目的细胞膜首先感知到应力信号,力可能通过细胞骨架等进行物理传递,但目前尚不清楚细胞膜—细胞骨架的应力传递过程。方法通过荧光共振能量转移(FÖrster resonance energy transfer,FRET)技术构建目的探针PCLB(Lyn-ECFPspring-Ypet...目的细胞膜首先感知到应力信号,力可能通过细胞骨架等进行物理传递,但目前尚不清楚细胞膜—细胞骨架的应力传递过程。方法通过荧光共振能量转移(FÖrster resonance energy transfer,FRET)技术构建目的探针PCLB(Lyn-ECFPspring-Ypet-actin)。进行渗透压实验验证探针特性,并通过药物实验检测细胞膜与骨架间应力分布。展开更多
目的力学因素对神经元囊泡释放有调控作用,但目前RIM-BP蛋白如何通过力学变化调控这一过程尚不清楚。方法构建并验证基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的BKTS和RKTS张力探针,可分别检测RIM-BP蛋白N端...目的力学因素对神经元囊泡释放有调控作用,但目前RIM-BP蛋白如何通过力学变化调控这一过程尚不清楚。方法构建并验证基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的BKTS和RKTS张力探针,可分别检测RIM-BP蛋白N端、C端与活性带膜之间的距离,对照探针去除与活性带膜相连结构。展开更多
股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head, ONFH)又称股骨头缺血性坏死,是一种病因复杂、致残率高的骨科疾病,对晚期患者进行人工关节置换术几乎不可避免,关节置换术本身以及青壮年患者后续的假体修复问题,给社会和家庭都带来巨大的...股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head, ONFH)又称股骨头缺血性坏死,是一种病因复杂、致残率高的骨科疾病,对晚期患者进行人工关节置换术几乎不可避免,关节置换术本身以及青壮年患者后续的假体修复问题,给社会和家庭都带来巨大的经济压力。大连大学附属中山医院骨科团队于2005年发明的纯中药制剂活骨I号,作为该院的院内制剂,以其卓越的疗效,在股骨头坏死患者中极具口碑。为了更好的揭示中药治疗股骨头坏死的过程和机理,理解传统中药作用于股骨头坏死疾病的科学内涵,提高传统中药的科技含量,该团队借助骨科植入材料开发国家地方联合工程实验室平台,对活骨I号开展了一系列由浅入深的研究,从单纯配伍到临床治疗结果统计,从动物实验到活性成分解析,再到分子水平以及网络药理学的研究。本文对活骨I号多年来渐进式的研究成果加以综述和总结。展开更多
以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片为试材,克隆LSV16 k D基因,连接到原核表达载体p ET-28a(+)上。将获得的重组质粒p ET-28a(+)+16 k D转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到了高效表达的16 k D蛋白,融合蛋白分子量约为20 k D。融合蛋...以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片为试材,克隆LSV16 k D基因,连接到原核表达载体p ET-28a(+)上。将获得的重组质粒p ET-28a(+)+16 k D转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到了高效表达的16 k D蛋白,融合蛋白分子量约为20 k D。融合蛋白经过镍柱纯化后作为抗原免疫注射小鼠,制备得到16 k D蛋白抗血清。Western blot分析显示所制备的抗血清与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应;通过ELISA检测和RT-PCR检测百合样品,证实制备的抗血清与LSV侵染的百合叶片发生了相同的特异性反应。结果表明,目的蛋白表达成功,所制备的抗血清具有特异性,可用于LSV的快速检测、免疫组织化学以及16 k D蛋白功能研究。展开更多
文摘目的细胞膜首先感知到应力信号,力可能通过细胞骨架等进行物理传递,但目前尚不清楚细胞膜—细胞骨架的应力传递过程。方法通过荧光共振能量转移(FÖrster resonance energy transfer,FRET)技术构建目的探针PCLB(Lyn-ECFPspring-Ypet-actin)。进行渗透压实验验证探针特性,并通过药物实验检测细胞膜与骨架间应力分布。
文摘目的力学因素对神经元囊泡释放有调控作用,但目前RIM-BP蛋白如何通过力学变化调控这一过程尚不清楚。方法构建并验证基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的BKTS和RKTS张力探针,可分别检测RIM-BP蛋白N端、C端与活性带膜之间的距离,对照探针去除与活性带膜相连结构。
文摘股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head, ONFH)又称股骨头缺血性坏死,是一种病因复杂、致残率高的骨科疾病,对晚期患者进行人工关节置换术几乎不可避免,关节置换术本身以及青壮年患者后续的假体修复问题,给社会和家庭都带来巨大的经济压力。大连大学附属中山医院骨科团队于2005年发明的纯中药制剂活骨I号,作为该院的院内制剂,以其卓越的疗效,在股骨头坏死患者中极具口碑。为了更好的揭示中药治疗股骨头坏死的过程和机理,理解传统中药作用于股骨头坏死疾病的科学内涵,提高传统中药的科技含量,该团队借助骨科植入材料开发国家地方联合工程实验室平台,对活骨I号开展了一系列由浅入深的研究,从单纯配伍到临床治疗结果统计,从动物实验到活性成分解析,再到分子水平以及网络药理学的研究。本文对活骨I号多年来渐进式的研究成果加以综述和总结。
文摘以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片为试材,克隆LSV16 k D基因,连接到原核表达载体p ET-28a(+)上。将获得的重组质粒p ET-28a(+)+16 k D转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到了高效表达的16 k D蛋白,融合蛋白分子量约为20 k D。融合蛋白经过镍柱纯化后作为抗原免疫注射小鼠,制备得到16 k D蛋白抗血清。Western blot分析显示所制备的抗血清与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应;通过ELISA检测和RT-PCR检测百合样品,证实制备的抗血清与LSV侵染的百合叶片发生了相同的特异性反应。结果表明,目的蛋白表达成功,所制备的抗血清具有特异性,可用于LSV的快速检测、免疫组织化学以及16 k D蛋白功能研究。