新生儿经皮二氧化碳分压和经皮氧分压血气分析临床实践指南

危重新生儿,尤其是接受机械通气的新生儿,二氧化碳分压(PCO_(2))和氧分压(PO_(2))处于一个动态及快速变化的状态。采集动脉血或末梢血进行血气分析仅能获得某个时点的PaCO_(2)/PaO_(2)测量结果,具有有创性、不能连续监测等不足,频繁采血也容易导致医源性失血、穿刺部位损伤感染、血流动力学波动、疼痛不适增加和人机对抗等不良后果。无创经皮二氧化碳分压(TcPCO_(2))及经皮氧分压(TcPO_(2))监测技术能对新生儿PCO_(2)/PO_(2)进行连续监测,减少患儿抽血次数,在危重新生儿监护中具有一定的优势[1],尤其有益于极早产儿、极低出生体重儿的临床管理。TcPCO_(2)/TcPO_(2)监测的主要临床问题:①TcPCO_(2)/TcPO_(2)监测结果能否代替有创血气分析的结果;②监测探头的温度和连续监测时长与早产儿皮肤灼伤的关系。针对上述2个临床问题依据WHO指南制定方法,由复旦大学附属儿科医院联合国内3家医院新生儿血气分析专家,邀请复旦大学GRADE中心作为指南方法学指导,制作新生儿TcPCO_(2)/TcPO_(2)临床实践指南(以下简称指南)。

转化生长因子β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在早产大鼠高氧肺损伤后肺组织中的表达变化和意义

目的 探讨转化生长因子 β1 (TGFβ1 )及其Ⅰ、Ⅱ型受体 (TβRⅠ、TβRⅡ )与高氧肺损伤发生、发展的关系。方法 应用免疫组化法结合图象分析处理系统研究TGFβ1 、TβRⅠ、TβRⅡ在早产大鼠高氧肺损伤肺组织中的免疫表达。结果 TGFβ1 、TβRⅠ、TβRⅡ广泛分布于空气组早产大鼠肺组织 ,而在高氧组中表达明显增加。早产大鼠高氧后病理改变呈轻～中度肺纤维化和明显的肺泡发育阻滞。结论 TGFβ1 、TβRⅠ、TβRⅡ在早产大鼠高氧肺损伤中具有重要作用 ,过度表达的TGFβ1 可能通过其受体TβRⅠ。

Notch信号与大鼠肺发育的关系研究

目的 研究Notch受 /配体在大鼠肺发育过程中的表达特征 ,探讨Notch信号对肺形态发生和肺泡上皮成熟分化的调控作用。方法 利用肺组织病理学检查、免疫组化、RT PCR半定量分析技术 ,检测Notch1～ 3 、Jagged1在大鼠肺发育不同阶段 (胎龄 18、 2 0、 2 1d及生后 1、 4、 7、 10、 14、 2 1d)肺组织内的表达。结果 大鼠肺发育囊泡期即有Notch受 /配体的显著表达 ,主要分布于气道上皮细胞、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和间质细胞 ,Notch1～ 3 及Jagged1蛋白及mRNA表达水平随胎龄增加呈动态改变。结论 Notch信号在肺发育中起重要作用 ,可能参与支气管树及气血屏障的形成 ,且对呼吸道上皮细胞、肺泡上皮细胞的成熟分化有重要调节作用。

胎鼠肺细胞的分离纯化及原代培养

目的 建立一套可靠的胎鼠肺细胞分离、纯化和培养技术 ,用于体外研究肺发育和早产儿肺部疾病。方法采用胰酶和胶原酶消化 19d胎鼠肺组织块 ,经差速离心和反复贴壁法 ,分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞 (AECⅡ )和肺成纤维细胞 (LF) ,并进行原代培养。用细胞角蛋白 (cytokeratin)和波形蛋白 (vimentin)免疫细胞化学染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果 该方法所得细胞产量大、纯度高。免疫细胞化学鉴定 ,AECⅡ细胞cytokeratin染色阳性 ,vimentin染色阴性 ,LF则相反。透射电镜观察AECⅡ ,可见细胞内板层小体。结论 该方法是一种可靠的胎鼠肺细胞的分离纯化培养技术 。

85%高浓度氧长期暴露诱发早产大鼠肺损伤(英文)

目的探讨长期高浓度氧(85％)暴露对早产新生大鼠肺组织的损伤作用。方法早产SD大鼠生后第2天被随机分为Ⅰ空气组、Ⅱ高氧组(置85％O2中)。分别于暴露3,7,14 d后,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)含量和细胞总数及分类,肺组织湿重/干重(W/D),肺组织胶原含量;于暴露3,7,14,21 d后,行肺组织病理学检查和辐射状肺泡计数(RAC)。结果3 d时Ⅱ组仅MDA含量增加(P<0.05);7,14 d时,Ⅱ组BALF中MDA,TP,HYP含量、细胞总数、细胞分类中性粒细胞所占比例及肺W/D均明显增加(P<0.05或<0.01)。两组肺胶原含量差异无显著性(P>0.05)。除3 d外,Ⅱ组肺组织病理学检查可见不同程度的肺泡炎改变和肺发育滞后。7 d时Ⅱ组RAC值较Ⅰ组明显减少[(5.9±0.9)vs(7.1±0.9)](P<0.05);14,21 d时RAC值Ⅱ组较Ⅰ组[(7.0±0.8)vs(9.9±0.6);(7.3±0.9)vs(10.5±0.8)]减少更明显(P<0.01)。结论85％O2长期暴露,可引起早产新生大鼠亚急性炎症性肺损伤和肺发育受抑。

维甲酸下调高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞MMP-2表达

目的探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)基质金属蛋白酶-2 (MMP -2 )表达的影响及调控。方法原代培养胎鼠肺LFs及AECⅡ,待其生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组、空气+RA组、高氧组和高氧+RA组。于培养2、6、12、2 4和4 8(AECⅡ)或72h(LFs)时,采用半定量RT- PCR方法检测MMP 2和TIMP 2mRNA表达,应用Westernblot检测p38和磷酸化p38(p p38)蛋白表达水平。结果(1)与空气组比较,高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA和胎鼠LFsp p38表达(P <0 . 0 1或P <0. 0 5 ) ;(2 )RA能部分下调高氧诱导的胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA高表达和明显降低胎鼠LFsp p38表达;(3)高氧、RA对胎鼠LFs、AECⅡTIMP -2mRNA和胎鼠LFsp38蛋白表达无明显影响;(4)胎鼠LFsp p38与MMP 2mRNA表达呈显著性正相关(r =0. 76 7,P <0. 0 1,n =18)。结论高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA表达;p38通路参与高氧状态下胎鼠LFsMMP -2表达调控;RA可在转录后水平调节p38的活性状态从而实现对MMP-2的表达调控。

维甲酸治疗新生大鼠高氧肺发育受抑对肺组织基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的影响

目的 观察维甲酸(RA)对高氧抑制肺发育的影响,初步探讨其作用机制。方法 新生SD大鼠生后d2随机分为I空气+生理盐水组,Ⅱ高氧+生理盐水组,Ⅲ空气+RA组,Ⅳ高氧+RA组。Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于85％氧气中,Ⅲ、Ⅳ组每日腹腔注射RA500μg/kg。生后14d行肺组织病理学检查,辐射状肺泡计数(RAC)和免疫组化法检测基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及其组织抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)的表达。结果Ⅱ、Ⅳ组肺组织显示肺泡生成受抑,RAC分别较I、Ⅲ组显著减少(P<0.01),但Ⅳ组RAC(8.3±0.8)较Ⅱ组(7.2±0.9)明显增加(P<0.01)。Ⅱ、Ⅳ组MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的表达较I、Ⅲ组明显增强(P<0.01),但Ⅳ组MMP-2、MMP-9的表达(2.70±0.65,2.64±0.48)较Ⅱ组(3.36±0.59,3.04±0.72)减弱(P<0.05),而TIMP-1的表达(3.68±0.51)较Ⅱ组(3.32±0.63)增强(P<0.05),TIMP-2的表达无统计学差异。结论 RA可部分阻止高氧引起的肺发育进程阻滞,可能是通过纠正MMPs/TIMPs的失衡而发挥作用的。

Notch2、Notch4在大鼠早期肺发育过程中的动态表达

目的探讨Notch2、Notch4在SD大鼠肺发育过程中的作用。方法取孕18、202、1 d胎鼠和孕21 d早产鼠(足月为22 d)生后1、7、14、21 d肺组织标本(n=8),HE染色,进行组织形态学观察、免疫组织化学法和半定量RT-PCR法检测Notch2、Notch4的表达。结果孕龄18 d的胎肺见支气管树分支形成,间质中毛细血管毗邻呼吸道分布;20 d至早产生后1 d时,肺组织基本结构为终末囊泡,上皮分隔进一步发展,间质减少,毗邻上皮的毛细血管增多;7、14 d肺泡数目增多并渐成熟,气血屏障变薄;21 d肺泡壁进一步变薄,间质细胞少见。免疫组织化学结果显示,Notch2在孕182、0 d即有表达,21 d表达最强,出生后表达逐渐减弱;Notch4在孕18 d表达最明显,以后呈减弱趋势。RT-PCR检测Notch2、Notch4 mRNA变化与多肽变化规律相似。结论Notch2、Notch4参与大鼠早期肺发育过程。

Notch受体在早产鼠高氧肺损伤中的动态表达

目的检测Notch受体、AQP5、SP-C在高氧暴露下早产SD大鼠肺的表达,探讨Notch在高氧肺损伤中的作用机制。方法SD早产鼠80只随机分为对照组和高氧组,于1、71、42、1 d行肺组织病理学检查;免疫组织化学法检测Notch1、Notch3;RT-PCR检测Notch1、Notch3、AQP5S、P-C mRNA;Western blot检测AQP5、SP-C。结果病理学检查显示,高氧组肺发育滞后,Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)分化抑制。免疫组织化学法检测结果显示,高氧组各时间点(除7 d)肺组织Notch1表达低于对照组(P<0.05,0.01),Notch3上调(P<0.01)。Notch1、Notch3 mRNA改变类似蛋白水平。高氧组AQP5,SP-C mRNA及蛋白较对照组显著下降。结论85%高氧导致早产鼠肺Notch受体表达异常。Notch信号可能通过调控转分化参与高氧肺损伤。

维甲酸通过调控MAPK途径减轻早产大鼠高氧肺损伤

目的探讨维甲酸(RA)对高氧肺损伤保护的作用机制及其与调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的关系。方法剖宫取出SD大鼠孕21 d(足月为22 d)早产鼠,随机分为4组(每组n=12):①空气组;②高氧组;③空气+RA组;④高氧+RA组,①、③组置于空气中,②、④组置于85%O2中,③、④组每日腹腔注射RA(500μg/kg)。4 d后收集肺组织标本,末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测PCNA表达,Western Blot检测磷酸化/非磷酸化总ERKsJ、NKs或p38表达。结果与空气组比较,高氧暴露使肺组织TUNEL阳性细胞显著增加(P<0.01),PC-NA表达明显受抑(P<0.01),肺泡分隔第二嵴明显减少、气腔增大,磷酸化ERK1/2J、NK1/2和p38表达不同程度增加;RA显著缓解高氧所致上述改变。结论RA通过调节MAPKs活性状况,降低肺细胞凋亡,促进其增殖,是防止高氧肺损伤的重要机制之一。

口服对乙酰氨基酚治疗早产儿动脉导管未闭的效果及安全性

目的:探讨口服对乙酰氨基酚治疗早产儿动脉导管未闭(patent ductus arteriosus,PDA)的效果及安全性。方法:采用前瞻性对照研究方法观察PDA早产儿治疗临床资料,72例经心脏彩超诊断有临床表现的PDA的早产儿分为口服对乙酰氨基酚治疗组(18例)和口服布洛芬对照组(54例),观察两组PDA关闭率、副作用及并发症。结果:治疗组和对照组总关闭率分别为66.7%(12例)和70.4%(38例),差异无统计学意义(χ2=0.087,P=0.768)。除但治疗组高胆红素血症发生率低于对照组外(P<0.05),两组患儿在少尿、NEC、肾功能异常、IVH3-4级发生率寄消化道出血等药物副作用方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:对乙酰氨基酚在治疗PDA方面的疗效与布洛芬接近,且高胆红素血症发生率低,适合于在临床推广应用。

维甲酸对高氧暴露下新生大鼠肺组织中Ⅰ型胶原含量的影响

为探讨维甲酸对高氧暴露下新生大鼠肺组织中Ⅰ型胶原含量的影响 ,将生后2d的SD大鼠随机分为4组 :①空气+生理盐水组 ;②高氧 +生理盐水组 ;③高氧 +地塞米松组 ;④高氧 +维甲酸组。②、③和④组持续暴露于85 %O2 中 ,于生后14d采用免疫组化和原位杂交方法对肺组织中Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体、肺组织中Ⅰ型胶原mRNA行定位、半定量检测 ,作HE染色行辐射状肺泡计数。结果显示 ,与高氧 +生理盐水组相比 ,高氧 +维甲酸组辐射状肺泡计数显著增加 ,肺组织中Ⅰ型胶原蛋白表达明显增强 ,而Ⅰ型胶原基因表达和转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体表达显著减弱 ,阳性表达明显改变的分布主要在支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞和肺内间质细胞。提示维甲酸通过对Ⅰ型胶原mRNA转录后调控和调节Ⅰ型胶原蛋白的降解而增加肺内胶原含量 。

高氧、维甲酸对早产鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、-9及特异性组织抑制物-1、-2表达的影响

目的探讨基质金属原蛋白-2(MMP-2)、MMP-9、基质金属蛋白酶特异性组织抑制物-1(TIMP-1)和TIMP-2在高氧肺损伤中的作用及维甲酸(RA)的保护作用机制。方法建立高氧(FiO285%)暴露早产SD大鼠肺损伤模型,应用RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA表达,采用明胶酶谱检测MMP-2和MMP-9酶原及活酶表达,采用Western blot技术检测TIMP-1和TIMP-2蛋白表达。结果与空气组比较,高氧暴露4、7、14d,MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达均显著升高(P均<0.01),MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶和TIMP-1蛋白的表达明显上调(P<0.05);RA对空气暴露下它们的表达均无明显影响(P均>0.05),但不同程度下调高氧暴露后MMP-2、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达和MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶的表达,进一步提高TIMP-1蛋白表达;高氧、RA对TIMP-2 mRNA和蛋白的表达均无明显影响(P均>0.05)。结论高氧暴露明显改变MMPs/TIMPs的表达,在肺泡形成关键时期,MMPs/TIMPs之间平衡关系的破坏是造成肺发育受阻和纤维化的重要因素;通过协调MMPs/TIMPs之间的表达,改善肺泡结构,降低肺纤维化程度,从而逆转高氧所致肺损伤,是RA发挥保护作用的重要机制之一。

血小板源性生长因子对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的 探讨血小板源性生长因子 (PDGF)在新生大鼠高氧肺损伤中时空作用机制。方法 应用免疫组织化学法定位PDGF表达 ,反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测各时间点 (生后 4、7、10、14d)PDGFmRNA水平。结果 随日龄增加 ,PDGF A、 B含量发生不同的变化。高氧暴露下PDGF BmRNA含量及其表达均显著高于空气组 (P <0 .0 5 ,<0 .0 1)。而PDGF AmRNA水平及其表达却显著低于空气组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 高氧降低PDGF A水平 ,增加PDGF B含量。PDGF A、 B共同参与高氧暴露下肺组织损伤过程 ,是肺发育阻滞的重要因素。

慢性肺部疾病患儿肺灌洗液中生物标记物的研究

目的研究机械通气患儿肺灌洗液中生物标志物的变化,以探讨其在早期诊断早产儿慢性肺部疾病中的意义。方法将1999年12月至2004年8月在NICU行机械通气>5d的71例新生儿按原发疾病分为4组:肺炎组(21例)、肺透明膜病组(RDS组,16例)、慢性肺部疾病组(CLD组,19例)、对照组(15例)。所有患儿对肺灌洗液行细胞学检验;采用比色法检测灌洗液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;采用放免法对灌洗液中TNF-α、IL-8、IL-1和IL-6及内皮素-1(ET-1)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)和羟脯氨酸(Hyp)含量进行检测。数据统计采用K-W检验。结果①生后4d内四组间各检测值比较差异无统计学意义,生后第5天差异有统计学意义。②生后第5天CLD组肺灌洗液中总蛋白(75.4g/L)及MDA(39.39nmol/ml)较非CLD组明显增加(P<0.05),SOD(8.03U/ml)及GSH(795mg/L)显著下降(P<0.05);③CLD组生后第5天肺灌洗液中的TNF-α(7.62fmol/ml)、IL-8(376.9mg/ml)、IL-1(2.09ng/ml)、IL-6(1.02ng/ml)、ET-1(2.66ng/ml)、PCⅢ(110.82μg/ml)、HA(258.65mg/ml)和Hyp(12.03ng/ml)均明显高于其他三组(P<0.05)。结论CLD的发生为一复杂过程,生后第5天肺灌洗液中各生物标志物水平对早期诊断早产儿慢性肺部疾病有重要意义。

胰岛素样生长因子结合蛋白2在新生鼠肺发育中的作用

目的探索胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)2在新生鼠肺发育中的作用。方法SD孕鼠80只分为4组,即A:对照组;B:地塞米松(Dex)1组;C:Dex2组;D:维A酸(RA)组。A、B、D组分别于孕18～20d皮下注射生理盐水、Dex,腹腔注射RA;C组于生后1～3d皮下注射Dex。各组分别于孕18、20、21d(C组孕期不取)、生后1、3、5、7、10、14、21d取肺标本作形态学检查、免疫组织化学、Westernblot及RT PCR检测。结果1.肺组织形态学:B、C组早期肺泡发育提前,数目多,壁薄,晚期则明显落后于A、D组。2.IGFBP2肺表达:A组中IGFBP2主要在胎肺组织中表达,孕18d左右表达最强,随后表达渐减弱。B、C组表达趋势同A组,但生后各时间点均较A组增强;D组生后各时间点均较A组减弱。3.Westernblot:IGFBP2多肽表达强度各组孕18d表达最强,随后渐降低;B、C组生后各时间点表达强度明显高于A组(P均<0.01);D组各时间点浓度均明显低于A组(P均<0.01)。4.RT PCR:IGFBP2mRNA表达的强度变化规律与其肽浓度变化相似。结论IGFBP2在肺发育过程起重要作用,其浓度过高则影响肺发育。

血小板衍生生长因子对肺发育的影响

目的探讨血小板衍生生长因子(PDGF)在胚胎和生后新生大鼠肺发育中的作用机制,研究其对肺分支形态形成,肺实质和间质发育调控原理。方法应用免疫组织化学法和RT-PCR法半定量分析和检测各时间点(胚胎18、20、21d和生后1、4、7、14、21d)PDGFmRNA及其表达水平。结果在胚胎晚期,PDGF表达于肺间质细胞和肺实质细胞胞浆。出生后随日龄增加,PDG-FmRNA及其表达呈动态变化,组间比较差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论PDGF在肺分支形态发育和肺组织细胞增殖中起着关键作用,它不仅参与肺泡数量调节,而且是肺间质细胞和肺实质细胞分化成熟不可缺少的因子。

1例急性肾功能衰竭早产儿应用连续性肾脏替代治疗的监护

报道应用连续性肾脏替代治疗成功救治1例急性肾功能衰竭早产儿的监护体会:成立特护小组,选择脐静脉插管,使用4 F双腔Vascath导管建立血管通路。治疗期间,新生儿不能用语言表达,加上早产儿病情变化快,要求护士必须周密细致观察并综合分析。患儿共进行2次连续性静脉-静脉血液滤过,血压、呼吸、电解质及凝血功能正常,过程顺利,2次滤过后,患儿水肿明显减轻,血Cr及BUN明显下降,代谢性酸中毒及离子紊乱等得到纠正,于滤过开始后7 h开始排尿,肾功能得到完全恢复。