富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5%,1.0%和2.0%β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5%,1%,2%β-巯基乙醇。测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A_(260/280)和A_(260/230);采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响。结果表明,不同处理组单链核酸含量、A_(260/280),A_(260/230)无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0%,2.0%β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5%β-巯基乙醇组,1.0%β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0%β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0%β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响。综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0%β-巯基乙醇是最佳提取方案。

十字花科黑腐病菌中甲基趋化受体蛋白的研究

趋化性是有运动能力的细菌对环境中的刺激物产生的趋向或离避行为。在细菌的趋化系统中,能够感应环境中化学物质浓度梯度的化学受体称为趋化受体。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestrispv. campestris, Xcc)是重要的植物病原菌,也是一种研究微生物与宿主互作机理的重要模式菌,然而关于Xcc 中趋化受体的研究还较少。本研究利用生物信息学技术对Xcc8004 中的21 个甲基受体趋化蛋白(methyl- accepting chemotaxis proteins, MCPs)进行功能域分析并构建了系统进化树。结果表明,Xcc 中MCP具有比较高的保守性。利用同源双交换法构建了MCP编码基因的缺失突变体,对这些突变体的生物学功能分析表明:21 个MCP编码基因突变后,皆影响Xcc 对糖类、氨基酸等趋化物的趋化性;大多数突变不影响细菌的运动性,但XC_2311、XC_2304、XC_1937、XC_2223 分别突变后,影响细菌的游动性和泳动性。