新生鼠缺氧缺血性脑病水通道蛋白4与肿瘤坏死因子-α的变化及意义

目的:研究新生鼠缺氧缺血性脑病后大脑中水通道蛋白4(AQP4)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化及意义。方法:35只7日龄新生SD大鼠分为7组,包括对照组(C组)和实验组6组(缺氧缺血组),分别在缺氧缺血性脑病0、2、4、6、8、12h断头取脑,做病理切片,免疫组化分析,脑组织匀浆用放免法测定细胞因子TNF-α。结果:AQP4主要表达在脉络丛、室管膜上皮、海马及水肿区,随着时间的延长,AQP4表达呈增高趋势。对应的病理改变为细胞内水肿、炎症反应。脑组织内细胞因子TNF-α在缺氧缺血性脑病2h与对照组相比即明显增加(P<0.05)。结论:AQP4和TNF-α与新生鼠缺氧缺血后的脑水肿关系密切,且二者之间可能有某种关系,抑制AQP4和TNF-α可为治疗新生儿缺氧缺血性脑病开辟新的途径。

水通道蛋白4与脑水肿

水通道蛋白4(AQP4)是一种选择性水通透的内在膜蛋白,脑胶质细胞及室管膜上皮细胞上有大量AQP4表达。它是胶质细胞与脑脊液以及血管间的水调节和转运的重要结构基础,并通过缓冲机制参与细胞间隙中K+代谢的调节和利用,还可能参与调节血浆的渗透压和控制垂体加压素的分泌。磷酸化参与AQP4的调控,实验证明了AQP4在创伤,脑水肿形成过程中起着重要的调节作用,脑缺血、缺氧引起的颅内水肿与AQP4密切相关。

早产超、极低出生体重儿动脉导管未闭早期床边结扎手术2例

早产超、极低出生体重儿动脉导管未闭（PDA）是临床上较常见的病症，可能会带来某些不良后果。部分病例常规药物治疗不能奏效。我院近期对2例早产超、极低出生体重儿PDA予早期床边手术结扎，效果良好，报告如下。

支气管肺发育不良与胱抑素C的关系探讨

目的主要探讨胱抑素C与支气管肺发育不良的关系。方法收集自2006年1月至2009年1月1日经本院新生儿科诊断为支气管肺发育不良的住院患者30例,对照组为胎龄、性别相匹配、同期在新生儿科诊治患者30例。抽取支气管肺发育不良及对照组全血3ml,分离血清,标本搜集完整后一起用颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)测定胱抑素C,数据资料用t检验分析。结果支气管肺发育不良组30例Cystatin C平均值为1.69mg/L,对照组30例,平均值为1.98mg/L,两组比较P<0.01。结论支气管肺发育不良中,CysC具有保护作用,半胱氨酸蛋白酶与其抑制物CysC之间否处于失衡状态,最终促发肺上皮细胞的凋亡,从而导致肺泡发育障碍。

茵栀黄口服液治疗新生儿高胆红素血症的护理

目的:探讨应用茵桅黄口服液治疗新生儿高胆红素血症的效果及护理观察、处理应注意的问题。方法:新生儿高胆红素血症患儿120例,随机分为实验组A、实验组B、对照组各40例,各组患儿性别、发病时间、治疗前血清总胆红素(T-BILI)水平无显著差异(P>0.05)。各组予以常规治疗基础上,实验组A应用茵桅黄口服液1mL/kg、实验组B应用茵桅黄口服液1.5mL/kg,均每天2次。各组分别于治疗前、治疗第4天、第7天检测血清T-BILI、间接胆红素(I-BILI)水平,比较各组检测指标、治疗效果的差异,观察药物副作用的发生情况。结果:各组患儿经治疗后T-BILI、I-BILI水平均明显下降,至治疗第7天下降明显,其中治疗第4、7天血清T-BILI、I-BILI水平实验组A、B分别与对照组比较有统计学意义(P<0.05),治疗第7天血清T-BILI、I-BILI水平实验组B与实验组A比较有统计学意义(P<0.05);实验组A、B治疗总有效率与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:茵桅黄口服液在治疗新生儿高胆红素血症具有良好疗效,药物副作用发生率不高,症状轻,停药后可恢复。

布地奈德悬液辅助治疗儿童肺炎支原体感染的疗效

目的:观察糖皮质激素吸入加抗过敏疗法对防治儿童肺炎支原体(MP)感染的疗效。方法:将100例MP感染患儿,在用阿奇霉素或红霉素治疗2～3周的基础上,实验组采用糖皮质激素吸入加抗过敏疗法,用药前后检测外周静脉血嗜酸性粒细胞(EOS)和总IgE(T-IgE)。结果:实验组的临床症状消失时间较普通治疗组显著缩短,且3个月内反复呼吸道感染次数减少(P<0.05)。其中,普通治疗组EOS和T-IgE均无明显变化;而糖皮质激素吸入加抗过敏疗法辅助治疗用药后EOS有明显下降(P<0.01),T-IgE水平基本无变化。结论:在缩短疗程方面,小剂量激素吸入疗法加抗过敏药物是首选的辅助疗法,能够促进儿童MP感染后的康复,降低复发频率,从而提高儿童MP感染的防治水平。

维生素K_1、新鲜冰冻血浆和冷沉淀对不同出生胎龄新生儿凝血指标的影响

目的:回顾性分析不同出生胎龄新生儿应用维生素K1(Vitamin K1,Vit K1)、新鲜冰冻血浆(血浆)和冷沉淀对凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fbg)、凝血酶时间(TT)的影响。方法:收集广州医科大学附属第三医院2009年2月至2012年9月新生儿科住院的新生儿1 134例,按照胎龄28-31+6周、32-33+6周、胎龄34-36+6周、胎龄≥37周进行分组,每组均分析使用Vit K1、Vit K1联合血浆以及Vit K1联合冷沉淀等干预措施前后PT、APTT、Fbg、TT的变化。结果:(1)各胎龄组使用Vit K1治疗后,PT、APTT均有改善,与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)各胎龄组使用Vit K1联合血浆后,PT、APTT、Fbg、TT均有改善,与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)各胎龄组使用Vit K1联合冷沉淀后,PT、APTT、Fbg均有改善,与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)Vit K1联合血浆对PT、APTT改善最大,Vit K1联合冷沉淀对Fbg改善最大。结论:使用维生素K1、新鲜冰冻血浆和冷沉淀能有效干预不同出生胎龄新生儿凝血指标。

组织多普勒对呼吸窘迫综合征早产儿心功能的评价

目的利用组织多普勒(tissue doppler imaging,TDI)技术定量评价早产儿合并新生儿呼吸窘迫综合征(infant respiratory distress syndrome,IRDS)的心功能情况,为临床治疗提供依据。方法选取我院出生且诊断为新生儿呼吸窘迫综合征的早产儿30例,并选取健康足月儿30例为对照组,抽血检验血清CK-MB,并进行心脏组织多普勒超声检查。测定左室射血分数(LVEF),测量二、三尖瓣环收缩期峰值速度(Sm)、舒张早期峰值速度(Em)及舒张晚期峰值速度(Am),并计算Em/Am。测定等容收缩期(ICT)与等容舒张期(IRT)时间之和及射血期时间(ET),计算左右室Tei指数。结果 IRDS早产儿组中27例(90.0%)合并心肌损害,肺动脉收缩压、血清CK-MB及左、右室Tei指数均明显高于对照组(P<0.05),而且右室Tei指数偏高于左室。血清CK-MB值与肺动脉压力升高呈正相关关系(r=0.375,P=0.003)。左室Tei指数随着肺动脉压力升高而显著升高(r=0.254,P=0.050)。结论早产儿合并新生儿呼吸窘迫综合征易伴有心肌损害。组织多普勒Tei指数对心功能的评估相对传统射血分数具有更高的敏感性,为临床提供一种更快速准确的评价方法。

脂多糖对人肺微血管内皮细胞骨架及TNF-α和IFN-γ表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)直接诱导人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)后细胞骨架的改变,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的表达水平的改变。方法 HPMVEC生长至80%以上融合时,加入LPS以500 ng/mL浓度刺激细胞分别至0、4、6、8 h,经鬼笔环肽染色后采用激光共聚焦显微镜观察HPMVEC细胞骨架的变化。至预定时相点离心收集培养液上清液,利用实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、IFN-γmRNA的表达,采用ELISA方法测定细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的表达水平,并进行统计学分析。结果 LPS刺激培养后,8 h组细胞开始出现细胞骨架改变;4 h组TNF-α、IFN-γmRNA表达与0 h组差异无统计学意义(P>0.05),6 h组TNF-α、IFN-γmRNA表达高于0 h组(P<0.05),8 h组TNF-α、IFN-γ表达高于0 h组(P<0.05);4 h组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平与0 h组比较差异无统计学意义(P>0.05),6 h组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平高于0 h组(P<0.05),8 h组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平高于0 h组(P<0.05)。结论细菌致病因子LPS能直接刺激HPM-VEC使细胞结构发生改变,同时影响细胞因子的分泌,使促炎因子TNF-α和IFN-γ分泌升高,参与肺损伤。这可能是LPS发挥其毒性作用诱发急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的一个重要途径。

ACE基因多态性与血管紧张素Ⅱ水平变化及新生儿缺氧性损伤的关系

目的探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性对血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平变化的影响及与新生儿缺氧缺血性损伤(HID)的关系。方法对有缺氧病史新生儿67例及足月健康新生儿32例行ACE基因多态性、AngⅡ等检测。结果实验组ACE基因型构成I/I29.85%,I/D49.25%,D/D20.90%,对照组62.50%,21.88%,15.62%(P<0.05);实验组I等位基因频率54.48%,D等位基因频率45.52%,对照组73.44%,26.56%(P<0.05)。实验组HID发生率I/I55.55%,I/D60.61%,D/D64.29%(P<0.05)。实验组与对照组I/I纯合子AngⅡ中位数149.52ng/L与92ng/L(P>0.05),非I/I纯合子秩和264.3ng/L与116.55ng/L(P<0.05)。实验组AngⅡI/I149.52ng/L,I/D280.40ng/L,D/D270.15ng/L,3组间有显著差异(P<0.05),I/I与D/D比较有显著差异(P<0.05),I/D与D/D间无显著差异(P>0.05)。结论携带D等位基因新生儿有易于发生HID的倾向,ACE基因多态性可能是HID发病机制的遗传学基础之一,对存在HID高危因素者行亲代及(或)胎儿ACE基因检查可能有助于HID高危筛选并籍此进行预防或早期干预。

新生儿耐药菌败血症的危险因素分析

目的探讨新生儿败血症致病菌分布情况,以及耐药菌所致败血症的高危因素。方法回顾性分析新生儿科出院的新生儿败血症患儿的临床资料,根据培养是否分离出耐药致病菌,分为耐药菌组及非耐药菌组,对其致病菌群分布以及耐药菌感染的高危因素进行对比分析及总结。结果共有205例病原菌培养阳性的败血症患儿入选,分离出致病菌共205株(均为单一菌株感染),其中革兰阳性菌107株(52.2%),以凝固酶阴性葡萄球菌为主。革兰阴性菌97株(47.3%),以肺炎克雷伯菌最常见;真菌1株(0.5%)。检出耐药菌112株(54.6%),耐药机制以产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌最常见,占所有耐药菌的51.8%。logistic回归分析提示母体产时感染、预防性使用抗生素、穿刺术及深静脉置操作、女性、益生菌治疗为耐药菌败血症的危险因素(OR=6.15、4.32、3.37、2.67、2.58,P<0.05)。结论新生儿败血症最常见致病菌为凝固酶阴性葡萄球菌,产ESBLs菌为致病菌中最主要耐药机制;减少母亲产时感染,合理地使用预防性抗生素,规范侵入性操作有可能减少耐药菌新生儿败血症的发生,但益生菌治疗、性别对耐药菌败血症的影响需要进一步研究。

非营养性吸吮联合音乐治疗对2～6月龄婴儿静脉采血疼痛的缓解作用

目的:观察非营养性吸吮(nonnutritive sucking,NNS)、音乐治疗(music therapy,MT)及非营养性吸吮联合音乐治疗(NNS+MT)在缓解2～6月龄急性支气管炎婴儿静脉采血疼痛中的作用。方法:收集2010年1月至2011年12月在广州市越秀区儿童医院住院部收治的2～6月龄急性支气管炎患儿108例作为研究对象,按照住院号从小到大顺序进行1、2、3、4循环编号,依次分为NNS组、MT组、NNS+MT组以及空白对照(Control)组。干预措施在采血前1min开始持续10min,Control组不予以干预措施。收集采血前后的HR、SpO2的数值变化并同时应用FLACC疼痛量表法进行评分,比较各种干预措施缓解疼痛的临床效果。结果:四组间基本情况均无统计学差异(P>0.05)。疼痛刺激后HR、SpO2和FLACC疼痛量表法评分的波动变化,由小到大依次均为NNS+MT组、MT组、NNS组、Control组。结论:2～6月龄急性支气管炎婴儿静脉采血疼痛可以通过NNS联合MT、MT或NNS来缓解,其中NNS联合MT效果最佳。

RhoA—Rock信号通路抑制剂对缺氧人肺微血管内皮细胞丝状肌动蛋白细胞骨架的影响

目的用RhoA—Rock信号通路抑制剂探讨肺出血时肺微血管内皮细胞的调控因素。方法人肺微血管内皮细胞常规培养，分为4组：对照组、抑制剂组、缺氧组和抑制剂缺氧组。异硫氰酸荧光素一鬼笔环肽与胞浆内丝状肌动蛋白（filamentous actin，F—actin）结合而发出红色荧光，共聚焦显微镜扫描观察F—actin的变化情况并记录相应荧光值。结果细胞缺氧组1h、12h和24h的F—actin平均荧光强度分别为对照组的（64．3±5．5）％、（60．3±4．2）％和（47．8±4．6）％；抑制剂缺氧组1h、12h和24h分别为对照组的（66．2±3．2）％、（67．1±6．2）％和（72．5±6．1）％。细胞缺氧组缺氧1h后，F—actin平均荧光强度降低[（64．3±5．5）％]，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），至缺氧24h，F—actin含量已下降至对照组的（47．8±4．6）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。抑制剂缺氧组缺氧1h后，F—actin平均荧光强度较缺氧组1h有所升高，为对照组的（66．2±3．2）％，抑制剂组缺氧24h后F．actin平均荧光强度为对照组的（72．5±6．1）％，与缺氧组缺氧24h相比差异有统计学意义（P〈0．05）。而抑制剂组不经缺氧的F—actin平均荧光强度与对照组相比无显著变化（P〉0．05）。缺氧后细胞皮质状结构消失，应力纤维排列紊乱，随着缺氧时间的延长，F—actin逐渐解聚断裂。用RhoA-Rock信号通路抑制剂预处理细胞后再缺氧，核周围F—actin所形成的皮质状结构重新出现，细胞浆内应力纤维的排列和分布趋向于规律，F—actin断裂减少。结论RhoA—Rock信号通路在肺微血管内皮细胞缺氧过程中介导了F—actin的损伤，用RhoA-Rock信号通路抑制剂干预可以为新生儿肺出血的治疗研究提供一个新的方向。

新生猪多器官功能障碍综合征模型建立的实验研究

目的探讨采用盲肠结扎加穿孔(CLP)建立新生猪多器官功能障碍综合征(MODS)模型的方法及实验与临床意义。方法选用健康长白新生猪14只,随机分成实验组(E组,n=9)和对照组(C组,n=5),实验组施行盲肠结扎加穿孔(CLP)制成MODS动物模型,对照组只行剖腹和盲肠探查术。动态观察两组血清生化指标(ALT,AST,ALB,BUN,Cr,CKMB,lac)及血小板、血气分析(PaO2,PaCO2)的变化,通过光镜观察动物各重要生命器官组织形态学变化。结果与对照组相比,实验组动物在CLP后血ALT,AST,BUN,Cr,CKMB,lac24h即已开始升高,48～96h明显升高,48h时ALT为83.0±9.3U/L、AST为348.8±132.9U/L、BUN为10.5±2.5mmol/L、Cr为79.2±9.0μmol/L、CKMB为5152.0±1857.8U/L、lac为12.3±4.0mmol/L(P<0.01),96h后开始有所降低,但仍高于0h;ALB24h后开始降低,各时间点均低于对照组,但差异无显著性;血小板24h开始降低,96h与0h比较差异有显著性;PaO2和PaCO248h时实验组与对照组差异有非常显著性(P<0.01);实验组动物死亡率与对照组差异有显著性(P<0.05),MODS的发生率为56%。实验组动物肺、肝、心、肾、胃肠道等器官均有不同程度的病理改变。结论CLP诱发了新生猪多个器官的功能障碍,该实验可用于新生动物MODS模型的探讨。

缺氧缺血新生大鼠脑组织水通道蛋白4的表达变化

目的研究缺氧缺血性脑损伤（HIBD）病理过程中水通道蛋白4（aquaporin-4，AQP-4）的作用及其意义。方法120只7日龄新生Wistar大鼠按照完全随机化方法分为4部分，每部分（n=30）再分为对照组、HIBD后6h、24h、3d、5d和7d共6组，每组5只。分别测定脑组织含水量；原位杂交和免疫组化检测AQP-4表达；检测脑组织病理变化。结果HIBD组6h、24h、3d的脑组织含水量较对照组显著增加（P〈0．05）；且各组脑组织含水量随时间延长而增加，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；HIBD5d、7d组脑组织含水量与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组AQP-4mRNA和AQP-4蛋白少量表达（吸光度A值为0．29±0．07和0．06±0．01）。与对照组相比，HIBD后6～24h，AQP-4mRNA和AQP．4蛋白表达显著增加。AQP-4mRNA的A值由0．42±0．04上升到0．80±0．02（P〈0．05）；AQP．4蛋白A值由0．14±0．03上升到0．23±0．05（P〈0．05），同时光镜下可见脑组织轻度水肿；3d时AQP．4mRNA和蛋白表达达高峰，AQP．4mRNA的A值为0．91±0．08，AQP-4蛋白A值为0．41±0．04，此时脑组织严重水肿，神经元、胶质细胞和内皮细胞明显肿胀；第5～7天AQP-4的表达已下降（尤其mRNA明显），但仍显著高于对照组（P〈0．05），此时脑水肿已减轻。在整个HIBD脑水肿形成的过程中，AQP-4mRNA和蛋白的表达呈正相关（rs〉0．82，只〈0．05）。结论AQP-4参与了HIBD的发生发展过程，AQP-4在HIBD脑水肿的形成过程中可能起重要作用。

谷氨酰胺及低乳糖配方乳对早产儿坏死性小肠结肠炎的预防

目的观察谷氨酰胺及低乳糖配方乳对早产儿坏死性小肠结肠炎(NEC)的预防效果。方法选取新生儿科病房收治的早产极低出生体质量儿90例按不同营养方式分为3组。A组:予常规静脉营养及母乳或配方乳喂养;B组:静脉营养及喂养方法与A组相同,另外胃肠喂养开始即添加谷氨酰胺口服(0.25 g.kg-1,2次.d-1);C组:静脉营养方法与A组相同,胃肠喂养采用低乳糖配方乳,另外添加谷氨酰胺口服(0.25 g.kg-1,2次.d-1)。3组患儿均于出生24 h内、出生5 d、10 d后取静脉血测定其胱抑素C(CysC)和超敏C反应蛋白(hsCRP),出生10 d取2 g左右患儿大便定性测定乳糖水平,并在出生30 d内分别计算各组患儿NEC的发生率。结果经过不同营养方法处理后,3组患儿hsCRP均逐渐升高,但喂养5 d及10 d后C组升高不明显,与A、B组比较差异有统计学意义;各组CysC逐渐升高,A组升高明显,C组升高不明显,在出生10 d时最低,与A、B组比较差异有统计学意义。3组患儿大便乳糖分析显示A组阳性率较高,C组最低。患儿NEC发生率A组为6.7%,B、C组发生率相同为3.3%,A组与B、C组比较差异有统计学意义。结论早产儿喂养谷氨酰胺联合低乳糖配方乳可以减轻炎性反应,增加乳糖吸收,降低NEC的发生,对NEC的发生起到一定预防作用。

极低出生体质量早产儿80例肺泡表面活性物质蛋白B外显子测序分析

目的了解肺泡表面活性物质蛋白B（SP—B）外显子基因多态性与早产儿呼吸窘迫综合征（RDS）易感性、严重程度及预后的关系。方法应用基因测序技术检测南方汉族人80例极低出生体质量早产儿SP—B外显子序列，把80例患儿分为RDS组和非RDS组，比较2组SP—B外显子基因型的差异。结果2组早产儿在胎龄、性别、出生体质量、分娩方式等方面差异均无统计学意义（P均〉0．05）。80例极低体质量早产儿中59例外显子有突变，突变位点有2种类型，V1：Exon2：c．[5A〉C]＋[5A〉C]或C．[5A〉C]＋[=]；V2：Exon5tC．[428C〉T]＋1428C〉T]或c．[428C〉T]＋[=]。RDS组45例中V1型20例、V2型18例、V1＋V2型3例，非RDS组V1型12例、V2型9例、V1＋V2型0例。V1和V2在2组的发生率比较差异均有统计学意义（X^2=3．73、5．02，P均〈0．05），2种多态性对于RDS的OR值分别为3．33和4．00。RDS组中SP—B外显子基因突变病例与未突变病例的疾病严重程度及预后差异无统计学意义（X^2=0．07，P〉0．05）。结论在中国南方汉族极低出生体质量早产儿中，SP-B外显子基因多态性是RDS的危险因素。

新生儿败血症45例病原菌分布及药敏分析

【目的】分析近二年广州医学院第二附属医院新生儿科新生儿败血症的病原体分布及药敏情况，为本地区新生儿败血症的治疗提供依据。【方法】在未使用抗生素前，无菌抽取患儿静脉血3～5mL．迅速注入PF培养瓶内，送细菌培养室进行血培养，阳性时转种血平板．阴性标本培养6d时盲转，ATB鉴定仪及其配套鉴定、药敏板条，质控用近代菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923。【结果】162份血培养标本中45例阳性，阳性率27．8％；共分离到11种病原菌，其中G＋菌为26株（57．8％）；G^-菌17株（占37．7％）。金黄色葡萄球菌巾耐甲氧西林金黄色葡萄球菌2例，阴性杆菌中产超广谱β-内酰胺酶4例，其中肺炎克雷伯菌3例，大肠埃希氏菌1例。新生儿败血症病原菌中对万古霉素、亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦敏感率高。为28％～52％，对第一三代头孢类抗生素中的头胞哌酬舒巴坦钠敏感率也达到11％。【结论】本院新生儿感染病原体以G^＋的凝固酶阴性葡萄球菌、G^＋的肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希氏菌为主,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和产超广谱β-内酰胺酶菌株比例增加。凝固酶阴性葡萄球菌所致新生儿感染日益增加值得进一步探讨。在无血培养结果的前提下，万古霉素、亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦敏感性高。

激光共聚焦扫描显微镜检测缺氧人肺微血管内皮细胞丝状肌动蛋白的变化

目的研究人肺微血管内皮细胞丝状肌动蛋白(F-actin)在缺氧前后的变化,探讨在血管内皮细胞水平研究新生儿肺出血机制的方法。方法人肺微血管内皮细胞常规培养,分为对照组和1、2、4、6、12 h和24 h缺氧培养组,每组设8个复孔,异硫酸氢荧光素-鬼笔环肽与胞浆内F-actin结合而发出红色荧光,共聚焦显微镜扫描观察F-actin的变化情况并记录相应荧光值。结果缺氧1 h组F-actin平均荧光强度明显降低,为对照组的66.3%±5.3%,差异有统计学意义(P<0.05),缺氧24 h F-actin含量下降至对照组的47.1%±6.9%。缺氧后,细胞变得狭长,细长的丝状伪足明显可见,核周F-actin的分布明显减少,皮质状结构消失,应力纤维排列紊乱或部分消失,随着缺氧时间的延长F-actin逐渐解聚断裂。结论通过观察缺氧前后肺血管内皮细胞F-actin变化,可以为在内皮细胞水平研究新生儿肺出血发病机制提供实验研究基础。

应用激光共聚焦扫描显微镜技术检测缺氧人肺微血管内皮细胞内钙离子浓度动态变化

目的:探讨应用激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)技术检测缺氧状态的人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)内钙离子(Ca2+)浓度动态变化的价值。方法:HPMVEC常规培养,按观察时间点不同分为5个缺氧培养组(1h hyp组、2h hyp组、4h hyp组、6h hyp组和8h hyp组)以及1个对照组(0h con组)共6个组,每组设8个复孔,应用LSCM技术测定缺氧后HPMVEC内Ca2+浓度水平及随时间推移的变化。结果:LSCM技术显示HPMVEC内Ca2+的荧光强度1h hyp组与0h con组比较、2h hyp组与1h hyp组比较、4h hyp组与2h hyp组比较、6h hyp组与4h hyp组比较、8h hyp组与6h hyp组比较有显著差异(P<0.05)。线性回归分析结果显示Ca2+荧光强度与缺氧时间成正相关(r=0.969,P<0.01)。结论:HPMVEC内Ca2+浓度随缺氧时间增长而增高;LSCM在动态检测缺氧状态下HPMVEC内的Ca2+浓度变化中具有明显优势。