叶主要成分,金丝桃苷、异槲皮素、扁蓄苷、槲皮素和山萘酚为酶解后的主要成分。细胞实验结果表明,酶解后3个剂量组的细胞相对增殖率较酶解前分别提升了14.61%、22.48%和20.22%。因此,通过β-葡萄糖苷酶和α-鼠李糖苷酶混合酶液酶解可以有效地将罗布麻叶黄酮苷转化为对应的黄酮苷元及疏水性的黄酮苷,大大提高了罗布麻叶黄酮提取物的抗抑郁活性。

人参叶提取物的提取工艺及抗氧化活性评价研究

目的:优化中药人参叶中皂苷类成分的提取工艺,并且进行体内抗氧化活性评价试验。方法:以回流法提取作为提取方法,以人参皂苷含量作为评价指标,以分光光度法作为检测方法,通过正交试验,考察提取次数、提取时间和料液比。利用乙醇损伤氧化动物模型,以动物血浆中脂质氧化产物蛋白质羰基、超氧化物歧化酶活力和还原性谷胱甘肽含量为评价指标,评价人参叶提取物的体内抗氧化活性。结果:人参叶中皂苷类化合物的最佳提取工艺为提取3次,每次20 min,料液比为10∶1。动物模型评价结果表明人参叶连续灌胃30 d,高剂量组0.5 g·kg^(-1)人参叶可显著降低MDA、Prot含量,对GSH含量有一定增加作用。表明人参叶提取物具有一定的抗氧化活性。结论:应用优化的工艺可以实现提取人人参皂苷的效率的最大化,所获得的提取物具有一定的抗氧化活性。

利用高效液相色谱和电喷雾质谱指纹图谱鉴别人参与桔梗

利用高效液相色谱和电喷雾质谱建立人参、桔梗的色谱和质谱指纹图谱,通过两种中药材指纹图谱的差异,达到鉴别中药材真伪的目的。建立的质谱指纹图谱方法简捷、快速、灵敏、特征性强、重现性好,具有很好的实用价值。

罗布白麻与罗布红麻的液相色谱-质谱联用分析

建立了罗布白麻叶和罗布红麻叶的高效液相色谱-电喷雾质谱联用的分析方法,分析比较了二者的16种成分。在罗布麻叶中首次发现了槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、槲皮素-3-O-呋喃型阿拉伯糖苷、Ⅰ3-Ⅱ8-双芹菜苷元、穗花衫双黄酮、贯叶金丝桃素和加贯叶金丝桃素。研究表明罗布红麻叶和罗布白麻叶的主要成分在种类和含量上均有较大的差别,前者中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、金丝桃苷、槲皮素-3-O-呋喃型阿拉伯糖苷、乙酰化异槲皮素、乙酰化金丝桃苷、紫云英苷、山奈酚-3-O-半乳糖苷、槲皮素、山奈酚和贯叶金丝桃素的含量高于后者,而白麻苷含量低于后者。芦丁和加贯叶金丝桃素是罗布白麻的特征性成分,而Ⅰ3-Ⅱ8-双芹菜苷元和穗花衫双黄酮是罗布红麻的特征性成分,根据此特点可以区分二者。

西洋参与北沙参的HPLC、ESI-MS指纹图谱识别

目的:通过HPLC、ESI-MS指纹图谱对中药西洋参与北沙参进行鉴别。方法:利用HPLC和ESI-MS技术,优化西洋参、北沙参提取物的色谱和质谱分离分析条件,建立二者HPLC、ESI-MS指纹图谱。结果:确定出西洋参与北沙参HPLC的各色谱峰相对保留时间;根据MS图中各成份的m/z值,确定相应成分的分子量。二者的液相色谱和质谱指纹图谱完全不同。结论:通过HPLC、ESI-MS指纹图谱可以完全鉴别中药西洋参与北沙参,方法简单准确,重现性好,具有实用价值。

等离子体光辐射-磁场综合作用处理种子对人参中皂苷含量的影响

采用紫外可见分光光度法、ESLMS（电喷雾质谱）与HPLC-UV（高效液相色谱）测定技术分析了等离子体种子处理机处理人参种子对所栽培人参中人参皂苷含量的影响。结果发现，人参种子受到等离子体与梯度磁场综合作用处理后，培育出的人参其总皂苷含量随磁化电流强度的改变呈现近似的正态分布。其中，在磁化线圈电流强度为1．1-1．5A处理种子后，栽培的人参中总皂苷含量较高。建立了电喷雾质谱分析人参提取物中人参皂苷的半定量方法，方法便捷地反映了未处理及处理后的人参种子所栽培的人参中皂苷成分的含量变化。

市售高丽参与中国红参的质量评价

目的:比较市售高丽参与中国红参中人参皂苷的含量,初步作出二者的质量评价。方法:采用比色法对市售高丽参与中国红参进行总皂苷含量测定,采用高效液相色谱法对高丽参与中国红参中主要单体皂苷进行测定比较。结果:中国红参总皂苷和主要的单体皂苷含量均高于韩国高丽参,而且红参中含有高丽参中不存在的单体皂苷Rg3、20S-Rg3。结论:市售中国红参质量高于市售高丽参。

利用液质联用技术分析高温处理对人参皂苷的转化规律

采用液质联用(HPLC-ESI-MS)技术研究了高温处理对人参皂苷的影响。对经过高温处理的人参与未经过处理的对照药材进行了系统研究,通过总离子流图与质谱图信息并结合人参皂苷结构分析了人参皂苷的裂解规律。结果表明,随着高温蒸制的进行,人参大分子量的皂苷发生水解,相应地生成了小分子量的皂苷。人参皂苷Re、Rg2生成了Rg6、F4,人参皂苷Rg1生成了Rh1、Rk3、Rh4,人参皂苷Rs1和Rs2生成了Rs3,人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd等生成了人参皂苷20R-Rg3、20S-Rg3、Rk1、Rg5。人参经过高压蒸制,生成常压蒸制时所没有的皂苷。

理论与经验结合角度下“药事管理与法规”教学研究

“药事管理与法规”是医药类大专院校以及综合性高校医药专业的公共课程。由于学生大多未从事过相应的生产实践活动,存在机械性记忆知识点,学习兴趣不足等问题。本文将教师经验和药品实际生产与管理等内容相结合,在理论与经验相结合的角度下,开展“药事管理与法规”课程的教学研究。

罗布麻叶总黄酮提取物促进小鼠抗抑郁基因CREB、BDNF的表达

罗布麻是中国药典收录的传统中药,本研究提取它的主要有效成分罗布麻总黄酮,采用经典抗抑郁评价模型小鼠强迫游泳实验对罗布麻叶总黄酮进行抗抑郁活性评价。试验中给小鼠罗布麻叶总黄酮提取物25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg后,观察罗布麻叶总黄酮对小鼠强迫游泳不动时间的影响,结果显示罗布麻总黄酮提取物能显著缩短小鼠强迫游泳不动时间(P<0.05),药效与氟西汀相似,表明罗布麻具有明显的抗抑郁活性。在此基础上,应用皮质酮损伤的PC12细胞模型,采用荧光相对定量RT-PCR法检测罗布麻对皮质酮损伤的PC12细胞中脑内脑源性神经营养因子(BDNF)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达水平的影响。结果表明,皮质酮处理后PC12细胞中BDNF、CREB基因的表达量最低,罗布麻处理后,表达量显著增加,较处理前增加了近十倍,且呈剂量依赖性。本研究结果提示罗布麻抗抑郁机制可能是通过(AC-cAMP-CREB)信号通路促进BDNF、CREB的基因表达而发挥的。

不同提取方法对赤芍中芍药苷含量影响的高效液相色谱法对比研究

目的对比研究5种不同提取方法对赤芍中芍药苷的提取效果,探寻一种最佳的提取方法。方法分别采用温浸提取法、回流提取法、加速溶剂提取法(ASE)、超声波提取法、超临界流体萃取法(SFE)5种方法对赤芍进行提取,然后应用HPLC法对提取物进行分析,以芍药苷的含量作为参考指标,对赤芍的提取方法进行研究。结果对比所采用的5种提取方法,提取物中芍药苷的含量从高到低,依次为温浸提取法、回流提取法、ASE法、SFE法、超声波提取法。结论 5种提取方法所获得的芍药苷含量相差较大,温浸提取法效果最佳,且赤芍中芍药苷的提取受温度和压力的影响明显。两者相比,温度对其提取效果影响更大。

金丝桃苷对皮质酮损伤的PC12细胞的保护作用

目的利用PC12细胞的抗抑郁损伤模型研究金丝桃苷的抗抑郁作用及其可能机制。方法金丝桃苷、盐酸氟西汀与0.01 mmol.L-1皮质酮共孵PC12细胞48 h,采用形态学法、MTT比色法、LDH法、Fura-2/AM荧光标记法测定胞内Ca2+浓度。结果高浓度皮质酮处理PC12细胞后,细胞数显著增多,受损变圆的细胞数较少;OD490值显著升高(P<0.01),LDH释放量较少(P<0.01),胞内[Ca2+]i升高,表明细胞受到损伤或部分死亡;当给予金丝桃苷或盐酸氟西汀后,细胞存活率升高,表明细胞损伤减少或接近正常。结论与经典抗抑郁剂盐酸氟西汀的作用效果一样,金丝桃苷对皮质酮损伤的PC12细胞有明显的保护作用和抗抑郁作用,其机理可能与神经细胞的保护作用有关。

川芎化学成分的高效液相色谱-电喷雾质谱研究

目的采用高效液相色相色谱-电喷雾质谱联用技术(LC-ESI-MS)对川芎药材的乙醇提取物的化学成分进行分析鉴定。方法选用反相C18色谱柱,以乙腈-0.5%醋酸溶剂梯度洗脱,二级管阵列(PDA)和电喷雾电离质谱(ESI-MS)在线同时检测。结果共鉴定出13个化学成分,主要为酚酸类成分和内酯类分。结论该方法可以快速分析鉴定川芎中的化合物并提供结构信息。

白芍提取物对MPTP致帕金森病小鼠的保护作用及机制的研究

为了探讨白芍(Radix paeoniae Alba)提取物对MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)致帕金森病小鼠的保护作用,试验采用不同剂量的白芍提取物(0.75、1.50、3.00 g生药/kg体重)灌喂小鼠,每日一次,连续15 d。第八天起所有小鼠每日腹腔注射MPTP 1次共8次,建立小鼠帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型,通过检测小鼠的自主活动、爬杆能力、滚轴能力及悬挂能力等行为学表现,同时检测小鼠脑黑质中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平的变化来评价白芍提取物对PD小鼠的影响。结果显示,经MPTP诱导的小鼠,其自主活动次数显著减少、爬杆时间差值显著增加、附着能力评分显著降低;经高剂量白芍提取物预处理后能显著(P<0.05)增加小鼠在测试时间内的自发站立次数,显著(P<0.05)缩短爬杆时间差值,显著(P<0.05)提高附着能力分值,极显著(P<0.01)提高小鼠脑内SOD、GSH-Px水平,MDA水平极显著(P<0.01)。

射干中乳酸脱氢酶抑制剂的筛选分离与质谱分析

本研究采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI-MS)对射干提取物中异黄酮类化学成分进行分析鉴定,以乳酸脱氢酶作为生物靶分子,运用超滤质谱技术筛选出6种酶抑制剂,分别为鸢尾苷(tectoridin)、鸢尾新苷A(Iristectorin A)、野鸢尾苷(iridin)、鸢尾苷元(tectorigenin)、野鸢尾黄素(irigenin)和次野鸢尾黄素(irisflorentin),并采用半制备型高效液相色谱技术(Semi-prep·HPLC)分离纯化射干提取物中的活性成分。所得单体分离收集液经分析型高效液相色谱法检测,纯度均大于90%。结果证明利用液相色谱-超滤-质谱-半制备型高效液相色谱联用技术可以快速筛选、鉴定、分离射干中的活性物质。此方法对于筛选酶抑制剂有快速和灵敏等优势,具有广泛的应用前景。

罗布麻叶总黄酮提取物对小鼠的抗抑郁作用的研究

目的对传统中药罗布麻进行抗抑郁活性评价,并对其作用机制进行研究。方法采用经典抗抑郁评价模型小鼠强迫游泳实验对罗布麻叶总黄酮进行抗抑郁活性评价,在此基础上,应用皮质酮损伤PC12细胞模型,采用MTT法、LDH检测法观察罗布麻提取物对皮质酮损伤的PC12细胞是否具有神经保护作用。结果在小鼠强迫游泳实验中,罗布麻提取物100,50,26 mg/kg(i.g.)连续给药10 d后,能显著缩短小鼠的强迫游泳不动时间(分别为P<0.001,P<0.05,P<0.01);同时罗布麻叶总黄酮提取物对皮质酮损伤的PC12细胞具有神经保护作用。结论罗布麻叶总黄酮具有抗抑郁作用,其机理可能与神经细胞的保护作用有关。

人参畏五灵脂的化学物质基础研究

目的利用现代仪器分析手段阐释中药配伍理论中"人参畏五灵脂"的化学物质基础。方法通过高效液相色谱法检测人参与不同剂量五灵脂配伍后水煎液的人参皂苷含量,配合紫外分光光度法检测药渣中人参总皂苷的残留量,找出二味药配伍后在化学成分上的变化规律及其原因。结果人参中加入五灵脂水提取液中人参皂苷的含量降低,并且随着五灵脂配伍剂量的增加人参皂苷逐渐减少。相反,人参与五灵脂水提后的残渣中人参皂苷含量随着五灵脂加入量的增加逐渐增多。结论"人参畏五灵脂"有一定科学道理,五灵脂可以抑制人参皂苷在水溶液中的溶出,推测可能是五灵脂中某种成分与人参皂苷在水溶液中发生络合不溶于水而沉淀于残渣中,而甲醇能够使络合物解离,使人参皂苷溶解在甲醇中。