梅花鹿茸多肽的化学结构及生物活性

在马鹿茸活性多肽结构与功能研究基础上,从新鲜梅花鹿茸中分离纯化了活性单体多肽,确定了其化学结构,并与马鹿茸多肽进行结构与活性比较.利用离子交换层析、凝胶过滤层析及反相高效液相色谱层析等生物化学技术,从梅花鹿茸中分离得到1个新多肽,SDS-PAGE电泳显示为一条带,HPLC图谱为单一峰,MALDI-TOF MS给出该多肽的精确分子量为3263.4,其等电点pI=8.15.一级结构研究表明,该多肽是由32个氨基酸残基组成的直链多肽,不含半胱氨酸,富含缬氨酸、赖氨酸、亮氨酸和甘氨酸,氨基酸序列为VLSATDKTNVLAAWGKVGGNAPAFGAEALERM.生物活性检测结果表明,该多肽可促进原代培养的表皮细胞和软骨细胞增殖,也能刺激NIH3T3成纤维细胞株的分裂.梅花鹿茸多肽与马鹿茸多肽在结构上均为32个氨基酸残基组成的直链多肽,但第5,8,11和30位氨基酸残基不同.2种多肽结构上的变化并未影响其促细胞增殖生物活性.

鹿茸多肽纳米复合材料诱导兔骨髓间质细胞向成骨细胞的分化效应

目的:探讨鹿茸多肽纳米复合材料诱导兔骨髓间质细胞(MSCs)向成骨细胞分化的效应,阐明复合材料作用机制。方法:将含5mg.g-1鹿茸多肽、20%纳米β-磷酸三钙(β-TCP)和明胶的复合材料(以下简称复合材料)与第3代MSCs共培养48h,用MTT法和流式细胞术检测复合材料对MSCs增殖及细胞周期的影响;AO/EB荧光染色观察MSCs凋亡形态的变化;将MSCs与复合材料共培养,扫描电镜下观察细胞黏附、生长情况;复合材料连续作用于MSCs 21d,全自动生化分析仪检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色法观察复合材料对MSCs矿化结节形成的作用。结果:复合材料作用于MSCs 48h,可明显促进MSCs增殖,相对增殖率为126.45%,此时的MSCs主要处于S期,占细胞总数45.84%(对照组为7.96%),凋亡率为2.08%(对照组为13.68%);MSCs在复合材料上黏附、生长良好,呈多角或梭形。复合材料连续作用MSCs 21d,显著增加了矿化结节形成;随着作用时间的延长,细胞的ALP活性也逐渐增强,21d复合材料组与对照组比较明显升高(P<0.001)。结论:复合材料在体外可促进MSCs增殖,并可诱导MSCs向成骨细胞分化,具有良好的成骨效能。

鹿茸多肽及其生长因子制备工艺的研究进展

鹿茸是我国传统中药材,鹿茸多肽及其生长因子具有重要的生理功能。本文综述了鹿茸多肽及其生长因子的提取、分离、纯化以及文库构建表达的应用前景。

黄连解毒汤对高脂血症大鼠血脂代谢及其相关基因表达的影响

目的:观察黄连解毒汤对高脂血症大鼠血脂代谢及其相关基因表达的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、立普妥(阿托伐他汀)组和低、高剂量黄连解毒汤组。除正常对照组外,其他组大鼠喂饲高脂饲料建立高脂血症大鼠模型。连续给药8周后,检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TAG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein choles-terol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平,并检测各组大鼠肝脏脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase,LPL)和肝脂酶(hepatic lipase,HL)活性;利用逆转录聚合酶链反应技术检测各组大鼠肝脏组织低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)和过氧化物体增殖物活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)mRNA的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清TC、TAG和LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低;肝脏LPL、HL活性和LDLR、PPARγmRNA表达水平明显下降。黄连解毒汤组血脂水平均较模型组有不同程度的改善,肝脏LPL、HL活性和LDLR、PPARγmRNA表达水平明显升高。结论:黄连解毒汤可能是通过提高肝脏脂代谢酶的活性,促进肝脏LDLR和PPARγmRNA的表达来调节脂质代谢紊乱的。

银杏叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其降血糖作用机制

目的:通过体外药效学实验研究银杏叶提取物(GBE)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,探讨其降血糖的作用机制,为开发利用银杏叶资源提供实验依据。方法:提取大鼠小肠中的α-葡萄糖苷酶液,利用葡萄糖试剂盒测定酶活力;体外抑制实验分为正常对照组、阳性对照组及GBE高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g.L-1),对反应体系中的葡萄糖浓度进行测定,计算药物对蔗糖酶的抑制率;离体器官实验分为正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和GBE高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g.L-1),对反应体系中的淀粉光密度值进行测定,计算药物对淀粉酶的抑制率;半数抑制率(IC50)实验将GBE分为7个剂量组,分别计算药物对α-糖苷酶的抑制率及IC50;抑制曲线实验分为正常对照组、阳性对照组及GBE组,计算反应速率,以底物浓度的倒数作为横坐标,以反应速率的倒数作为纵坐标,绘制抑制曲线。结果:大鼠小肠酶活力值为67.2活力单位。与正常对照组比较,GBE高、中、低剂量组蔗糖酶抑制率明显增加(P<0.001,P<0.001,P<0.01);与正常对照组比较,GBE高剂量组大鼠小肠中淀粉酶抑制率明显增加(P<0.01);GBE对蔗糖酶的IC50值为0.758 6 g.L-1,对淀粉酶的IC50值为0.910 1 g.L-1;GBE组趋势线与正常对照组斜率相近,且截距大于正常对照组趋势线。结论:GBE对α-糖苷酶具有良好的抑制作用,其作用机制为反竞争性抑制。

黄连解毒汤体内外抗肿瘤作用的实验研究

目的观察黄连解毒汤的体内、体外抗肿瘤作用。方法采用小鼠肉瘤S180和小鼠前胃癌MFC等移植性肿瘤模型进行体内实验,通过检测抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数等指标观察黄连解毒汤的体内抑瘤作用及对免疫器官的影响。并用MTT方法检测黄连解毒汤对小鼠S180、小鼠MFC、人胃癌SGC-7901、人肝癌SMMC-7721等4种瘤株的抑制作用。结果黄连解毒汤大、中剂量组中对S180荷瘤小鼠有抑制作用,大剂量组对MFC荷瘤小鼠有抑制作用,抑瘤率分别为48.38%、33.77%、30.74%;对S180、MFC、SGC-7901和SMMC-7721细胞均有一定的细胞毒作用,IC50分别为99.73mg.L-1、84.47mg.L-1、153.32mg.L-1和102.87mg.L-1。结论黄连解毒汤体内对S180、MFC小鼠移植瘤有一定的抗肿瘤活性,体外对4种肿瘤细胞也具有抑制作用。

百合病毒编码蛋白及抗病性研究进展

百合病毒病是当前影响中国百合种球质量的主要瓶颈之一,了解侵染百合病毒的编码蛋白及抗病性,有利于病毒与寄主相互作用的研究以及阐明病毒的致病机理,从而为百合的抗病性育种提供有力依据。本研究就侵染百合主要病毒的基因结构、编码蛋白以及抗病性研究进行了概述。经过分析得知百合病毒基因结构与编码蛋白有关联,且不同编码蛋白之间进化高度保守。还介绍了抗百合病毒的基因工程研究现状,概述了抗百合病毒基因工程新理论和新方法,并指出了百合抗病毒基因工程的发展方向。同时对百合抗病性育种研究进行了分析和展望。相信随着抗病毒基因工程研究的不断深入,百合病毒病的有效防控指日可待。

牙科纯钛种植体表面改性对抗菌性能的影响

1种植体表面与细菌黏附 自从1965年第一颗纯钛Branemark种植体被植入人体以来，40多年来，纯钛种植体已经越来越广泛地应用于牙医学领域，并己成为修复牙列缺损和牙列缺失的主要治疗方法之一。虽然钛种植体具有优良的生物相容性、力学性能、耐腐蚀性和良好的可加工性使其在牙种植领域得以广泛应用，但钛自身不具备抗菌活性，

基于互联网+CBL教学模式的中医骨伤科学教学应用研究

中医骨伤科学是中医五年制本科专业必修课程,根据普通高等院校的培养方案与目标,本科教学中要求学生具备扎实的理论知识,熟练的动手能力。为了探求"互联网+CBL"教学模式在中医骨伤科学教学中的应用价值,对长春中医药大学2个班级学生进行教学实践,通过问卷调查和访谈,分析开展此教学模式的效果,为提高教学效果与教学改革提供依据。

细胞膜-细胞骨架介导应力分布的可视化研究

目的细胞膜首先感知到应力信号,力可能通过细胞骨架等进行物理传递,但目前尚不清楚细胞膜—细胞骨架的应力传递过程。方法通过荧光共振能量转移(FÖrster resonance energy transfer,FRET)技术构建目的探针PCLB(Lyn-ECFPspring-Ypet-actin)。进行渗透压实验验证探针特性,并通过药物实验检测细胞膜与骨架间应力分布。

RIM-BP蛋白对囊泡释放的动力调控作用研究

目的力学因素对神经元囊泡释放有调控作用,但目前RIM-BP蛋白如何通过力学变化调控这一过程尚不清楚。方法构建并验证基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的BKTS和RKTS张力探针,可分别检测RIM-BP蛋白N端、C端与活性带膜之间的距离,对照探针去除与活性带膜相连结构。

纯中药制剂活骨I号用于股骨头坏死治疗的研究进展

股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head, ONFH)又称股骨头缺血性坏死,是一种病因复杂、致残率高的骨科疾病,对晚期患者进行人工关节置换术几乎不可避免,关节置换术本身以及青壮年患者后续的假体修复问题,给社会和家庭都带来巨大的经济压力。大连大学附属中山医院骨科团队于2005年发明的纯中药制剂活骨I号,作为该院的院内制剂,以其卓越的疗效,在股骨头坏死患者中极具口碑。为了更好的揭示中药治疗股骨头坏死的过程和机理,理解传统中药作用于股骨头坏死疾病的科学内涵,提高传统中药的科技含量,该团队借助骨科植入材料开发国家地方联合工程实验室平台,对活骨I号开展了一系列由浅入深的研究,从单纯配伍到临床治疗结果统计,从动物实验到活性成分解析,再到分子水平以及网络药理学的研究。本文对活骨I号多年来渐进式的研究成果加以综述和总结。

汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖和周期的影响

目的:研究汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖和周期的影响。方法:以不同浓度的汉黄芩素作用于SPC-A-1细胞,检测细胞抑制率、凋亡及细胞周期。结果:MTT法测得汉黄芩素的IC50为24.7 mg.L-1,能够明显抑制SPC-A-1细胞的集落形成能力。汉黄芩素作用于SPC-A-1细胞后,荧光倒置显微镜下观察到细胞凋亡的形态学改变。Annexin V-FITC/PI双标法证实汉黄芩素可以诱导SPC-A-1细胞凋亡,并具有剂量依赖性。流式细胞仪结果显示,不同浓度汉黄芩素使SPC-A-1细胞周期出现显著的变化,10,20 mg.L-1汉黄芩素可将周期阻滞在G0/G1期,30,40 mg.L-1汉黄芩素则使细胞周期堆积在S期,并且随着给药剂量的增加,凋亡峰显著升高。结论:汉黄芩素能明显抑制SPC-A-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并对细胞G0/G1和S期具有阻滞效应,具有抗肿瘤作用。

纳米TCP/明胶/鹿茸多肽复合材料的生物相容性评价

目的评价新型复合材料纳米TCP/明胶/鹿茸多肽的生物相容性,为其在骨缺损修复领域中的临床应用提供实验依据。方法制备纳米TCP/明胶/鹿茸多肽复合材料,扫描电镜观察其形态。常规培养L929和NIH/3T3细胞,取对数生长期的细胞用于实验。通过急性毒性实验、溶血实验、细胞增殖实验和细胞毒性实验等研究该复合材料的生物相容性。结果扫描电镜观察示复合材料微球直径约10μm,单个分散存在,微球表面存在纳米级孔洞。急性毒性实验结果显示,实验动物在观察期内一般状态良好,无惊厥、瘫痪和死亡等毒性反应,给药前、后体重无明显变化,该复合材料无急性毒性。溶血实验结果显示溶血率均<5%,符合医用生物材料的溶血实验要求。细胞增殖实验结果显示,不同浓度材料浸提液作用于NIH/3T3细胞均不同程度地促进细胞增殖,具有较好的生物学活性。细胞毒性实验结果显示,该材料细胞毒性为0级。结论纳米TCP/明胶/鹿茸多肽复合材料具有良好的生物相容性。

百合斑驳病毒外壳蛋白基因原核表达、抗血清制备及其应用

为了建立百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)的快速检测方法,采用RT-PCR方法从感染LMoV的百合叶片中克隆该病毒的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,然后连接到原核表达载体pET28a(+)上,导入大肠杆菌Escherichia coliBL21(DE3)并诱导表达,以表达的重组蛋白为抗原制备该病毒的抗血清。结果显示:LMoVCP全长为822 bp,编码274个氨基酸;SDS-PAGE及Western blot检测结果表明,经IPTG诱导得到了分子量约为34 kD带有HIS标签的目的蛋白;用该蛋白制备的抗血清经间接ELISA和Western blot检测结果显示,其效价为1∶51 200,具有较高的特异性,可用于感染LMoV百合的检测,其检测结果与RT-PCR检测结果一致。

纳米磷酸三钙/明胶/鹿茸多肽复合材料的制备及对人成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

探讨反相微乳液法制备的β-纳米磷酸三钙/明胶/鹿茸多肽复合材料(简称纳米复合材料)对人成骨细胞功能的影响。利用反相微乳液法制备纳米复合材料,扫描电镜观察其形态,EDX与SELDI-TOF-MS分析对复合材料进行表征。采用MTT比色法、茜素红染色法检测纳米复合材料对体外培养的人成骨细胞hFOB1.19的增殖、矿化结节形成的影响;采用全自动生化分析仪检测hFOB细胞碱性磷酸酶活性(ALP)。结果表明该纳米复合材料可促进人成骨细胞增殖,提高ALP活性并增加矿化结节形成的数量,可促进人成骨细胞的增殖、分化成熟及矿化。

百合无症病毒16kD基因的克隆、原核表达及抗血清制备

以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片为试材,克隆LSV16 k D基因,连接到原核表达载体p ET-28a(+)上。将获得的重组质粒p ET-28a(+)+16 k D转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到了高效表达的16 k D蛋白,融合蛋白分子量约为20 k D。融合蛋白经过镍柱纯化后作为抗原免疫注射小鼠,制备得到16 k D蛋白抗血清。Western blot分析显示所制备的抗血清与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应;通过ELISA检测和RT-PCR检测百合样品,证实制备的抗血清与LSV侵染的百合叶片发生了相同的特异性反应。结果表明,目的蛋白表达成功,所制备的抗血清具有特异性,可用于LSV的快速检测、免疫组织化学以及16 k D蛋白功能研究。