【目的】本研究旨在克隆获得家蚕Bombyx mori Caspase家族基因,并通过RNAi技术初步分析其在家蚕细胞水平细胞凋亡中的功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Caspase家族一个新基因,用...【目的】本研究旨在克隆获得家蚕Bombyx mori Caspase家族基因,并通过RNAi技术初步分析其在家蚕细胞水平细胞凋亡中的功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Caspase家族一个新基因,用RNAi和流式细胞术初步分析该基因在家蚕细胞凋亡中的功能。【结果】将克隆获得的家蚕Caspase家族基因命名为Bm Caspase-X,其全长为2 105 bp,开放阅读框长为1 494 bp,编码497 aa,分子量为57.8 k Da,等电点为5.29。Bm Caspase-X含有Caspase特有的结构位点。系统进化分析表明,Bm Caspase-X与家蚕ICE同其他昆虫Caspase-4同源物先聚在一起,再与具有长前体结构域的昆虫其他因子聚为一类。RNAi初步结果显示该基因干扰后没有出现明显的细胞凋亡。【结论】Bm Caspase-X具有典型Caspase特征,属于Caspase家族成员。目前RNAi实验结果表明Bm Caspase-X未能引起家蚕细胞凋亡的改变。本文为进一步研究该基因的功能奠定基础。展开更多
【目的】本研究旨在获得家蚕Bombyx mori Bcl-2家族同源基因,并分析其在不同组织和发育阶段的时空表达模式及功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Bcl-2家族基因Bm Buffy,利用SSR分...【目的】本研究旨在获得家蚕Bombyx mori Bcl-2家族同源基因,并分析其在不同组织和发育阶段的时空表达模式及功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Bcl-2家族基因Bm Buffy,利用SSR分子标记连锁分析确定其染色体定位。同时,用RT-PCR和q PCR技术分析该基因在家蚕幼虫及变态期间不同组织中的表达。【结果】克隆获得全长家蚕Bcl-2家族同源基因Bm Buffy,证明该基因位于第4号染色体上,开放阅读框长879 bp,编码292 aa,预测其分子量大小为32.4 k Da,等电点为9.94,且第130-231位氨基酸之间存在1个Bcl-2_like Superfamily结构域。系统进化发育树表明,其与黑腹果蝇Drosophila melanogaster的Dm Buffy关系最近,氨基酸序列一致性为27%。Bm Buffy在幼虫组织中的表达结果显示,其在马氏管中表达量最高,而且在不同组织变态期的关键时间点均有明显变化。【结论】家蚕Bm Buffy具有Bcl-2家族典型结构域,Bm Buffy定位于第4号染色体上,Bm Buffy在家蚕变态期的组织生理变化中起到一定作用。本文为进一步研究家蚕Bcl-2家族基因的功能奠定基础。展开更多
文摘【目的】本研究旨在克隆获得家蚕Bombyx mori Caspase家族基因,并通过RNAi技术初步分析其在家蚕细胞水平细胞凋亡中的功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Caspase家族一个新基因,用RNAi和流式细胞术初步分析该基因在家蚕细胞凋亡中的功能。【结果】将克隆获得的家蚕Caspase家族基因命名为Bm Caspase-X,其全长为2 105 bp,开放阅读框长为1 494 bp,编码497 aa,分子量为57.8 k Da,等电点为5.29。Bm Caspase-X含有Caspase特有的结构位点。系统进化分析表明,Bm Caspase-X与家蚕ICE同其他昆虫Caspase-4同源物先聚在一起,再与具有长前体结构域的昆虫其他因子聚为一类。RNAi初步结果显示该基因干扰后没有出现明显的细胞凋亡。【结论】Bm Caspase-X具有典型Caspase特征,属于Caspase家族成员。目前RNAi实验结果表明Bm Caspase-X未能引起家蚕细胞凋亡的改变。本文为进一步研究该基因的功能奠定基础。
文摘【目的】本研究旨在获得家蚕Bombyx mori Bcl-2家族同源基因,并分析其在不同组织和发育阶段的时空表达模式及功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Bcl-2家族基因Bm Buffy,利用SSR分子标记连锁分析确定其染色体定位。同时,用RT-PCR和q PCR技术分析该基因在家蚕幼虫及变态期间不同组织中的表达。【结果】克隆获得全长家蚕Bcl-2家族同源基因Bm Buffy,证明该基因位于第4号染色体上,开放阅读框长879 bp,编码292 aa,预测其分子量大小为32.4 k Da,等电点为9.94,且第130-231位氨基酸之间存在1个Bcl-2_like Superfamily结构域。系统进化发育树表明,其与黑腹果蝇Drosophila melanogaster的Dm Buffy关系最近,氨基酸序列一致性为27%。Bm Buffy在幼虫组织中的表达结果显示,其在马氏管中表达量最高,而且在不同组织变态期的关键时间点均有明显变化。【结论】家蚕Bm Buffy具有Bcl-2家族典型结构域,Bm Buffy定位于第4号染色体上,Bm Buffy在家蚕变态期的组织生理变化中起到一定作用。本文为进一步研究家蚕Bcl-2家族基因的功能奠定基础。
