抗猪传染性胃肠炎病毒重组S蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组S蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得2株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为C7C8B2和B5G8G7,其染色体平均计数均为88±10对,制备腹水抗体效价分别为1∶2×105和1∶104,分泌抗体亚类均为IgM型。2株杂交瘤细胞上清与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)均无交叉反应,与TGEV感染细胞经间接免疫荧光检测均呈黄绿色荧光。

DNA免疫制备猪传染性胃肠炎病毒S蛋白单克隆抗体

利用含有猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点的重组质粒PCI-Sa免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得1株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为E6D9A12,其染色体平均计数为88±10对,间接ELISA检测制备腹水抗体效价为1:6×105,分泌抗体亚类为IgG2a型。杂交瘤细胞上清与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)均不发生交叉反应;与TGEV感染细胞经间接免疫荧光检测均呈黄绿色荧光;与TGEV经Dot-ELISA检测呈特异性反应。

猪传染性胃肠炎病毒特异性受体APN功能区的初步鉴定

试验为了构建猪氨肽酶N（pAPN）不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化，经Western—blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区。试验构建重组了质粒pET30a—pAPN1（106～669nt）、pET30a—pAPN2（670-1044 nt）、pET30a—pAPN3（1045-1773nt）、pET30a—pAPN4（1774～2328 nt）、pET30a—pAPN5（2329—2889 nt）、pET30a—pAPN6（106—1044nt）、pET30a—pAPN7（1774—2889 nt）；转化宿主菌BL21（DE3）细胞，IPTG诱导表达蛋白，包涵体经SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳回收纯化；用Western—blot、ELISA方法经抗pAPN多克隆抗体初步筛选出pAPN受体功能区。结果表明：pET30a—pAPN2、pET30a—pAPN3、pET30a—pAPN6、pET30a—pAPN7蛋白均以包涵体形式表达并纯化。pET30a—pAPN3、pET30a-6、pET30a-7能与抗pAPN多抗产生特异性反应。经抗pAPN多抗筛选初步鉴定出其主要抗原功能区在36—153aa、349—591aa、592～963aa内。

抗李斯特氏菌溶血素单克隆抗体制备及检测LMO的初步应用

目的制备抗李氏溶血素单克隆(LLO)抗体,初步应用单克隆抗体检测LMO。方法以重组LLO为免疫原,以天然LLO为筛选蛋白,通过淋巴细胞杂交瘤技术,制备抗LLO单克隆抗体;以ELISA、Westernblot等方法对单克隆抗体进行鉴定;以阻断ELISA法进行检测LMO的探索。结果获得了1株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C4,经鉴定此单抗为IgG1型,属κ链抗体,杂交瘤细胞染色体数目在85～103。ELISA和Westernblot实验表明此单抗对LLO有较好的结合能力,对其他菌分泌的溶血素则无特异结合能力,用阻断ELISA检测LMO的检测时间和最低检测菌数分别为增菌后5h和9.5×105个/mL。结论研制了一株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞系,初步建立了阻断ELISA检测LMO的方法。

辽宁省官方兽医制式服装配置实践

为了解官方兽医制式服装配置现状,给优化管理政策提供参考,本文回顾了辽宁省官方兽医着装立法背景与意义,全面梳理了辽宁省官方兽医制式服装、标志设计及管理要求,强调了制式服装和标志的创新性,标志首个使用金黄色为主色调、首个设计帽徽并配发大盖帽(卷檐帽)。阐述了官方兽医统一着装的社会效应,总结分析了辽宁省官方兽医统一着装的做法和思考,以期为推动全国官方兽医统一着装提供参考。