基于转录组测序分析葡萄籽原花青素对HepG2细胞基因及其相关功能的影响

目的:基于转录组测序分析葡萄籽原花青素对HepG2细胞基因及相关功能的影响,明确原花青素处理HepG2细胞的关键基因及代谢通路。方法:通过转录组测序,筛选差异基因,基因功能注释和KEGG通路的富集分析,进行葡萄籽原花青素处理细胞后的转录组学研究。结果:葡萄籽花青素处理HepG2细胞后主要富集到的生物学过程为细胞过程、代谢过程、生物调控过程、免疫系统过程、繁殖调节、生长调节。细胞凋亡的12个关键差异基因与TNF、p53、MAPK、PI3K-Akt、NF-κB信号通路密切相关。结论:细胞凋亡与TNF信号通路、p53信号传导途径、PI3K/Akt信号通路、NF-κB信号通路、MAPK信号通路密切相关。

人参皂苷F2对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的改善作用

作为人参的主要生物活性物质,多数人参皂苷已被证实具有良好的抗炎作用,但是其抗炎机制研究较少,尤其是人参皂苷F2。因此,该研究基于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7细胞产生炎症,构建体外细胞炎症模型,探究人参皂苷F2的抗炎作用。细胞活力实验表明人参皂苷F2在100μmol/L内对细胞无毒性作用,为安全浓度范围。人参皂苷F2可以显著抑制LPS刺激RAW264.7细胞NO释放,且呈剂量依赖性抑制(0~100μmol/L)。人参皂苷F2(50、100μmol/L)也呈剂量依赖性抑制一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达,100μmol/L时显著抑制iNOS和TNF-α的mRNA表达。经人参皂苷F2处理可显著下调iNOS蛋白表达,但对COX2蛋白表达无显著促进作用(P>0.05)。此外,经扫描电镜(SEM)观察,100μmol/L人参皂苷F2处理可以显著改善LPS刺激RAW264.7细胞的细胞形态改变。蛋白印迹表明,人参皂苷F2提高了PDK1、AKT、IκB-α蛋白的表达,降低了AKT蛋白磷酸化、NF-κB的核易位。该文研究结果表明人参皂苷F2具有较好的抗炎作用,并可能通过AKT/IκB-α/NF-κB信号通路发挥其抗炎作用,可为相关天然抗炎药物的开发提供理论支撑。

一步法制备大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞及转化条件优化

大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法制备对BL21菌株的适用性,并对转化过程中的关键参数进行探索和优化。结果表明,该一步法制备的BL21菌株感受态细胞可获得106CFU/μg DNA转化效率,完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的最佳条件为冰水浴30 min,室温放置10 min,37℃、150 r/min振荡复苏40 min。

多菌灵微生物降解研究进展

多菌灵是一种高效广谱的内吸性杀菌剂,广泛应用于作物的病害防治和工业杀菌。其化学性质稳定,在环境中残留期较长,对环境和人类的健康均构成严重威胁。本文从微生物菌株资源、代谢途径及关键酶和基因等几个方面综述了国内外对多菌灵微生物降解的最新研究进展。为多菌灵污染环境的微生物修复提供参考。

重视和发挥机构投资者在公司治理中的作用——安然事件的启示

机构投资者在公司治理中的作用 ,是以往我们所忽视的。机构投资者参与公司治理有其经济学根源 ,它既不同于控股股东的行为 ,也不同于其他中小股东的行为 ,具体参与途径可体现为“用手投票”与“用脚投票”的不同侧重。应大力倡导这种发展趋势 ,构建促进机构投资者参与公司治理的外部和内部机制。

绿色荧光蛋白在生物类本科专业实验教学中的应用

在分子生物学和基因工程本科实验教学中,以绿色荧光蛋白基因gfp为材料,进行了PCR扩增,TA克隆,重组表达载体构建及外源基因在大肠杆菌中的表达等实验教学。该方案包含了完整的基因克隆和表达的实验操作,过程清晰,内容充实,体系完整,结果直观且明确,利于同学们理解和掌握,取得了很好的教学效果。

绿色荧光蛋白在微生物发酵工程实验教学中的应用

在微生物发酵工程实验教学过程中,将绿色荧光蛋白基因gfp构建到大肠杆菌表达系统中,并以绿色荧光蛋白GFP为目标产品,进行微生物发酵及下游工程的蛋白纯化实验教学,取得了较好的教学效果。

耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效表达

高温α-淀粉酶是发酵行业用量最大的酶类,为了实现高温α-淀粉酶基因的高效表达,本研究比较了不同启动子对地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中表达的影响.分别用强启动子P43和地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因自身启动子构建了表达载体pP43NMK-amy和pUBC19-amy,并在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis1A752S中进行表达.结果表明,与地衣芽孢杆菌的耐高温α-淀粉酶基因自身启动子相比,采用P43启动子的耐高温α-淀粉酶其表达水平提高了8.9倍.而且在枯草芽孢杆菌B.subtilis1A752S中分泌表达的α-淀粉酶仍具有耐高温的特性,酶反应的最适温度为90℃,表明酶的热稳定性由蛋白质本身的氨基酸序列决定的.

生物膜中群体感应因子细菌的分离及成膜能力

从硝基苯甲酸废水处理系统的生物膜中分离到2株分泌酰基高丝氨酸内酯(AHL)群体感应信号分子的菌株M10和M22,测试表明M10产生4种AHL信号分子,M22产生3种AHL信号分子.以E.coliDH5α为对照,测定了这2株菌的成膜能力及群游力,M10和M22均表现出一定的成膜力和群游力,对比而言,M22的成膜能力较强,而M10的群游能力较强,M10和M22经个体形态、生理生化反应及16SrDNA测序初步鉴定均属Aeromonassp..

3,5-二硝基苯甲酸降解菌A3的分离及降解特性

从硝基苯类化合物废水处理系统中分离到一株3，5-二硝基苯甲酸降解菌株A3，经形态特征、生理生化以及16S rDNA序列分析，初步鉴定为睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni）．该菌能以200mg/L3,5-二硝基苯甲酸为唯一碳源，12h的降解率可达95％以上，24h可溶性有机碳（DOC）由72．5mg/L降至10．2mg／L。表明3，5-二硝基苯甲酸被降解矿化而不是被转化成其他有机物．当A3以200mg/L3,5-二硝基苯甲酸为唯一碳、氮源时，将底物转化为一种黄色代谢产物，该产物不易进一步降解．A3降解3，5-二硝基苯甲酸的适宜温度为20-30℃。最适pH值为5-9．

控制权机制对公司治理的影响

一、股权结构与公司治理 关系分析的误区 近年来，股权结构问题一直是国内学术界关注的热点，因为股权结构问题是影响公司治理结构进而影响企业绩效的重要原因。然而，我们注意到，对...

高温放线菌分类的研究进展

回顾了高温放线菌的分类历史、分类地位的变化,阐述了高温放线菌的最新分类研究进展,并描述了高温放线菌5个属的特征和各自的模式菌株。

取代脲类除草剂降解菌鞘氨醇杆菌(Sphingobium sp.)Pu21的分离和鉴定与降解特性

[目的]分离取代脲类除草剂的高效降解菌,为农药污染土壤的生物修复提供理论依据和物质基础。[方法]从农药厂废水处理池的活性污泥中分离筛选到1株取代脲类除草剂的高效降解菌株,结合形态、生理生化特征和16S rRNA基因序列对其进行鉴定,并研究其降解特性和降解途径。[结果]经鉴定,菌株Pu21为鞘氨醇杆菌(Sphingobium sp.),该菌能同时降解N,N-二甲基取代脲类除草剂异丙隆和N-甲氧基-N-甲基取代脲类除草剂利谷隆。外界温度在25~35℃时对异丙隆和利谷隆降解影响较小,降解2种除草剂的最适温度均为35℃。在初始p H值为6.0~8.0时皆能快速降解异丙隆和利谷隆,最适p H值均为7.0。外加葡萄糖或麦芽糖时,对异丙隆的降解没有影响,但能提高利谷隆的降解,加入蛋白胨或酵母粉后2种除草剂的降解效率都显著提高。降解谱试验表明,菌株Pu21还可以降解敌草隆、伏草隆、绿麦隆、甲氧隆、灭草隆、非草隆和绿谷隆。依据HPLC和MS/MS结果,推测Pu21降解异丙隆途径为:异丙隆脲基侧链N-上脱甲基生成1-(4-异丙基苯基)-3-甲基脲(MDIPU),接着脱甲基生成1-对异丙基苯基脲(DDIPU),断开脲桥形成对异丙基苯胺(4IA)。利谷隆降解途径为:利谷隆脲桥直接断裂生成3.4-二氯苯胺(3,4-DCA)。[结论]菌株Pu21具有优良的降解能力,且降解底物谱广,在取代脲污染土壤的生物修复或生产废水生物强化处理中应用前景广阔。

多菌灵降解菌株djl-10的分离及降解特性

从多菌灵生产废水处理系统中,通过富集和选择性培养,分离得到1株能高效降解多菌灵的细菌,并将其命名为djl-10。根据菌株的菌落形态,生理生化特性及基于16SrDNA序列的系统发育分析等,初步将菌株鉴定为分枝杆菌属。该菌株能利用多菌灵作为唯一碳源、氮源进行生长并基本彻底矿化多菌灵。2-氨基苯并咪唑和2-羟基苯并咪唑为菌株降解多菌灵的中间代谢产物。菌株能够在较宽温度和pH值范围内有效降解多菌灵,其降解多菌灵的最适温度和pH值分别为37℃、7.0。装液量试验结果表明,菌株djl-10对多菌灵的降解明显依赖氧气。Ca2+、Mg2+、Fe3+等离子能够明显促进菌株djl-10对多菌灵的降解。此外,本研究克隆和表达菌株djl-10的多菌灵水解酶基因mhe。酶促反应结果表明,纯化的重组酶Mhe对多菌灵具有明显的催化活性。

基于网络药理学探讨北沙参的抗炎机制

北沙参为伞形科植物珊瑚菜的干燥根,药食两用,具有清肺热、止咳润肺的功能。现代研究表明,北沙参还具有抗菌、抗炎、抗氧化的功效。然而其抗炎功效的分子机制尚不明确。本研究运用TCMSP、Pub Chem、SEA、Uni Prot、Gene Cards等数据库,收集北沙参所含成分中的活性化合物、活性化合物对应的靶点、抗炎作用相关靶点信息。进一步以北沙参的活性成分和抗炎靶点蛋白为网络节点构建"成分-靶点"网络,并进行基于String数据库的蛋白相互作用分析、GO生物功能注释和KEGG通路富集。结果经筛选和分析获得北沙参活性成分8个,包括槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇等。抗炎靶点92个,包括JUN、CASP3、EGFR、AKT1、HSP90AA1、TGFB1、PGR、MET、PLAU、PIM1、PIK3R1等,涉及雌激素信号通路,IL-17信号通路,EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药通路,AGE-RAGE信号通路,PI3K-Akt信号通路等与抗炎相关的信号通路。北沙参"多成分-多靶点-多通路"的作用特点,为进一步开展北沙参抗炎作用的机制研究提供了新路径和新方向。

甲苯降解菌JB-1的分离、鉴定与降解特性

从南京石化废水处理池的活性污泥中分离到1株能以甲苯为唯一碳源生长的细菌,命名为JB-1.根据其生理生化特征和16SrDNA(GenBank Accession No. EU869278)序列相似性分析,将该菌株鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.).该菌株在18h内能完全降解346.4mg/L的甲苯.降解甲苯的最适温度为30℃,pH为7.0,降解速率与初始接种量呈正相关.甲苯降解途径是通过甲苯双加氧酶形成顺甲苯二氢二醇,再经邻苯二酚2,3双加氧酶开环降解.

人参皂苷F2通过PI3K/Akt途径改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗

该研究探讨了人参皂苷F2对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及其机制。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,用1μmol/L地塞米松处理48 h,建立胰岛素抵抗模型。用10μmol/L的罗格列酮(阳性对照)和25、50、100μmol/L人参皂苷F2处理胰岛素抵抗细胞12 h,检测细胞对2-NBDG的摄取。实验结束后用RT-qPCR检测各组细胞中葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)和胰岛素底物受体1(IRS-1)mRNA相对表达量,并利用Western blot检测PI3K/Akt信号通路中蛋白表达及其磷酸化水平。结果表明:与模型组相比,25、50、100μmol/L人参皂苷F2均能促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞对2-NBDG的摄取,分别增加了12.58%、29.07%和34.62%(p<0.05);人参皂苷F2作用12 h后,GLUT-4和IRS-1 mRNA相对表达量以及PI3K、Akt的磷酸化水平显著提高(p<0.01)。该研究表明人参皂苷F2可通过促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中GLUT-4和IRS-1mRNA相对表达,增加PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而激活PI3K/Akt信号通路,改善其糖代谢和胰岛素抵抗。

基于PI3K/Akt信号通路研究积雪草中微量皂苷(CA-1)的神经保护作用

利用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)诱导分化型PC12细胞构建的帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)体外细胞模型,研究了从积雪草中提取的微量皂苷(Centella Asiatica Saponins-1,CA-1)的神经保护作用。通过高分辨二级质谱鉴定化学结构、分析了积雪草中常用皂苷和CA-1对PC12细胞存活率的影响,进一步通过半定量和实时定量聚合酶链式反应、蛋白印迹等技术检测PC12细胞中相关基因和蛋白表达。结果表明在该模型中100μmol/L CA-1、积雪草苷(Asiaticoside,AS)、羟基积雪草苷(Madecassoside,MA)分别将细胞存活率提高了28.63%、16.69%、17.54%,CA-1的神经保护作用强于AS和MA(p<0.05)。与模型组相比,CA-1剂量依赖性地提高了6-OHDA诱导PC12细胞的存活率且在CA-1浓度为25μmol/L与模型组有显著差异(p<0.05),降低了细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的水平,上调了Sod1、Cat、Bcl2基因表达。蛋白印迹法(Western Blot,WB)显示,CA-1提高了p85、PDK1、Akt的蛋白表达水平。在该研究中明确了CA-1的神经保护作用揭示了其作用可能通过PI3K/Akt信号通路。

基于网络药理学预测人参皂苷F2减肥作用的靶标及通路

人参皂苷F2具有抗癌、护肝、抗炎、降脂等多种生理功能,但是其关于减肥的作用机制尚不明确。本研究利用网络药理学方法预测人参皂苷F2减肥作用的潜在靶点和作用通路,借助PubChem、GeneCards数据库收集人参皂苷F2、肥胖靶点信息,通过共享靶点,利用Cytoscape等平台构建并分析人参皂苷F2-靶点-肥胖网络。结果表明,人参皂苷F2减肥作用共涉及35个潜在靶点,其中关键靶点包括MAPK1、VEGFA、CASP3等,GO富集提示潜在靶点主要参与代谢、结合、组成细胞组分等生物学过程,通过EGFR抗酪氨酸激酶抑制剂信号通路、P13K-Akt信号通路、神经活性配体-受体相互作用信号通路等方式发挥减肥作用。网络药理学成功预测了人参皂苷F2减肥作用的多靶点、多通路模式,为后续深入探讨其作用机制提供理论依据和研究方向。