SD大鼠皮质骨来源间充质干细胞的培养与鉴定

【目的】研究大鼠皮质骨来源间充质干细胞（MSCs）的分离培养及鉴定的方法。【方法】取SPF级体质量60～80 g的SD大鼠3只,运用骨髓贴壁法及胶原酶消化皮质骨法培养间充质干细胞,进行形态学观察、体外增殖能力考察、细胞周期分析、细胞表面抗原免疫荧光鉴定,并采用茜素红染色和油红O染色鉴定所培养细胞的成骨与成脂分化潜能。【结果】胶原酶消化皮质骨法及骨髓贴壁法均能有效分离纯化大鼠MSCs,经形态学、细胞表面抗原免疫荧光鉴定、成骨及成脂分化能力检测证实为间充质干细胞。【结论】自骨髓及皮质骨均能实现间充质干细胞的分离纯化,但皮质骨间充质干细胞来源广泛,原代不受血细胞干扰,是骨髓来源间充质干细胞的很好补充。

补肾活血汤提取物促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的研究

【目的】筛选出补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞增殖的有效部位。【方法】补肾活血汤(全方组)及其拆方(补肾组、活血组)分别用溶剂极性递增法提取得石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇以及水4个部位。骨髓间充质干细胞采用全骨髓贴壁法培养,传至第3代采用表面抗原鉴定,成骨、成脂分化鉴定。将上述补肾活血汤提取物按浓度梯度处理细胞24 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,筛选出最有效部位及其最佳浓度。用补肾活血汤最有效部位处理细胞,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。【结果】与空白对照组比较,补肾活血汤及其拆方均具有不同程度维持细胞活性的作用。其中以补肾组乙酸乙酯部位、全方组乙酸乙酯部位及活血组乙酸乙酯部位最为有效,且呈一定的药物浓度依赖性,100μg/m L为最佳药物浓度,并未出现细胞毒性反应。细胞生长曲线显示:补肾活血汤有效部位处理细胞后,细胞增殖速度与数量较对照组更为明显,以补肾组最有效,全方组次之。流式细胞仪检测细胞周期结果显示:补肾活血汤有效部位处理细胞后,处于增殖期细胞数量明显多于空白对照组,以补肾组最有效,全方组次之。【结论】补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞增殖的有效部位在补肾组乙酸乙酯部位,可使骨髓间充质干细胞处于增殖期细胞数目增多。

补肾活血法调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的实验研究

目的:探讨补肾活血汤及其拆方含药血清调控大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活性的作用。方法:体外骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,取第3代细胞,免疫荧光法鉴定细胞表面抗原,成骨及成脂诱导证实其多向分化潜能;实验分为补肾活血汤全方组、补肾组、活血组及空白对照组,运用补肾活血汤及其拆方含药血清干预第3代BMSCs 48h,并用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:MTT结果显示:体积分数5%及10%补肾活血汤全方含药血清均有促进大鼠BMSCs增殖的作用;流式细胞仪检测细胞周期显示:运用补肾活血汤含药血清干预后,处于增值分裂期(S+G2+M期)的BMSCs百分率增多,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血汤全方含药血清有促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的作用。

近节指动脉背侧支为蒂的掌指背皮瓣修复手指中远节软组织缺损

目的总结以近节指动脉背侧支为蒂的掌指背皮瓣修复手指中远节软组织缺损疗效。方法 2011年4月-2014年4月,收治10例(13指)手指中远节皮肤软组织缺损患者。男7例,女3例;年龄12~56岁,平均35岁。致伤原因:压砸伤6例,挤压伤2例,热压伤1例,切割伤1例。损伤指别:示指8例,中指4例,环指1例。手指缺损面积2.5 cm×1.5 cm^6.0 cm×3.5 cm。设计以近节指动脉背侧支为蒂的掌指背逆行岛状皮瓣修复创面,皮瓣切取范围3.0 cm×2.0 cm^7.5 cm×4.5 cm。供区直接缝合或游离植皮修复。结果术后2~3 d,3例(3指)皮瓣出现肿胀、张力性水疱,经对症处理成活;其余皮瓣及供区植皮均成活,创面Ⅰ期愈合。患者均获随访,随访时间8~18个月,平均14个月。皮瓣质地、弹性好,外观饱满。术后8个月,皮瓣两点辨别觉8~10 mm,平均8.9 mm;手功能按中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准评定:优6例,良3例,可1例。结论采用以近节指动脉背侧支为蒂的掌指背逆行岛状皮瓣修复手指中远节软组织缺损,符合皮瓣就近转移的原则,手术切取简便,疗效肯定。

补肾活血汤治疗老年桡骨远端骨折的临床疗效观察

目的:观察补肾活血汤治疗老年桡骨远端骨折的疗效。方法:对57例老年性桡骨远端骨折患者按随机数字表法分为治疗组、对照组。骨折复位、稳定固定后,治疗组予补肾活血汤内服4周,对照组不服中药,其他治疗与治疗组保持一致。通过定期X-ray复查进行桡骨远端骨折愈合评分(Radius Union Scoring System,RUSS),确定骨折愈合时间,骨折愈合后采用Gartland-Werley、PRWE(Patientrated Wrist Evaluation)评分标准对腕关节功能进行评价。结果:RUSS评分,第2、4、6周治疗组与对照组比较,差异有统计学意义,第8周两组比较,差异无统计学意义;治疗组(5.14±1.21)周与对照组(5.97±1.15)周骨折愈合时间比较,差异有统计学意义;Gartland-Werley评分,治疗组(6.18±2.57)与对照组(8.04±3.16)两组比较,差异有统计学意义;PRWE评分,治疗组(14.62±5.73)与对照组(18.74±6.91),两组比较,差异有统计学意义。结论:补肾活血汤具有促进老年性桡骨远端骨折愈合、缩短骨折愈合时间、改善骨折后腕关节功能的作用,临床上值得推广。