合成酮内酯类3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B糖多孢红霉菌M的构建

大环内酯类抗生素基因工程是近年来研究的一个新领域 ,迄今已合成了 10 0多种新的聚酮类化合物。以糖多孢红霉菌A2 2 6基因组DNA为模板 ,用重叠PCR方法扩增出去除KR6酶域DNA的约 3 2kbDNA片段 ,克隆于pWHM3载体 ,构建了同源重组质粒pWHM2 2 0 1。PEG介导原生质体转化法将pWHM2 2 0 1转入糖多孢红霉菌A2 2 6 ,并整合于染色体红霉素合成基因位点。整合体在R3M斜面上生长两代后 ,制备原生质体涂R3M平皿。利用PCR鉴定筛选出 8株KR6敲除的突变体糖多孢红霉菌M(1 8)。ZabsPecFab质谱鉴定 ,证实糖多孢红霉菌M1合成了 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B 。

糖多孢红霉菌同源片段长度与染色体重组率关系的研究

为了探索同源片段长度与糖多孢红霉菌染色体同源重组率的关系 ,化学合成或用重叠PCR合成带有突变位点、在突变位点两侧长度为 (2 6bp +2 7bp)、(5 0 0bp +5 76bp)和 (190 8bp +174 9bp)的同源序列 ,克隆于糖多孢红霉菌同源重组载体pWHM3后 ,分别构建了pWHM1113、pWHM1116和pWHM1119质粒。以PEG介导转化糖多孢红霉菌A2 2 6原生质体 ,3个质粒分别获得每皿 30个、6 9个和 170个转化子 ,但pWHM1113质粒不能与染色体有效整合 ,pWHM1116质粒与染色体整合率为转化子的 2 % ,而pWHM1119质粒与染色体整合率达到转化子的 19%。pWHM1116和pWHM1119质粒均可进行有效的染色体二次重组 ,将突变位位点引入染色体。因此 ,同源片段长度为(5 0 0bp +5 76bp)或更长时 ,可与糖多孢红霉菌染色体进行有效的单重组和双重组。

红霉素基因工程研究进展

红霉素是一类广谱大环内酯类抗生素 ,在临床上具有广泛的应用。近 10年来用基因工程方法对红霉素结构改造已经取得了很大的进展。通过基因工程不仅可以改造红霉素内酯环环的大小、环的骨架和环的侧链 ,而且可以对后修饰的羟基、糖基和甲基进行改造。迄今用基因工程方法合成的新的大环内酯环结构已超过 10 0种 ,所合成的各种红霉素类似物也有数十种 ,且经过基因改造的红霉素类似物都具有生物活性。但基因工程产物产量都普遍降低 ,抑菌活性也不理想 ,因此未来红霉素基因工程研究的重点应加强产量和高活性结构筛选的研究。

生物化学课程教学方法改革初探

生命科学发展迅速,获取知识能力尤为重要。根据多年生物化学教学体会,对生物化学课程教学方法进行改革初探。介绍了生物化学教学过程,提出了对应的成绩评价体系,并对授课教师提出了要求。

糖多孢红霉菌多拷贝表达载体pZM的构建

对糖多孢红霉菌染色体上红霉素生物合成基因进行改造 ,已经合成了多种红霉素类似物。在糖多孢红霉菌中对红霉素类似物进行结构修饰 ,以pWOR1 0 9质粒为基础构建糖多孢红霉菌多拷贝表达载体pZM。pZM载体带有PermE启动子、fd终止子、多克隆位点、硫链丝菌肽和氨苄青霉素抗性基因、以及在大肠杆菌和糖多孢红霉菌中复制的ColE1ori和pJV1ori复制子 ,系可在大肠杆菌和糖多孢红霉菌中扩增的穿梭质粒。在糖多孢红霉菌中 ,pZM可以表达氨普霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因 ,从糖多孢红霉菌中提取的表达质粒酶切图谱与转化前一致 ,表明pZM是糖多孢红霉菌中多拷贝。

糖多孢红霉菌A226的原生质体转化和染色体同源整合

糖多孢红霉菌的原生质体转化和染色体同源整合,是红霉素生物合成基因改造的重要途径。本研究对糖多孢红霉菌A226原生质体制备和转化条件进行了优化,结果表明以对数生长后期和稳定期菌丝体制备的原生质体转化效率较高;质粒、原生质体和PEG-T缓冲液体积比例为15:40:200(μl)时转化效果较好;比重小原生质体的转化效率虽高,但在转化子中有效整合的比例较低;PEG1000和PEG3350对转化效率没有显著差异;而Yamamoto转化系统优于Weber转化系统。PCR鉴定、抑菌活性鉴定和质谱分析均表明,转化质粒已整合到染色体红霉素合成基因位点。

红霉素生物合成的分子生物学

近年来 ,国外对大环内酯类抗生素生物合成和基因工程的研究非常迅速 ,不仅认识了许多抗生素生物合成的过程 ,而且利用基因工程技术改造抗生素生物合成基因 ,合成了 10 0多种非天然的“天然”抗生素。抗生素生物合成的分子生物学是抗生素基因工程的基础。本文全面介绍了大环内酯类抗生素的代表———红霉素生物合成分子生物学的历史、现状及发展趋势。

丹皮多糖的提取纯化及其药理作用初步研究

中药丹皮用冷水浸提，粗提物用ＤＥＡＥ－纤维素柱纯化，得到丹皮多糖。凝胶柱层析和醋酸纤维薄膜电泳表明其为均－性多糖。咔唑反应和纸层析证明该多糖为酸性多糖。药理试验证实丹皮多糖具有显著的降血糖作用。

天门冬糖蛋白的分离纯化及其糖肽键的研究

冷水浸提中药天门冬，提取物经丙酮分级，得到ＡＧ－ａ，ＡＧ－ｂ和ＡＧ－ｃ三个级份。ＡＧ－ｃ用ＤＥＡＥ—纤维素柱纯化，得到水洗脱级份ＡＧ－ｗ和０．５ＮＮａＣｌ洗脱级份ＡＧ－ｃ。凝胶柱层析和醋酸纤维薄膜电泳，均表明ＡＧ－ｃ为均一性糖蛋白。红外光谱显示，所有的天门冬糖蛋白级份均含有乙酰基团。β—消去反应检测。

天门冬多糖的分离纯化及其部分理化性质

中药天门冬冷水提取物，通过脱蛋白、丙酮分级及柱层析纯化，得到三种级份多糖：ＰＡ－Ｗ、ＰＡ－Ｉ和ＰＡ－Ⅱ，凝胶柱层析测定，它们的分子量分别是１５８万、２１９万和２１９万。三种多糖中均含有葡萄糖，甘露糖和半乳糖，但各自的摩尔比相差很大。此外，ＰＡ－Ⅱ中还含有一种未知的糖醛酸。高碘酸氧化、Ｓｍｉｔｈ降解、红外光谱和１３Ｃ核磁共振谱表明，ＰＡ－Ⅱ含α和β两种构型，具有１→４和１→６两种糖苷键，二者比例为５～６：１，是一种具有高度分枝结构的半乳甘露聚糖。

天门冬糖蛋白AG-b的研究

ＡＧ＿ｂ为４０％丙酮沉淀的天门冬糖蛋白级份，它的β－消去反应产物在２４３ｎｍ有紫外吸收峰，表明其糖和蛋白质连接键为０－型糖肽键。凝胶层析测定ＡＧ－ｂ中多糖部分ＰＡ－Ｉ分子量为２．１９×１０６。１３ＣＮＭＲ波谱显示，ＰＡ－Ｉ具有α１→２、α１→４和α１→６三种糖苷键，不含有糖醛酸组份。ＩＲ光谱显示，ＡＧ－ｂ在１２５０ｃｍ－１和１７３０ｃｍ－１处有吸收峰，说明其含乙酰基团。

牡蛎口服液抗疲劳作用的研究

以小鼠负重游泳时间、血尿素氮和血乳酸浓度为指标，探讨了牡蛎口服液的抗疲劳功能。结果显示，以１．６７，８．３３和２５．０ｍＬ／ｋｇ．ｄ低中高三个剂量组喂养小鼠２２天，低和中剂量组可显著延长小鼠负重游泳时间（Ｐ＜０．０５）；低中高三个剂量均可显著降低血尿素氮和血乳酸含量（Ｐ＜０．０５）。根据保健食品评审标准，牡蛎口服液具有抗疲劳保健功能。

安徽萝卜品种资源营养品质分析与评价

分析了安徽２１个萝卜品种的矿物质、可溶性总糖、蛋白质、维生素Ｃ和粗纤维５个营养指标含量，并用模糊数学的隶属函数法对种质的综合营养品质进行了评价。结果表明，恨地钻和二躁萝卜综合营养品质突出；滁县大红萝卜、牛腿红、歙县白萝卜、太平白萝卜。

红霉素类药物基因工程

红霉素类药物在临床上应用广泛，已通过化学修饰发展到第三代红霉素。红霉素基因工程发展迅速．不仅合成了100多种红霉素结构类似物．而且在提高红霉素产量方面也取得了重要进展，下面重点介绍红霉素类药物基因工程研究概况，特别对合成新的红霉素类似物和提高红霉素产量进行了阐述。

牡蛎冲剂的研制

牡蛎是珍贵的海洋产品，富含牛磺酸、锌等营养成分。本文报道了牡蛎冲剂的生产工艺。

红霉素基因工程研究途径和相关技术

红霉素基因工程研究的快速发展依赖于相关的分子生物学技术 ,本文概括介绍了红霉素基因工程研究中常用的五种途径和相关技术 :染色体重组、链霉菌表达系统、大肠埃希氏菌表达系统、糖多孢红霉菌突变体表达系统和无细胞体系 ,并对各种途径进行了评述。

中低档绿茶中茶多糖的提取及降血糖作用

从中低档绿茶中提取茶多糖，分离提取和精制纯化的方法对其含量及生理活性有一定影响。理化处理和分析结果表明，茶多糖是一类与蛋白质结合在一起的酸性多糖或一种酸性糖蛋白，以丙酮为溶剂沉淀分离得到的茶多糖生理活性最高，降血糖作用最佳，而且方法操作简便，易于工业化生产。茶多糖对正常和实验性高血糖模型小白鼠的血糖均有显著的降低作用。茶多糖在降低四氧嘧啶高血糖小鼠血糖浓度的同时，使肝糖原大量增加，表明茶多糖在对糖代谢方面具有与胰岛素相类似的作用。

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究

浓香型白酒的主体香味物质是己酸乙酯,己酸菌是重要的功能菌种。该研究从优质窖泥中分离获得了高产己酸菌株,命名为JZZ,该菌是革兰氏阳性杆菌,经形态学和16S r DNA序列鉴定,属于克氏梭菌(Clostridium kluyveri)。通过培养条件考察,该己酸菌最适培养条件为接种量5%,装样量90%,培养温度37℃,p H值为6.5。在最适培养条件下,菌株JZZ的己酸产量均可达到4.36 mg/m L。

几种抗氧化剂对棉籽油氧化稳定性的影响

利用Rancimat法研究3种天然抗氧化剂迷迭香提取物、茶多酚、维生素E(VE)及合成抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)对棉籽油抗氧化性能的影响。通过在棉籽油样品中添加不同质量浓度的单一和复合配比的抗氧化剂,分别测定诱导时间并考察抗氧化效果。结果表明,在棉籽油中单一抗氧化剂的抗氧化性能依次为TBHQ>迷迭香>茶多酚>VE;在复合抗氧化剂组合中,迷迭香提取物与茶多酚以3:1进行复配时具良好的协同增效作用;当3种天然抗氧化剂与TBHQ进行复配时,其抗氧化效果优于同等质量浓度的单一天然抗氧化剂。