亚砷酸诱导的老年急性早幼粒细胞白血病早期死亡分析

目的分析经单药亚砷酸(arsenic trioxide,ATO)诱导治疗的老年(年龄≥60岁)初发急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)的早期死亡(early death,ED)发生情况及预测因素。方法收集连续收治的71例老年APL患者和456例年轻APL患者的临床资料。选取临床上可以快速获取的10个临床及实验室检测参数,采用χ^(2)检验及Logistic回归模型进行统计学分析。结果老年患者的ED率(22.5%,16/71)高于年轻患者(15.1%,69/456),但差异无统计学意义(P=0.115)。老年感染相关ED(8.5%)和血栓相关ED(2.3%)的发生率均显著高于年轻患者(分别为2.0%和0.3%),差异有统计学意义(P<0.01)。男性和白细胞计数>10×10^(9)/L是两组患者ED的共同独立风险因素,低白蛋白血症(P<0.001)和血清纤维蛋白原<1g/L(P=0.001)还是年轻患者ED的独立风险因素。结论单药ATO诱导治疗的老年APL患者的入院临床特征、ED发生情况及风险因素与年轻患者明显不同。因此,有必要对APL患者的ED情况进行年龄分层研究。

细菌脂多糖对急性胰腺炎大鼠核因子-κB及肿瘤坏死因子的影响

目的探讨细菌脂多糖(LPS)对大鼠实验性急性胰腺炎(AP)核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA及病理改变的影响,了解LPS在AP发生中的作用。方法24只Wistar大鼠分为3组:AP组、LPS干预组及对照组;AP组蛙皮素诱导产生AP;LPS干预组在AP组基础上,给予腹腔内注射大剂量LPS(2mg/kg);对胰腺组织标本进行病理评分;RT-PCR检测胰腺组织中TNF-αmRNA表达的变化;应用流式细胞术(FCM)检测NF-κB表达的改变。结果与AP组相比,病理结果显示,LPS干预组胰腺组织水肿程度及炎性细胞浸润和坏死明显加重,胰腺组织损伤程度明显加重(病理评分7.21±0.53vs,3.65±0.37,P<0.01);FCM显示由于LPS的作用,NFκB的表达明显上调(61.28±7.56vs,41.13±11.72,P<0.05),胰腺组织内炎性介质TNFαmRNA的表达也同步上调(3.798±0.438vs,2.856±0.365,P<0.05)。结论LPS有加重AP病情的作用,其可能机制是LPS通过激活NF-κB及TNF-α从而实现了上述病理损害。

急性早幼粒细胞白血病细胞来源微粒在凝血紊乱中的作用研究

目的:评估急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞来源微粒(microparticle,MP)及其携带的组织因子(tissue factor,TF)在患者高凝状态中的作用,以及化疗/分化治疗药物对MP促凝血活性(procoagulant activity,PCA)的影响。方法:提取5例APL患者和年龄性别相匹配的5例缺铁性贫血患者(对照)的骨髓单个核细胞(MNC),体外培养48 h,收集含MP细胞培养液和去MP细胞培养液,从一定体积的含MP细胞培养液中提取MP。采用ELISA法检测MP上TF的表达,应用凝血酶生成实验检测含MP细胞培养液和去MP细胞培养液的PCA,利用人TF特异抗体检测TF在MP相关PCA中的作用。测定全反式维甲酸(ATRA)、三氧化二砷(ATO)和柔红霉素(DNR)处理APL细胞48 h后MP的PCA。结果:对照者骨髓MNC释放的MP几乎无TF表达,而APL细胞来源的MP明显表达TF。无论是APL患者骨髓MNC还是对照者骨髓MNC,释放的MP均具有明显的PCA,但与对照者骨髓MNC释放的MP相比,APL患者骨髓MNC释放的MP的PCA更高。TF在对照者骨髓MNC释放的MP的PCA中几乎无作用,而在APL患者骨髓MNC细胞来源的MP的PCA中发挥重要作用。DNR处理的APL患者骨髓MNC能使其释放的MP的PCA增高,而ATO和ATRA的作用则完全相反。结论:APL患者骨髓MNC来源的微粒具有明显的PCA,而TF在这一活性中发挥着重要作用。化疗药物DNR可增强APL患者骨髓MNC释放的MP的PCA明显。

BI-1蛋白及其相关调控因子在非小细胞肺癌细胞系中的表达研究

目的研究凋亡抑制因子BI-1及其相关调控因子Bcl-2、Bcl-XL在非小细胞肺癌细胞系中的表达差异,分析BI-1与Bcl-2、Bcl-XL的相互作用关系。方法以9种非小细胞肺癌细胞系(NSCLC)为实验材料,采用RT-PCR和Western印迹技术在cDNA和蛋白水平检测3种基因的表达。结果发现BI-1在NSCLC中高表达,Bcl-2表达较低(在A549、PAa、GLC-82和SPC-1-A几乎检测不到),Bcl-XL表达较稳定,且明显高于Bcl-2。结论在NSCLC细胞中,BI-1主要与Bcl-XL形成蛋白复合体作用于凋亡通路。

三氧化二砷抗肿瘤机制的研究进展

近年来,三氧化二砷在白血病等各种恶性肿瘤治疗的基础研究和临床实践方面已取得了长足的进步。本文从其诱导肿瘤细胞凋亡、对癌细胞的靶向作用、对抑癌基因的去甲基化作用以及抑制肿瘤细胞生长和肿瘤新生血管形成等方面对三氧化二砷抗癌作用机制的研究进展进行综述。

高温快速消化与国标消化的凯氏定氮法测定蛋白质含量的比较研究

目的比较高温消化与国标消化的凯氏定氮法检测蛋白含量的准确性与稳定性有无差异,以达到简化操作、节省时间的目的。方法分别用国标消化与高温消化法对50 g/L蛋白校准液(重复15次)及15份人血白蛋白样品的蛋白含量进行检测。结果高温消化与国标消化法检测蛋白含量结果:蛋白校准液分别为49.91 g/L±0.00 g/L和49.95 g/L±0.00 g/L(t=1.1602,P<0.05);人血白蛋白样品分别为:97.65 g/L±0.55 g/L和97.61 g/L±0.57 g/L(t=0.5762,P<0.05)。两种检测方法的回归分析Y=0.9987X+0.0797,R2=0.9999。高温消化法的蛋白回收率为98.0%。结论高温快速消化的凯氏定氮法检测蛋白含量结果和国标规定方法无差异,但比国标规定方法可以大大缩短工作时间,提高工作效率,值得进一步推广。

生存素反义寡核苷酸诱导脑胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

目的观察生存素(Survivin)反义寡核苷酸(ASODN)抑制Survivin蛋白表达对胶质瘤C6细胞凋亡、增殖的影响。方法用载有Survivin mRNA特异性ASODN的脂质体转染C6细胞后,用Western blot法检测Survivin蛋白表达情况,MTT实验观察C6细胞生长抑制情况,流式细胞术分析细胞凋亡程度。结果脂质体及Survivin正义寡核苷酸(SODN)对C6细胞生长、Survivin蛋白表达无明显影响(P>0.05),而Survivin A-SODN对C6细胞生长及Survivin蛋白表达有明显的抑制作用(P<0.01);以脂质体单独转染后,C6细胞凋亡水平无明显变化(P>0.05),以SODN转染后则较多细胞发生了凋亡(与空白对照组比较,P<0.05),而SurvivinASODN转染后C6细胞凋亡数显著增多(与其他各组比较,P<0.01)。结论Survivin ASODN能靶向抑制Survivin蛋白的表达,从而解除其对凋亡的抑制作用,诱导胶质瘤细胞凋亡的发生,最终抑制胶质瘤细胞的生长。

柔红霉素对急性早幼粒细胞白血病细胞释放的微粒的数量及促凝活性的影响

目的:研究柔红霉素(DNR)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞释放的微粒(MP)的数量及其促凝活性的影响。方法:提取5例初发APL患者骨髓APL细胞;提取5例缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞作为对照。用不同浓度的DNR(0.1,0.5,1.0和2.0μmol/L)处理APL细胞24 h,收集细胞培养液提取MP。透射电子显微镜观察提取的微粒的形态学特点,并对其进行定性分析。流式细胞术检测MP数量;应用一步复钙时间法测定MP的促凝血活性。结果:提取的微粒呈现出圆形或椭圆形的中空囊性结构,其直径为100 nm左右,符合微粒的形态学特点。与正常骨髓单个核细胞释放的MP数量相比,骨髓APL细胞释放的MP数量增加(P<0.05)。DNR促进APL细胞释放MP,且这一作用呈剂量依赖性(r=0.73,P<0.01)。与对照组骨髓单个核细胞释放的MP相比较,APL细胞释放的MP促凝活性显著增高(P<0.05)。DNR处理可显著增强MP的促凝活性,且这一作用呈剂量依赖性(r=-0.78,P<0.01)。结论:DNR可促进APL细胞释放MP,并且增强这些MP的促凝活性。

急性早幼粒细胞白血病凝血紊乱机制及诱导治疗期间凝血纤溶参数的变化

急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者极易发生出血及血栓并发症,其凝血紊乱的临床表现和实验室检查特征与传统的脓毒性弥散性血管内凝血明显不同。研究认为APL凝血紊乱的主要发生机制包括外源凝血通路激活和原发纤溶亢进,直接依据包括组织因子、癌性促凝物及膜联蛋白Ⅱ表达增加。常见的诱导缓解药物有全反式维甲酸、亚砷酸及蒽环类药物为主的化疗,且各疗法诱导治疗过程中凝血纤溶参数的变化各有差异。现就APL凝血紊乱发生机制的研究进展及诱导治疗期间凝血纤溶参数的变化作一综述。

复发急性早幼粒细胞白血病患者早期死亡风险因素分析

目的本研究分析了接受亚砷酸(ATO)单药诱导治疗血液学复发的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者早期死亡(ED)的发生率,病因和预后因素,以期为临床实践中患者入院后数小时内快速鉴别出ED高风险病例提供帮助。方法收集笔者医院近9年收治的96例连续接受单药ATO诱导治疗过程中发生血液学复发的APL患者临床及实验室资料,选择了11个临床参数作为候选ED风险因素进行单变量和多变量统计学分析。结果共有22例患者(22.9%)发生了ED,ED的最主要原因为出血,其次为分化综合征、感染和其他原因。男性、白细胞计数>10×10^9/L、D二聚体>4mg/L、血浆尿酸>正常和血浆肌酐>正常是复发APL患者ED的独立危险因素。结论本研究提供的临床相关信息可能会为复发APL患者设计风险适宜的治疗方案最终降低ED率提供帮助。

急性早幼粒细胞白血病早期死亡风险分级法构建

目的构建急性早幼粒细胞白血病(APL)早期死亡(ED)风险分级法,用独立的患者集验证该分级法的预测效果。方法回顾性分析了笔者医院近8年收治的285例连续的、亚砷酸(ATO)单药诱导治疗的初发APL患者的临床数据。患者随机分为训练集(230例)和验证集(55例)。性别、年龄、天冬氨酸氨基转移酶、白蛋白、肌酐、纤维蛋白原(FIB)和D-二聚体水平、外周血白细胞(WBC)计数和血小板(PLT)计数9个变量纳入研究。将所有的数值变量进行二分类转化。各个变量与ED之间相关性的单因素和多因素分析均采用Logistic回归模型。使用Hosmer-Lemeshow检验对模型拟合度进行检测,采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积对模型的预测效能进行评估。结果经过单因素和多因素分析,最终性别、年龄、血浆肌酐、FIB、D-二聚体水平和WBC计数6个变量进入模型。经训练集和外部验证集分别验证,证实该模型具有良好的拟合度和ED预测效能。采用训练集数据,利用该模型构建了ED风险分级法。单因素分析结果显示,无论在训练集还是在独立的外部验证集中,该ED风险分级法都与ED的发生密切相关(P<0.05)。结论针对ATO单药诱导治疗的APL患者,本研究建立了ED风险分级法,该方法可以有效地在患者入院早期即快速鉴别出发生ED风险高的APL患者。

肿瘤来源微粒在肿瘤发生发展及诊断治疗中的作用

肿瘤来源微粒（ Tumor－derived microparticles，TMPs）是由激活或凋亡的肿瘤细胞释放的直径0．1～1．0μm的细胞外囊泡。它含有其来源细胞的生物活性成分，包括核酸和蛋白质。本文就TMPs在肿瘤发生发展和诊断治疗中作用的研究进展做一综述。

细胞释放的微粒的检测方法研究进展

微粒(MPs)是由活化或凋亡的血液细胞、血管内皮细胞、肿瘤细胞释放的直径0.1~1.0μm的小囊泡,具有广泛的生物学活性,与多种疾病的发生、发展密切相关。由于MPs极小,常规检测方法的敏感度和分辨率常常是不够的,使得MPs的检测受到很大限制。本文简单介绍了目前一些常用的MPs的检测方法,包括定性和定量检测方法,分析了各个方法的优势和不足,为微粒检测分析时方法的选择提供参考,但MPs的临床检测尚有待MPs检测方法的进一步标准化。

清胰汤对伴有内毒素血症的急性胰腺炎大鼠炎症反应的调节

目的清胰汤治疗急性胰腺炎(AP)尤其是并发内毒素血症的AP的效果及其可能的机制。方法Wistar大鼠40只,随机分为5组:A组(对照组),B组(AP组),C组(清胰汤处理的AP组),D组(伴有内毒素血症的AP组),E组(清胰汤处理的伴有内毒素血症的AP组);各组分别取胰腺组织行病理学检查并评分,用半定量RT-PCR检测TNF-αmRNA的表达水平,流式细胞术(FCM)检测NF-κB的激活。结果胰腺组织TNF-αmRNA表达水平,NF-κB激活及病理损伤AP组较对照组均明显升高,使用LPS可刺激NF-κB的激活并引起TNF-αmRNA表达的进一步升高及病理损伤的进一步加重,证实了NF-κB对TNF-α的调节作用及其与AP病理改变严重程度之间的关系;在使用了清胰汤干预后,可显著降低NF-κB激活及TNF-α的水平,同时也减轻了胰腺的病理损害。结论清胰汤通过下调NF-κB的活性及TNF-α的表达而发挥治疗AP及伴有内毒素血症AP的作用。

急性早幼粒细胞白血病合并弥散性血管内凝血亚砷酸诱导治疗疗效分析

目的:探索急性早幼粒细胞白血病(APL)合并弥散性血管内凝血(DIC)患者亚砷酸(ATO)诱导治疗的疗效及治疗过程中凝血相关临床特征及实验室指标的变化情况。方法:前瞻性收集我院血液内科2014年7月-2016年12月期间收治的初诊和复发APL合并DIC患者24例,于给予ATO诱导治疗前(第0周)及治疗第1、2、3周,血液学完全缓解(HCR)时完善相关检查。每例患者设立正常对照1名。结果:24名患者中初发21例,复发3例,所有患者均有出血症状。最常见出血为皮肤粘膜出血。经过ATO诱导治疗后,21例患者(87.5%)达HCR,2例患者死于脑出血,1例患者达部分缓解。患者第0周(治疗前)凝血酶原时间(PT)显著延长,D-二聚体(DD),纤维蛋白原(FIB)显著降低,纤维蛋白原降解产物(FDP)明显增高(P<0.001),ATO治疗1周时出血症状、PT、FIB基本纠正,DD、FDP改善明显,但DD、FDP直到HCR时仍高于正常。结论:ATO单药治疗APL合并DIC的HCR率高,并能在1周内迅速减轻凝血紊乱,但患者达HCR时凝血紊乱仍不能完全纠正。PT、FIB、DD、FDP可作为判断ATO治疗APL合并DIC疗效的重要参数。

全反式维甲酸及依托泊苷对急性早幼粒细胞白血病细胞磷脂酰丝氨酸暴露及促凝血活性的影响

目的:探讨磷脂酰丝氨酸(PS)暴露在急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞促凝血活性中的作用及不同药物对其产生的影响。方法:实验共分为4组:新采集APL细胞组、APL细胞单纯培养组、APL细胞全反式维甲酸(ATRA)处理组及APL细胞依托泊苷(VP16)处理组。提取10名初发APL患者的骨髓APL细胞进行实验,提取10名健康成人外周血单个核细胞作为凝血实验的正常对照。分别用1μmol·L-1ATRA和1μmol·L-1VP16处理APL细胞24 h,利用共聚焦显微镜及流式细胞术检测各组细胞PS暴露情况。利用凝血实验检测各组细胞总的促凝活性及细胞表面磷脂的促凝血活性。利用PS特异结合蛋白乳粘素对各组细胞进行凝血抑制实验。结果:新采集的APL细胞存在一定量的PS外翻,并且与外周血单个核细胞相比,存在更高的促凝血活性(P<0.05),ATRA对APL细胞的PS外翻及促凝活性有抑制作用(P<0.05),VP16则对其有显著的促进作用(P<0.001)。乳粘素可以拮抗APL细胞至少70%的促FXa和FIIa生成活性。结论:PS暴露在APL细胞促凝血过程中发挥着重要作用。分化治疗药物ATRA和化疗药物VP16分别通过减少和增加APL细胞表面PS的暴露来减轻和加重凝血紊乱。乳粘素通过与PS特异结合可以有效地阻断暴露的PS的促凝活性,是一种潜在的治疗APL凝血紊乱的抗凝剂。

三氧化二砷对急性早幼粒细胞白血病细胞微粒数量及促凝活性的影响

目的:观察急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞来源微粒(APL-MP)的促凝活性、表面组织因子(TF)表达情况、TF在其促凝活性中发挥的作用及分化治疗药物三氧化二砷(ATO)对上述指标有何影响。方法:选取3例初发APL患者,提取骨髓APL细胞,3名缺铁性贫血患者提取骨髓单个核细胞作为对照。分别用不同浓度ATO处理APL细胞24 h、48 h、72 h,收集细胞培养液提取微粒。采用流式细胞术对微粒进行定量分析并进行微粒表面TF表达情况检测;利用凝血实验比较不同组细胞释放微粒的促凝血活性;应用抗TF抗体抑制微粒促凝血活性实验检测TF在APL-MP的促凝血活性中发挥多大作用。结果:1.0μM及2.0μM ATO能显著促进APL细胞释放微粒。与正常骨髓来源单个核细胞释放的微粒相比,骨髓APL-MP的TF表达及促凝活性均显著增高,0.5μM及1.0μM ATO处理可以有效降低APL-MP的TF表达及促凝活性,且这一作用呈时间依赖性。各组APL-MP经抗TF抗体孵育后凝血时间显著延长。结论:APL-MP的TF表达和促凝学活性均显著增高,并且TF在APL-MP的促凝血活性中发挥着重要作用。ATO能显著促进APL细胞释放微粒,低浓度ATO可以有效降低APL-MP的TF表达及促凝血活性。

急性早幼粒细胞白血病亚砷酸治疗后的微量残留病检测

90％以上的急性早幼粒细胞白血病（APL）患者存在特征性染色体易位t（15；17）（q22；q21），导致PML—RARα融合基因形成成为APL的特异性分子标志。近年来由于全反式维甲酸及三氧化二砷（ATO）的临床应用，使得APL疗效显著提高。然而微量残留病（MRD）是APL复发的根源。