人bFGF基因克隆表达及表达产物的纯化和生物学活性分析

目的：通过融合蛋白表达方式将编码人碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＤＨ５α中的表达，为ｂＦＧＦ进一步研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术将ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－５Ｚ载体并测序，然后克隆到表达载体ｐＸＨ上。结果：转化重组质粒ｐＬＸ１的大肠杆菌经４２℃温控诱导４５ｈ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白的分子量约３５０００，薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的９９％。经ＦａｃｔｏｒＸａ酶切后得到分子量约为１７０００的ｂＦＧＦ，其生物学活性ＥＤ５０为２２９ｎｇ／ｍｌ。结论：经ＰＣＲ方法扩增的ｂＦＧＦ可在大肠杆菌中高效表达。

快速可靠的双链PCR产物直接测序法

利用Ｔ７ＤＮＡ聚合酶在低温下仍具较高活性的特点，在热变性后低温下进行测序反应，使用该方法对多种ＰＣＲ产物进行序列分析均取得较好的结果．

未知人Na(+)-K(+)-Exchanging ATPase α1亚基基因第一内含子的获得及鉴定

目的研究人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因胞外区约８０～１３０位氨基酸编码序列的未知基因组结构。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对人基因组ＤＮＡ及ｃＤＮＡ文库进行扩增，限制性酶切分析扩增产物，并进行荧光测序，对测序结果进行同源性分析及剪接位点的搜索并对得到的核苷酸序列进行分析。结果人基因组ＤＮＡ和ｃＤＮＡ经扩增后分别得到８３３和１９５ｂｐ两种不同大小的片段Ｆｇ，Ｆｃ。分析序列发现Ｆｇ与Ｆｃ相比在１３８～７７５ｂｐ处含有一６３８ｂｐ的插入片段，此片段与ＧｅｎＢａｎｋ中的任何已知序列均无明显同源性。结论本研究发现了一段全新未知的人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因的内含子全序列，并得到了第一外显子同第二外显子之间的相对位置和序列，其在Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ的基因检索号为Ｌ７６９３８。序列分析表明该内含子可能具有潜在的调控基因表达的功能，并含有一个可能的编码序列。

YAP1基因敲除对胰腺癌L3.6细胞增殖及迁移能力的影响

目的:研究胰腺癌细胞中YAP1对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:利用CRISPR-Cas9技术,在人胰腺癌L3.6细胞中敲除YAP1基因,并用Western blot验证;通过MTT比色法及EdU流式检测敲除YAP1前后的癌细胞增殖能力;用细胞划痕及Transwell实验研究迁移能力。结果:成功获得YAP1敲除的L3.6稳定细胞株(YAP1-KO)。相对于野生型的L3.6细胞,YAP1-KO细胞的增殖与生长能力明显下降,细胞迁移能力也明显减弱。结论:YAP1基因敲除显著降低胰腺癌L3.6细胞的增殖和迁移能力,可能为靶向治疗胰腺癌提供新的潜在靶标。

光遗传学技术在酪氨酸受体激酶等靶向药物筛选中的应用

光遗传学的发明为神经科学领域带来重大突破,相关技术使对蛋白质功能调控、信号通路激活及动物行为的时空精确控制成为可能,为研究神经回路及信号网络提供了独特的手段。近年来,光遗传学技术与相关报告基因结合被应用到药物筛选平台。该平台利用光信号代替电生理或其他试剂(如生长因子等),激活细胞的受体激酶或离子通道,具有高通量、操作简便及低成本等特点。对光控基因工程技术作为受体酪氨酸激酶的研究手段及新的靶向药物筛选平台进行总结。

小鼠胰腺发育几个关键转录因子的研究进展

胰腺为重要消化器官之一,包括内分泌和外分泌两部分。从形态学角度,胰腺早期发育可分为胰芽出现、祖细胞增殖分化和内外分泌系统成熟三个主要阶段,均与相关转录因子网络的精准调控密切相关。小鼠胰腺发育第一阶段,Pdx1、Ptf1a及Sox9调控祖细胞增殖和胰芽生长;第二阶段,Ngn3、Pdx1、Ptf1a、Sox4、Sox9调控MPCs的分化,形成内外分泌祖细胞群,为胰腺正常发育奠定基础;第三阶段,Pdx1、GATA6、Ptf1a控制腺泡、导管和胰岛的形态及功能成熟。各转录因子在胰腺的不同发育阶段发挥相应的功能,从而使胰腺完成分化发育过程。对各时期转录因子的了解,有利于针对胰腺发育不全的监控提出新方向,同时可以推动1型糖尿病、胰腺癌的治疗进展。因此,本文针对小鼠胰腺不同发育阶段及关键转录因子(Pdx1、Ptf1a、Ngn3、Sox4、Sox9、GATA6)对早期胰腺发育和胰腺细胞命运起决定性的调节作用的表达及其作用的相关机制研究进展进行综述。

人YAP1基因亚型的质粒构建及表达鉴定

目的:构建人Yes相关蛋白1(YAP1)基因亚型1δ、2δ的真核表达载体并进行瞬时表达鉴定,为研究YAP1亚型间的区别及其在肿瘤中的作用打下基础。方法:在已有pCI_2-Flag-YAP1-2γ质粒的基础上,利用重叠PCR增加碱基的方法得到YAP1-2δ的片段,再同理删减WW基因序列得到YAP1-1δ片段,通过Cla I和Sal I两个酶切位点将片段和pCI_2载体相连接,构建pCI_2-Flag-YAP1-1δ及pCI_2-Flag-YAP1-2δ质粒。利用测序确认完整的DNA序列。在HEK293细胞中瞬时转染质粒,用Western blot方法检测YAP1两个亚型的蛋白表达。结果:重组质粒经双酶切和基因测序比对鉴定正确,HEK293细胞经瞬时转染表达出YAP1-1δ和YAP1-2δ蛋白。结论:成功构建了pCI_2-Flag-YAP1-1δ及pCI_2-Flag-YAP1-2δ真核表达质粒,并在HEK293细胞内过表达成功。为进一步探讨YAP1各亚型对肿瘤发展的影响奠定基础。

FGF10信号通路与肺发育及相关疾病机制的研究进展

成纤维细胞生长因子10(Fibroblast growth factor 10,FGF10)在小鼠肺发育早期就开始在远端肺芽间质细胞中动态表达。FGF10表达时空性特征对FGF10通过其主要受体FGFR2b,参与诱导肺芽的发生、肺分枝的形成及肺泡的发育至关重要。FGF10的表达水平受多条信号通路调控,T-box转录因子4(Tbx4)低表达会降低FGF10的转录水平,进而抑制肺芽的形成;高水平的音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)可下调FGF10信号,降低脂原型成纤维细胞(Lipofibroblast,LIF)的分化;成骨蛋白4(Bone morphogenesis protein 4,Bmp4)与FGF10之间的反馈调节可控制上皮-间质细胞间"交流"从而促进气道平滑肌细胞(Airway smooth muscle cells,ASMCs)的形成以及肺芽生长。FGF10表达缺失可加重支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia,BPD)、慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)、特发性肺纤维化疾病(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)等疾病的发生发展。该综述主要总结了FGF10在肺发育过程和相关肺疾病中的作用及进展。

组织和时间特异性表达的钙黏蛋白-16

钙黏蛋白-16(CDH-16)是非典型的钙黏蛋白超家族成员,其表达具有明显的时空特异性,主要分布在肾脏和甲状腺,Cdh-16转录产物也暂时性出现在小鼠胚胎时期的生殖管道和肺上皮。迄今为止的研究表明,CDH-16与组织完整性、胚胎发育密切相关,并参与维持组织正常代谢、影响癌症发生等过程,但其具体的作用机制仍不清楚。本文对CDH-16的结构、功能、组织分布及其基因表达的时空调控进行了综述,以期为将来更深入地探究这一蛋白在不同生物学进程中的作用机制提供理论基础。

USP10与肺发育及相关疾病

泛素特异性蛋白酶10(ubiquitin-specific protease 10,USP10)作为去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUBs)家族的重要成员之一,通过去泛素化数十种底物蛋白调节多种细胞功能。USP10的异常表达参与多种病理进程,如肿瘤恶化、造血功能障碍、非酒精性脂肪肝、纤维化等。最近的研究显示,USP10在肺癌以及其他肺部疾病如囊性纤维化(cysticfibrosis,CF)中发挥重要作用。因此,本文对USP10的生物功能和调节机制进行系统的回顾与总结,为进一步探索其在疾病治疗方面的潜力提供新的见解。本综述将重点讨论USP10从肺发育到肺癌以及肺部纤维化的潜在作用及可能机制。

抑癌基因DCC在肺癌中的表达及杂合性丢失

为探讨结肠癌缺失基因（ＤＣＣ）与肺癌发病的关系，利用半定量的逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了７例肺癌患者（４例鳞癌和３例腺癌）癌组织及正常肺组织中ＤＣＣ基因ｍＲＮＡ的表达，发现４例肿瘤组织中ＤＣＣ基因表达明显低于对照肺组织。７例标本分析结果表明肺癌组织中ＤＣＣ基因的表达水平为正常肺组织的４５％左右。对上述７例及另外８例标本的两个多态位点进行ＰＣＲ杂合性丢失（ＬＯＨ）分析，信息性个体占９例，其中５例表现杂合性丢失：２例在ＭｓｐＩ限制性长度多态片段（ＲＦＬＦ），３例为可变数量串连重复序列（ＶＮＴＲ）。本结果证明在肺癌组织中存在ＤＣＣ基因表达低下及ＬＯＨ改变，提示其可能为肺癌发病的易感基因之一。

IONIZING RADIATION-INDUCED IL-Ia, IL-6 AND GM-CSF PRODUCTION BY HUMAN LUNG CANCER CELLS

A cell line derived from human lung cancer(AOI) was employed in the present study.A panel of cytokines were quantified by ELISA technique following cellular exposure to X-irradiation.

EXPERIMENTAL RADIOTHERAPY AND METASTASIS OF HUMAN LUNG CANCER XENOGRAFTS IN NUDE MICE

Using a cell line derived from human lung cancer (AOI), we successfully established human xenografts in KSN nude mice, which showed high incidence of multiple spontaneous metastases. The highest incidence of metastasis in untreated hosts was observed in the spleen followed by the lungs and lymph nodes. The rate of metastasis reached 100% in the mice bearing large sized tumors, when metastasis to any organ or tissue was counted. Experimental radiotherapy caused remarkable redistribution of metastatic foci among different organs. Lung metastasis tended to decrease, while metastasis to the liver and the kidney was increased after radiotherapy. Radiation-induced production of cytokines was speculated to be responsible for such an alteration of metastasis pattern.

高中地理选修教学中学生自主学习能力的培养

高中地理选修模块在高考中所占分值较少,学科地位相对较低,导致很多学生对地理选修课程缺乏主动学习的意识。本文以《旅游地理》为例,阐述了高中地理选修课程学习的意义,重点从有趣的导入、情境化的问题、小组竞赛、利用地理课程资源四个方面论述自主学习能力的培养对策。

核酸适配体技术及其在肿瘤诊断和治疗中的应用

核酸适配体是一类通过指数富集的配体系统进化(SELEX)技术获得的具有独特三维构象的小分子RNA或单链DNA。核酸适配体能高亲和力和高特异性与靶点结合,同时具有自身分子质量小、免疫原性低、热/化学稳定性高、靶标分子范围广等特点,广泛应用于疾病诊断、治疗、生物传感器、生物标志物筛选、新药研发等领域。综述近年来核酸适配体在肿瘤诊断和治疗方面的应用,并对核酸适配体的临床研究现状、市场前景及面临挑战和发展趋势作简要分析。

成纤维细胞生长因子受体及相关抗肿瘤靶向药物的研究进展

成纤维细胞生长因子受体(FGFR)作为受体酪氨酸激酶超家族的成员,通过调控细胞的增殖、分化和存活,对胚胎发育、组织修复及代谢调控等生理功能发挥重要作用。FGFR基因扩增、基因突变、基因融合引起的表达及调控异常与多种癌症发生发展有关,因而,FGFR成为癌症治疗中一个重要的潜在靶点。目前针对FGFR的靶向药物研究及应用取得实质性进展,其中一些药物已被批准用于临床治疗或处于临床试验阶段。概述FGFR家族,总结FGFR在肿瘤中的异常表达以及FGFR靶向药物的发展。

Parkin调控凋亡、坏死性凋亡和焦亡的研究进展

细胞的死亡有多种形式,包括凋亡、坏死性凋亡、焦亡等,各具有独特的分子特征,发挥着不同的功能。近年来,对各种死亡形式的功能和机制研究不断深入,围绕着细胞死亡途径的特征分子及其调控取得重要进展。Parkin作为E3泛素连接酶,通过其对底物的泛素化修饰,而发挥多种生物学功能。除了其被熟知的介导线粒体自噬途径之外,近年的研究还发现Parkin通过直接泛素化修饰多种"死亡"特征分子调控细胞死亡进程和肿瘤的发生。该文综述了Parkin参与调控细胞死亡进程的作用和方式,对其以线粒体自噬依赖和非依赖的方式调控细胞死亡的机制深度解析,以揭示细胞死亡相关的分子生物学奥秘。

成纤维细胞生长因子在小鼠胰腺发育中的作用

成纤维细胞生长因子(FGFs)家族与胰腺的发育密切相关。小鼠胰腺发育期间,FGFs与胰腺发育相关的转录因子协同调控祖细胞的增殖、分化,对祖细胞的分化方向具有极大的指导性。同时,对腺泡、导管和胰岛的形态演变及功能成熟也具有一定的调控作用。其中,FGF21主要调控胰岛功能成熟,FGF2、FGF4、FGF7以及FGF10在胰腺发育前期发挥主要作用,调控胰腺谱系形成。通过对胰腺发育与FGFs之间的相互作用及其研究进展展开综述,为胰腺相关疾病的研究提供参考。