FRK通过FAK信号通路抑制脑胶质瘤细胞迁移与侵袭作用的研究

目的研究酪氨酸相关激酶(fyn-related kinase,FRK)是否通过粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)信号通路抑制脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭。方法采用Western blot(WB)检测FRK质粒的转染效果,细胞划痕和Transwell侵袭实验检测过表达FRK及下调FAK对胶质瘤U251细胞迁移和侵袭能力的影响;WB检测过表达FRK对FAK、P-FAK蛋白水平的影响以及下调FAK对FRK蛋白水平的影响。结果FRK质粒转染成功。过表达FRK后胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭能力下降。FAK siRNA干扰效率达到70%,下调FAK后胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭能力下降。过表达FRK后P-FAK的蛋白水平明显下降,而FAK蛋白水平无明显变化,下调FAK对FRK的蛋白水平无明显影响。结论 FRK可能通过抑制FAK的磷酸化来调控胶质瘤的侵袭与迁移。

FRK通过调节EGFR-Y1173磷酸化促进脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究

目的研究FRK是否通过调节表皮生长因子受体(EGFR)-Y1173磷酸化促进胶质瘤细胞的凋亡。方法应用PolyJet^(TM)将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞中,western blot(WB)检测质粒转染效果及EGFR蛋白水平和EGFR-Y1173磷酸化水平的变化,流式细胞术检测脑胶质瘤细胞凋亡的变化;转染EGFR(WT)、EGFR(Y1173F)质粒,或共转FRK和EGFR(WT)、EGFR(Y1173F)质粒,流式细胞术检测脑胶质瘤U251细胞凋亡的变化。结果成功将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞,过表达FRK促进脑胶质瘤U251细胞的凋亡。过表达FRK增加EGFR-Y1173磷酸化水平,而对EGFR蛋白水平无影响。过表达EGFR(WT)、EGFR(Y1173F)质粒,细胞凋亡均减少,分别减少了25%和75%。WB结果显示,共转FRK和EGFR(WT)、EGFR(Y1173F)质粒成功;流式细胞术结果显示,与对照组相比,过表达FRK促进了细胞凋亡,EGFR抑制了细胞凋亡,且转染EGFR(Y1173F)质粒组的作用比转染EGFR(WT)的效果更明显。此外,转染EGFR(Y1173F)质粒可逆转过表达FRK对胶质瘤细胞的促凋亡作用。结论 FRK可以通过促进EGFR-Y1173磷酸化从而调节胶质瘤细胞的凋亡。

FRK通过抑制ERK信号通路对脑胶质瘤细胞增殖作用的研究

目的研究FRK是否通过抑制ERK信号通路进而影响脑胶质瘤细胞的增殖。方法应用PolyJet^(TM)将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞中,Western blot(WB)检测转染效率及P-ERK、ERK蛋白水平的变化,EDU实验观察脑胶质瘤细胞增殖能力的变化;用ERK抑制剂PD98059处理U251细胞,WB检测细胞中FRK、P-ERK、ERK的蛋白水平,EDU实验检测脑胶质瘤细胞增殖能力的变化。结果 WB检测显示FRK质粒转染成功,过表达FRK使U251细胞增殖能力降低。过表达FRK降低了P-ERK的蛋白水平,但对ERK总蛋白水平无影响。与对照组相比,ERK抑制剂PD98059组P-ERK的蛋白水平明显降低,但对FRK的蛋白水平无明显影响。ERK抑制剂PD98059处理后,脑胶质瘤U251细胞增殖能力明显降低。结论 FRK可以通过抑制ERK的活性,从而降低脑胶质瘤细胞的增殖。

脓毒症患者入重症监护室时血尿酸水平与微炎症状态的相关性及对肾损伤的预测

目的探究脓毒症患者入重症监护室(intensive care unit,ICU)时血尿酸(uric acid,UA)水平与微炎症状态的相关性及对急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的预测价值。方法选择2021年8月—2023年11月本院ICU收治的脓毒症患者(210例)为研究对象;根据AKI诊断标准,分为AKI组(134例)和非AKI组(76例)。对比分析2组患者的临床资料,包括年龄、性别、入ICU血生化指标等。调整混杂因素后,采用多元线性回归(MLR)模型分析UA与hs-CRP、IL-6的相关性。危险因素采用多因素logistic回归模型进行分析并构建预测模型;采用拟合优度检验预测模型。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估模型的预测效能。采用非条件logistic回归模型和Andersson等编制的计算表分析交互作用。采用限制性立方样条(RCS)模型评估UA和AKI发生OR值间的关系。结果hs-CRP、IL-6与UA均呈正相关(P<0.05),调整混杂因素后(模型2)仍具有显著相关性(P<0.05)。与非AKI组相比,AKI组患者的血管活性药物、机械通气、肾脏替代治疗、脓毒症休克、院内死亡的患者比例以及ICU住院时间均更高(P<0.05),总住院时间更短(P<0.05)。多因素logistic回归分析中,若纳入UA、hs-CRP、IL-6,则UA、APACHEⅡ评分、PCT、BUN、钾离子、hs-CRP、IL-6,均为AKI发生的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,模型1(不含UA、hs-CRP、IL-6)和2(包含UA、hs-CRP、IL-6)预测AKI发生的AUC分别为0.828(95%CI:0.771~0.890)和0.854(95%CI:0.782~0.913)。拟合优度检验结果显示,预测模型2拟合优度理想(P=0.596)。交互作用分析结果显示,hs-CRP(>12.30 mg/L)、IL-6(>13.78 pg/mL)与UA(>435.43μmol/L)均存在相加交互作用,其中2个因素共同存在时重度AKI风险更高(OR值分别为3.148和4.278)。RCS模型分析结果显示,UA与AKI风险存在非线性关系(非线性检验P<0.001)。结论hs-CRP、IL-6与UA均呈正相关,且对于重度AKI两两之间存在相加交互作用。UA为AKI发生的独立影响因素,且二者呈非线性剂量反应关系,即当UA>249.5μmol/L时,AKI发生风险随着UA水平升高而显著上升。